本发明专利技术涉及融合蛋白或编码所述融合蛋白的核酸用于制造希望用于预防或治疗由局部缺血引起的病状的药物的用途，所述融合蛋白包含具有膜转导性质的肽序列和具有细胞存活性质的肽序列。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】融合蛋白用于预防或治疗由 局部缺血引起的病状的用途本专利技术涉及融合蛋白或编码所述融合蛋白的核酸用于制造旨在 预防或治疗由局部缺血引起的病状的药物的用途。胱天蛋白酶(caspase )活跃地促成局部缺血诱导的脑损伤的累 积的证据(Friedlander， 2003)促进了临床前研究的重要发展 (0nt6niente, 2004)。然而，局部缺血发生后施用的合成的胱天蛋白 酶抑制剂对神经衰退(neurological failure)的限制主要是在轻度 局部缺血损伤的情况下获得的(Plesnila和Moskowitz， 2000)，提高 其稳定性、特异性和功效的进一步发展正在进行中。此外，考虑到局 部缺血性细胞死亡机制的复杂性，不可能只通过抑制胱天蛋白酶来提 供有效的细胞保护作用。胱天蛋白酶的大部分内源性抑制剂是IAP家族的成员。XIAP是其 最有效的成员(Vaux和Silke， 2003),具有比合成的肽(Deveraux等 人，1999)更大的胱天蛋白酶抑制能力，这极可能归因于其复杂的结 构。XIAP具有3个杆状病毒IAP重复(BIR)结构域(其中两个(BIR2 和BIR3)与胱天蛋白酶相互作用)和被赋予E3酶活性的C00H末端 really interesting new gene (RING)锌指基序(Yang等人，2000)， 所述锌指基序标记靶以使其在泛素/蛋白酶体途径中被降解。？其中一 些靶是胱天蛋白酶-3和XIAP本身(Huang等人，2000)。除了胱天蛋白 酶的抑制以外，XIAP还参与几个信号转导途径的调节(Lewis等人， 2004)，和激活转录因子NF-KB的DNA结合(Holcik等人，2001)。该 调节作用为XIAP提供了独特的神经保护作用，XIAP的过表达表现出 对抗因复杂的病因学如卒中和缺血性心脏病引起的损伤的有前景的策 略。XIAP是不穿过血脑屏障(BBB)的62kDa的蛋白。因此，已通过病毒介导的过表达(Xu等人，1999)或使用转基因小鼠(Trapp等人，2003) 对XIAP在卒中的神经保护潜能进行分析。本专利技术的主要目的是提供将膜转导性质赋予具有细胞存活性质 的肽序列的药物组合物，所述药物组合物旨在用于预防或治疗由局部 缺血引起的病状，更明确地由心肌或脑缺血引起的病状。本专利技术涉及下列物质用于制造用于预防或治疗由局部缺血引起 的病状的用途-包含或由下列序列组成的融合蛋白*至少一个具有膜转导性质的肽序列，和 *至少一个具有细胞存活性质的肽序列；或 -通过插入、缺失或置换至少一个氨基酸从所述融合蛋白衍生 的同源蛋白，只要所述同源蛋白相对于所述融合蛋白呈现至少85%， 优选至少89%的同一性百分数且显示膜转导和细胞存活性质，或 -编码所述融合蛋白或所述同源蛋白的核酸序列。 可根据Dowdy等人(Methods 24:247-256， 2001)，通过用荧光素 异硫氰酸盐(FITC)直接标记融合蛋白或通过使用抗HA抗体，然后使用 荧光二抗的免疫组织化学进行标记，之后使用荧光激活细胞分选术计 数已整合融合蛋白的细胞来估量上述的转导性质。可在通过细胞凋亡试剂、低氧或缺氧缺糖诱导细胞死亡后向细胞 培养物中加入所述蛋白，然后通过细胞凋亡特异性标记例如磷脂酰丝 氨酸的外化或乳酸脱氢酶的产生来定量凋亡细胞的数目或通过定量存 活细胞的数目来在体外估量上述细胞存活性质。可通过在用多种刺激 物(包括局部缺血、细胞凋亡诱导物或外伤性损伤)诱导变性 (degeneration)后定量组织中存活细胞的数目或通过定量组织丢失 的总体积来在体内估量细胞的存活性质。细胞存活性质包括胱天蛋白酶的抑制的性质。可通过在体外向对 于胱天蛋白酶是特异性的底物中加入所述蛋白或通过将来自用该蛋白 处理的组织的提取物与特异性胱天蛋白酶底物反应来在体外估量所述胱天蛋白酶的抑制性质(Benchoua等人，J. Neurosci. 21:7127-7134， 2001)。