一种融合蛋白在化妆品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种融合蛋白在化妆品中的应用，该融合蛋白包括一种透皮肽和人干细胞生长因子hSCGF，透皮肽通过连接肽或共价连接到hSCGF的N端或C端。本发明专利技术的融合肽可以更容易的穿过完整皮肤，可以保持其良好的生物活性及肌肤吸收率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种融合蛋白在化妆品中的应用，属于日化产品领域。
技术介绍
干细胞是人体的起源细胞，是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞，有“万能细胞”之美誉。人类衰老的根本原因在于干细胞本身的衰老，干细胞生成新细胞的活力会随着年龄的增长而逐渐降低，因此肌肤就会渐渐失去弹性、老化、暗淡等衰老现象。hSCGF可以快速激活休眠的皮肤干细胞并促使其生长，让皮肤干细胞达到活化、修复、再生的能力，调节体内微环境，为皮肤干细胞提供有力的生长环境。但hSCGF作为一种生物活性蛋白，在涂抹情况下很难被皮肤吸收，限制了其在化妆品领域的应用。随着现代透皮技术的发展，增强透皮效果成为可能，现常用的促透技术可以分为两大类，一类为化学促透技术，另一类为物理促透技术。化学促透技术主要是通过在透皮制剂中加入化学成分，改变皮肤角质层结构，溶解皮脂或打开毛孔、毛囊，促进药物在皮肤中的扩散与溶解，促进皮肤各部位的血液流畅等手段来提高药物吸收效率。物理促透技术主要是通过一些物理手段来破坏皮肤表层结构，使一些亲水性的大分子如蛋白药物直接到达皮肤内部发挥治疗效果，但是其对设备要求高，应用并不广泛。透皮增强肽是一种能够促进蛋白质透皮的短肽，现已发现的有TD1，其氨基酸序列为：ACSSSPSKHCG；SPACE,其氨基酸序列为：ACHSALTKHCG；T2，其氨基酸序列为：LVGVFH。但现有技术中未有透皮增强肽用于化妆品的报道。
技术实现思路
为克服现有技术的缺点和不足，本专利技术提供了一种融合蛋白及其在化妆品中的应用方法，该融合蛋白包括一种透皮肽和人干细胞生长因子hSCGF，透皮肽通过连接肽或共价连接到hSCGF的N端或C端。本专利技术发现透皮肽可以促进干细胞生长因子透皮肽穿过完整皮肤，从而提高干细胞生长因子的肌肤吸收率。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下的技术方案：一种融合蛋白，其结构为A-B-X,或A-A-B-X,或A-B-X-B-A；所述A为一种透皮肽，选自TD1、SPACE或T2；所述B为共价键或长度为2-25个氨基酸的连接肽；X为人干细胞生长因子hSCGF。所述A优选为TD1。所述人干细胞生长因子优选根据人hSCGF全长基因序列（GenBankAccessionNO.BC005810.2）克隆得到。优选的，所述A共价连接到hSCGF的N端。优选的所述A为TD1，且A共价连接到hSCGF的N端。优选的，所述融合蛋白通过Ni2+的ChelatingSegparoseFastFlow纯化得到。更具体的，所述融合蛋白通过如下方法制备得到：从健康的新生儿或小儿包皮环切术切除的包皮组织中提取总RNA，根据人SCGF全长基因序列（GenBankAccessionNO.BC005810.2）设计PCR引物F1，F2；F1：GAGTCCAGCTTAATGC，F2：AAGACACTAACAAGGAGGAG，RT-PCR扩增SCGFcDNA，共价连接将TD1（透皮肽）连接至hSCGF的N端，得到了TD1-hSCGF融合基因；将其克隆入原核表达质粒pET-22b（+），构建表达载体pET-22b-TD1-hSCGF，将表达质粒转化E.coliRosetta（DE3），TD1-hSCGF融合蛋白通过Ni2+的ChelatingSegparoseFastFlow纯化，获得纯化的融合蛋白。上述融合蛋白在化妆品中的应用，其特征是：通过化妆品生产工艺将上述融合蛋白添加到化妆品中，其中，每100g化妆品的TD1-hSCGF添加量为1μg~30μg，纯度大于90%。本专利技术的融合蛋白在化妆品中的应用，其特征是：所述的化妆品包括护肤、健肤、功效性的美容化妆品。本专利技术的融合蛋白在化妆品中的应用，其特征是：所述的化妆品包括护肤、健肤、功效性的美容产品包括柔肤水、乳液、活性原液、抗衰眼霜、活力面膜、润肤霜、冻干粉。