纯化含有期望的蛋白的样品的方法，包括以下步骤：(i)提供具有带正电的多孔颗粒的填充色谱柱，(ii)将所述柱平衡至样品的期望的蛋白待洗脱的条件，(iii)将样品与填充色谱柱接触使得上样至填充色谱柱的样品体积小于或等于填充色谱柱内带正电的多孔颗粒的颗粒间空间，(iv)从填充色谱柱洗脱期望的蛋白，其中期望的蛋白处在更纯的状态并处在平衡填充色谱柱的条件；其中期望的蛋白是抗体、抗体片段、抗体衍生物或抗体融合蛋白。(没有合适的附图)。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】纯化含有期望的蛋白的样品的方法，包括以下步骤：(i)提供具有带正电的多孔颗粒的填充色谱柱，(ii)将所述柱平衡至样品的期望的蛋白待洗脱的条件，(iii)将样品与填充色谱柱接触使得上样至填充色谱柱的样品体积小于或等于填充色谱柱内带正电的多孔颗粒的颗粒间空间，(iv)从填充色谱柱洗脱期望的蛋白，其中期望的蛋白处在更纯的状态并处在平衡填充色谱柱的条件；其中期望的蛋白是抗体、抗体片段、抗体衍生物或抗体融合蛋白。(没有合适的附图)。【专利说明】采用具有多形式官能性的颗粒对免疫球蛋白G制备物的色 谱纯化 专利
本专利技术涉及用于蛋白纯化的方法，并且更具体地涉及抗体和源于抗体的片段、片 段性构建体和FC-融合蛋白的纯化。它进一步涉及用于降低来自抗体和片段、以及病毒、 DNA和内毒素的抗体聚集体（同源聚集体）和抗体-污染物复合体（异源聚集体）水平的 方法。它进一步涉及将这些能力与其它纯化方法整合以实现期望的最终纯化水平。 专利技术背景 具有带电表面的固体材料一般广泛用于蛋白纯化领域，并且特别是用于抗体纯 化。这些材料通常包括所谓的离子交换剂，其通常被用于两种上样形式中的任一种。在结 合-洗脱（bind-elute)模式，样品和离子交换剂被平衡至允许抗体结合的条件。与带电表 面相互作用较弱或根本不发生相互作用的污染物不能结合并被消除。比抗体更强发生相互 作用的污染物结合得更强。在洗去未结合的污染物之后，可以通过增加盐浓度对柱进行洗 脱。这允许以增强的与离子交换剂进行相互作用的强度进行结合物质种类的分级分离，从 而实现抗体的高度纯化。在流-穿（flow-through)模式中，样品和离子交换剂均被平衡至 阻止抗体结合的条件。比抗体与离子交换剂进行更强相互作用的物质种类被结合并从而被 去除，但是比抗体结合更弱的物质种类流穿过柱并作为污染物持续存在。对于人、人源化 或嵌合IgG单克隆抗体，大部分结合-洗脱上样是在阳离子交换剂（带负电表面）上进行 的。大部分流-穿上样是在阴离子交换剂（带正电表面）上进行的。两种模式都是在各种 固相结构上呈现的带电表面上进行，包括填充于柱的多孔或非多孔颗粒，或直接加至大体 积水溶性样品，或在单块材料（monolith)或膜上。这些不同结构赋予不同流体性质、能力 (capacity)和分辨率，但是不管物理形式，流-穿或结合-洗脱色谱的限定（defining)化 学特征是恒定的。两种方法都依赖于在样品被引入至柱之前，将离子交换剂和样品平衡至 相同的条件。 已经描述了一种称为高性能切向流过滤（HPTFF)的方法，其中在具有截断值 为大约100至大约300kDa的超滤膜表面上产生了正电荷〇3111^18 6丨31.，]\]^111131\Sci. (2007) 297: 16-etseq.；vanReisU.S.PatentNo. 7, 001, 550；vanReiset al. ,J.Membr.Sci. (1999) 159:133-etseq.；Boltonetal. ,Adv.Filtr.Sep.Technol. (1999) 13A:537-etseq.；Burnsetal. ,J.Membr.Sci. (1999)64:27~etseq.；Mehtaet al.，CEP(2008) 104 (5) :S14_etseq.)。当粗制IgG单克隆抗体样品被引入窄范围的pH和 电导率内时，IgG被膜表面排斥，并因此被阻止穿过孔。大多数污染物种类或与表面结合或 通过对流传质（convectivemasstransport)穿过孔，并因此被消除。该方法还允许抗体 的浓缩，尽管这样的浓缩依赖于在它被上样至膜之前将抗体平衡至操作条件。这些操作条 件一般由弱碱性至近中性pH和低电导率组成。