本发明专利技术涉及针对HCV的新构象抗体以及更特别地涉及单克隆抗体。本发明专利技术还涉及易于被所述抗体识别的颗粒的组合物，以及涉及包含它们的药物组合物。本发明专利技术还涉及HCV有包膜的亚病毒颗粒或纯化的HCV有包膜的完整病毒颗粒，以及制备它们的方法。
【技术实现步骤摘要】
针对丙型肝炎病毒E1E2复合体的抗体、HCV颗粒的组合物和药物组合物本申请为申请号为200480008734. 9，申请日为2004年3月31日的同名申请的分案申请。本专利技术涉及抗HCV的新构象(conformational)抗体以及更特别地涉及单克隆抗体。本专利技术还涉及易于(liable)被所述抗体识别的颗粒的组合物，以及涉及包含它们的药物组合物。本专利技术还涉及HCV有包膜的亚病毒颗粒或纯化的HCV有包膜的完整病毒颗粒， 以及制备它们的方法。丙型肝炎病毒(HCV)感染是慢性肝炎和肝硬化的主要原因，并且可导致肝细胞癌。世界范围内约200百万人慢性感染HCV，这种疾病已经作为ー种严重的全球健康问题显现出来。HCV是ー种有包膜的RNA病毒,属于黄病毒科的肝炎病毒属。其基因组是9. 6kb正极性单链RNA，具有作为内部核糖体进入位点起作用的5’非翻译区(UTR)，编码大约3，000 个氨基酸的多蛋白(polyprotein)的单一可读框以及3' UTR(Bartenschlager等,2000)。 这种多蛋白在翻译同时和之后通过宿主细胞肽酶切割产生包括核心蛋白及包膜糖蛋白El 和E2的结构蛋白，以及通过病毒蛋白酶产生非结构蛋白(NS) 2-5B (Bartenschlager等， 2000)。与相关的正链RNA病毒类似，通过负链RNA中间体的方式发生复制并且由NS蛋白催化，其形成质膜附着的复制酶复合体。患者血浆样品中存在的HCV颗粒的水平低以及缺乏支持有效HCV复制或颗粒装配的细胞培养系统妨碍了表征与病毒体相关的糖蛋白。当前关于HCV包膜糖蛋白的知识是基于利用病毒或非病毒表达载体的细胞培养物瞬时表达试验。这些研究已经显示了 El和E2 糖蛋白相互作用形成复合体(DubuissonJOOO中的综述)。存在非离子去污剂时，检测到两种形式的E1E2复合体通过非共价相互作用稳定的E1E2异ニ聚体和异质的ニ硫键连接的聚集物，后者被认为代表错误折叠的复合体。以前，通过用合成肽或重组抗原免疫已经获得了包膜糖蛋白特异性抗体。然而，构象敏感性E2反应性单克隆抗体(mAb) (H2)-其识别被认为是HCV糖蛋白异ニ聚体的天然萌芽前(prebudding)形式的非共价连接的E1E2异ニ聚体-不与血清来源的HCV RNA阳性颗粒反应(Deleersnyder等，1997)。此外，WO 92/07001 公开了通过用从感染的黒猩猩中提取的HCV颗粒制剂免疫小鼠而制备的抗体，然而这些抗体未曾在天然HCV颗粒(即，源自感染患者)上进行测试。此外，WO 00/05266公开了从感染患者B细胞制备的抗体，然而这些抗体是根据它们结合重组E2蛋白的能力选择的。因此， 所有这些抗体的应用都有限，或者用于诊断目的，或者用于治疗或预防目的，因此它们是用非天然HCV或其部分生产或选择的，而且未显示出可与天然HCV颗粒相互作用。缺乏含有足够量和浓度的天然有包膜的HCV颗粒的HCV制剂，是迄今为止无法获得易于识别天然HCV颗粒的抗体的原因之一。实际上，血浆样品中低水平的HCV颗粒使表征和显现观察这种病毒变得困难。先前已经显示了在感染的急性期从自然感染患者的血浆中回收的病毒在蔗糖中具有大约1.06g/ml的浮力密度(Hijikata等，1993)。相比之下， 体外复制后从细胞培养物中回收的HCV在蔗糖中具有I. 12g/ml的浮力密度(Yoshikura 等，1996)。最后，从慢性感染个体中回收的HCV在蔗糖中具有大约I. 17g/ml的浮力密度3(Hijikata等，1993)。血清来源病毒的低密度归因于其结合血清低密度脂蛋白(Thomssen 等，1992)。