一种含一种或几种本专利技术融合蛋白的活性原液，按质量百分比计，包括以下组分：卡波9400.1-0.5%尿囊素0.05-1.0%1.3丁二醇2.0-10.0%三乙醇胺0.1-2.0%K-1000.05-0.2%PC-3050.05-0.2%香精0.001-0.02%可溶性蛋白多糖0.1-10.0%融合蛋白0.000001-0.0003%一种含一种或几种本专利技术融合蛋白修护网肽膜，按质量百分比计，包括以下组分：卡波20200.1-1.0%1.3丁二醇2.0-10.0%甘油2.0-8.0%尿囊素0.05-0.5%芦荟提取液2.0-10.0%天来可GL0.1-2.0%G-plus0.05-0.2%融合蛋白0.000001-0.0003%一种含一种或几种本专利技术融合蛋白的玻尿酸精华乳，按质量百分比计，包括以下组分：16/18醇0.1-2.0%A-1650.1-1.0%M-680.5-5.0%角鲨烷1.0-5.0%白油1.0-10.0%DC-2000.1-5.0%甘油2.0-10.0%丙二醇2.0-10.0%汉生胶0.05-0.5%S-3050.1-1.0%香精0.005-0.2%K-1000.05-0.2%透明质酸0.01-0.5%拉丝剂0.001-0.01%融合蛋白0.000001-0.0003%一种含一种或几种本专利技术融合蛋白冻干粉，按质量百分比计，包括以下组分：甘露醇注射液0-6.0%海藻糖0.1-5.0%透明质酸0.01-0.4%Q100.05-0.2%红景天提取液2.0-8.0%融合蛋白0.000001-0.0003%本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：本专利技术通过将透皮肽连接至hSCGF，构建融合蛋白，并将其应用于化妆品领域。本专利技术的融合蛋白可以很容易的穿过完整皮肤，可以保持良好的生物活性及肌肤吸收率。附图说明图1hSCGF对人成纤维母细胞的促生长作用；图2hSCGF对人角质细胞的增殖作用。具体实施方式现结合具体实施例详细说明本专利技术，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1TD1-hSCGF融合蛋白的获得所述的融合蛋白通过如下方法制备得到：从健康的新生儿或小儿包皮环切术切除的包皮组织中提取总RNA，根据人hSCGF全长基因序列（GenBankAccessionNO.BC005810.2）设计PCR引物F1，F2；F1：GAGTC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种融合蛋白，其结构为A‑B‑X,或A‑A‑B‑X,或A‑B‑X‑B‑A；所述A为一种透皮肽，选自TD1、SPACE或T2；所述B为共价键或长度为2‑25个氨基酸的连接肽；X为人干细胞生长因子hSCGF，所述人干细胞生长因子根据人hSCGF全长基因序列（GenBank Accession NO.BC005810.2）克隆得到。

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其结构为A-B-X,或A-A-B-X,或A-B-X-B-A；所述A为一种透皮肽，选自
TD1、SPACE或T2；所述B为共价键或长度为2-25个氨基酸的连接肽；X为人干细胞生长因子
hSCGF，所述人干细胞生长因子根据人hSCGF全长基因序列（GenBankAccession
NO.BC005810.2）克隆得到。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，所述A为TD1，所述A共价连接到hSCGF的N端。
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其通过Ni2+的ChelatingSegparoseFastFlow纯
化，获得融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白通过如下方法制备得
到：从健康的新生儿或小儿包皮环切术切除的包皮组织中提取总RNA，根据人hSCGF全长基
因序列（GenBankAccessionNO.BC005810.2）设计PCR引物F1，F2；F1：GAGTCCAGCTTAATGC，
F2：AAGACACTAACAAGGAGGAG，RT-PCR扩增hSCGFcDNA，共价连接将TD1（透皮肽）连接至hSCGF
的N端，得到了TD1-hSCGF融合基因；将其克隆入原核表达质粒pET-22b（+），构建表达载体
pET-22b-TD1-hSCGF，将表达质粒转化E.coliRosetta（DE3），TD1-hSCGF融合蛋白通过Ni2+的ChelatingSegparoseFastFlow纯化，获得融合蛋白。
5.根据权利要求1-4所述的任一种融合蛋白在化妆品中的应用，其特征是：通过化妆品
生产工艺将所述融合蛋白添加到化妆品中，其中，每100g化妆品的融合蛋白的含量为1μg~
30μg，纯度大于90%。
6.根据权利要求5所述的应用，所述的化妆品包括护肤、健肤功效性的美容化妆品，所
述的化妆品包括柔肤水、乳液、活性原液、抗衰眼霜、活力面膜、润肤霜、冻干粉等。
7.含有一种或几种权利要求1-6所述的融合蛋白的活性原...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈松彬，倪彦艳，张爱萍，吴纯玲，
申请(专利权)人：广州市科玮生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44