本专利技术更明确地涉及上述融合蛋白或如上定义的来源于所述融于制造药二^用途:、所述药物结旨在预;方或治:'由、心肌缺:引起的病状。本专利技术更明确地涉及如上定义的融合蛋白(其中具有膜转导性质 的肽序列是HIV TAT蛋白的蛋白转导结构域(PTD))用于制造希望用于 预防或治疗由心肌缺血引起的病状的药物的用途。本专利技术更明确地涉及如上定义的融合蛋白(其中具有膜转导性质 的肽序列是由SEQ ID NO: 2表示的HIV TAT蛋白的蛋白转导结构域 (PTD))用于制造希望用于预防或治疗由心肌缺血引起的病状的药物 的用途。本专利技术更明确地涉及如上定义的融合蛋白用于制造希望用于预 防或治疗由心肌缺血引起的病状的药物的用途，在所述融合蛋白中， 具有细胞存活性质的肽序列选自-X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)或其具有细胞存活性质 的片段例如XIAP的BIR2、 BIR3-RING或BIR3-RING连接体结构域，或 -Flice抑制蛋白(FLIP)或其具有细胞存活性质的片段。 XIAP或FLIP蛋白或其片段优选是哺乳动物的蛋白，更优选是人 蛋白。XIAP蛋白的BIR2结构域是与BIR1和BIR2之间的连接体序列结 合的XIAP的第二 BIR结构域。BIR2结构域具有胱天蛋白酶抑制的性 质.XIAP蛋白的BIR3-RING结构域是XIAP的第三BIR结构域和 Really Interesting New Gene锌指结构域的联合体，包括两个结构 域之间的连接体区域。BIR3-RING连接体结构域是将XIAP的BIR3和RING结构域分开的 连接体结构域。本专利技术更明确地涉及如上定义的融合蛋白用于制造希望用于预 防或治疗由心肮缺血引起的病状的药物的用途，在所述融合蛋白中，具有存活性质的肽序列选自<table>table see original document page 13</column></row><table>连接体结构域，-由SEQ ID NO: 38 (人)表示的BIR3和RING结构域之间的连 接体结构域，-由SEQ ID NO: 14(FlipL)(小鼠)表示的FLIP，-由SEQ ID NO: 16(FlipS)(小鼠)表示的FLIP，-由SEQ ID NO: 18(Flip对照)(小鼠)表示的FLIP。本专利技术更明确地涉及如上定义的融合蛋白用于制造希望用于预 防或治疗由心肌缺血引起的病状的药物的用途，其中融合蛋白选自-由SEQ ID NO: 20表示的PTD-XIAP，其相应于SEQ ID NO: 2 与SEQ ID NO: 4的融合物，-由SEQ ID NO: 22表示的PTD-XIAP，其相应于SEQ ID NO: 2 与SEQ ID NO: 6的融合物，-由SEQ ID NO: 24表示的PTD-BIR2，其相应于SEQ ID NO: 2 与SEQ ID NO: 8的融合物，-由SEQ ID NO: 46表示的PTD-BIR2，其相应于SEQ ID NO: 2 与SEQ ID NO: 44的融合物，-由SEQ ID NO: 26表示的PTD-BIR3-RING，其相应于SEQ ID NO: 2本文档来自技高网...
【技术保护点】
下列物质用于制造希望用于预防或治疗由局部缺血引起的病状的用途：－包含或由下列序列构成的融合蛋白：＊至少一个具有膜转导性质的肽序列，和＊至少一个具有细胞存活性质的肽序列；或－通过插入、缺失或置换至少一个氨基酸从所述融合蛋白衍生的同源蛋白，只要所述同源蛋白相对于所述融合蛋白呈现至少８５％，优选至少８９％的同一性百分数且显示膜转导和细胞存活性质，或－编码所述融合蛋白或所述同源蛋白的核酸序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：B昂特尼恩特，C谷厄甘，J布劳德奥，C克瑞奥德，
申请(专利权)人：国家健康医学研究所，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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