已经显示高密度病毒与抗原-抗体复合物中结合到病毒的抗体有关(Kanto等， 1995)。尽管有这些数据，但是仍然没有表明这些不同HCV群的蛋白组成，以及是否低密度级分(く 1.0g/ml)含有包膜、RNA和核壳作为完整病毒体。因此，本专利技术的ー个目的是提供与天然HCV颗粒反应的抗体。本专利技术的另一方面是提供天然HCV颗粒的组合物，其量和浓足以允许有效免疫抗体产生动物。本专利技术的另一方面是提供缺乏感染性，易于用作药物组合物的活性物质的特定 HCV组合物。专利技术详述本专利技术涉及能特异性结合天然HCV病毒包膜的构象抗体。措辞“构象抗体”指识别具有由其分子环境所限定的三维结构的表位的抗体。措辞“特异性结合”意思是抗体结合到基本上仅在形成天然HCV病毒包膜的元件之一上发现的表位，也就是说，基本上不存在抗体与除形成天然HCV包膜的元件外的元件的结合。例如,可通过本领域技术人员公知的方法检验抗体的结合特异性,如Western印迹实验，其中生物样品在凝胶上通过电泳迁移，然后转移到膜上并且与所述抗体共孵育，其然后通过ニ抗检测。如果实质上所检测的所有电泳条带都含有靶化合物或其部分，则称所述抗体“特异性结合”所述生物样品中包含的靶化合物。“HCV”意思是“丙型肝炎病毒”，其具体描述于Choo等(1989，1991)中。HCV特别地包括RNA、由核心蛋白构成的衣壳以及包含脂质和蛋白特别是糖蛋白的包膜。“HCV病毒包膜”由脂质和蛋白特别是糖蛋白如HCV蛋白El和E2构成(Clarke， 1997)。“天然的”意思是HCV，或其部分，是如同在生物样品中发现的，可能地是如同从生物样品中分离的以及-如果需要的话-纯化的。这种样品可以是感染HCV的患者的血液、 血浆或者血清。特别地，“天然的”指HCV，或其部分，其不是通过重组方法，或者通过使用细胞系或动物生产的，并且不同于在例如Schalich等(1996) ,Blanchard等，(2002)或WO 92/07001中所描述的HCV元件。本专利技术更特别地涉及能特异性结合天然HCV E2蛋白的构象抗体。HCV E2 特别地描述于 Dubuisson(2000)和 Op De Beeck 等(2001)中。其作为多蛋白(3012个氨基酸)产生，经过切割产生E2 (384到714位氨基酸)。措辞“特异性结合”意思是抗体结合基本上仅在HCV E2蛋白上发现的表位，或其部分。特别地，在其中抗体-E2复合物与其它蛋白共同存在的竞争试验中，不能将该抗体从 HCV E2蛋白上脱离下来。措辞“天然HCV E2蛋白”意思是该蛋白是如同在感染HCV患者的生物样品中发现的，特别地天然HCV E2蛋白不是重组蛋白。本专利技术涉及如上所定义的构象抗体，其能够中和患者中的HCV感染。“中和HCV感染”意思是该抗体能够改善感染HCV患者的健康，例如，可通过血液、 血浆或血清中检测到的HCV的减少得到证实，或者该抗体能预防个体被HCV感染。可在模型动物中监测所述抗体中和HCV感染的能力，如黒猩猩或小鼠，特别是人源化小鼠，其慢性感染HCV，或者其在所述抗体存在时首先感染(primo-infectecOHCV。所监测的抗体应当能够分别诱导減少HCV相关的病毒血症或者预防HCV感染。本专利技术涉及如上所定义的构象抗体，能够沉淀在其共价或非共价形式下的HCV E1E2复合体。HCV E1E2复合体可以是非共价的，也就是说，El和E2通过弱键的方式结合，如氢键，离子键，范德瓦耳斯键或疏水键；或所述复合体可以是共价的，也就是说El和本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：MA·珀蒂，C·洛利夫雷雷诺，
申请(专利权)人：国家健康医学研究所，拜奥默里克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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