过度的电导率可能会阻断静电相互作用并 通过膜孔引起IgG损失。该方法的能力可能会被结合至膜的酸性污染物的比例所限制，因 为它们中和膜上的电荷。这可能会削弱或暂停抗体排斥，并引起抗体与污染物一起穿过孔 而丢失。因此，与应用于传统离子交换剂的结合-洗脱和流-穿上样类似，HPTFF依赖于在 进行该技术之前样品的平衡和操作条件。目前，HPTFF仅应用于膜上样。它的流体-循环 方式可能会妨碍其被应用于单块材料或填充颗粒的柱。 另一种方法采用与化学官能性（functionalities)组合的混合模式的色 谱介质(Erikssonetal.,Bioprocess.Inti. (2009)7:52~etseq.；Bresolinet al.,J.Chromatogr.B(2010)878:2087-etseq.；deSouzaetal.,J.Chromatogr. B(2010)878:557-etseq.)。尽管在根据二级官能性的特性（nature)的不同化学条件 下，这些介质材料的一些包括正电荷并被应用于作为离子交换剂的相同形式中，即，以结 合-洗脱和流_穿模式。又一种方法是将物理官能性与化学官能性组合。一个这样的例子 采用可变尺寸排阻官能性连同多孔颗粒阴离子交换材料（Hunteretal.，J.Chromatogr. A(2000) 897: 65-etseq.；Hunteretal. ,J.Chromatogr.A(2000) 897: 87~etseq.； Hunteretal. ,J.Chromatogr.A(2001)930:79-etseq.；Hunteretal. ,J.Chromatogr. A(2002)971:105-etseq.)。该方法一般涉及蛋白以尺寸依赖的方式进入颗粒孔，同时也展 示对蛋白电荷以及缓冲液条件的依赖性。尽管它并未被应用于纯化或减少抗体聚集，该方 法已经被用于结合并洗脱IgG型抗体。 带正电的可溶性聚合物（聚烯丙胺、聚精氨酸）和某些二价阳离子（依沙 吖啶、金属离子）已经被用于从抗体制备物共沉淀带负电的污染物（Thdmmes etal.,in:U.Gottschalk(ed. ),ProcessScalePurificationofAntibodies,J. WileyandSons,Hoboken, (2009) 293~etseq.；MaetalJ.Chromatogr. B(2010)878:798-etseq.；Perametal. ,Biotechnol.Progr. , (2010)26:1322-etseq.； Glynn, ,inU.Gottschalk(ed. ),ProcessScalePurificationofAntibodies,J. T.WileyandSons,Hoboken, (2009) 309~etseq.；Farhneretal. ,U.S.Patent ApplicationNo. 20080193981；Maetal. ,J.Chromatogr.B(2010)878:798-etseq.； Cordesetal. ,Biotechnol.Progr., (1990)6:283-etseq. ；Dissing,etal. ,B ioseparation, (1999), 7:221-etseq.；BernhardtU.S.Pat本文档来自技高网...
【技术保护点】
纯化含有期望的蛋白的样品的方法，包括以下步骤：(i)提供具有带正电的多孔颗粒的填充色谱柱，(ii)将所述柱平衡至样品的期望的蛋白待洗脱的条件，(iii)将样品与所述柱接触使得上样至所述柱的样品体积小于或等于所述柱内带正电的多孔颗粒的颗粒间空间，(iv)从所述柱洗脱期望的蛋白，其中期望的蛋白处在更纯的状态并处在平衡所述柱的条件；其中期望的蛋白是IgG抗体、IgG抗体片段、IgG抗体衍生物或IgG抗体融合蛋白。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：彼得·斯坦利·加尼翁，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG
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