The invention discloses a method for in vitro amplification of tumor stem cells, proliferation of tumor stem cells is designed to solve the problem of poor quality of the stem cell traditional in vitro; the technical proposal is an in vitro tumor stem cell method, comprising the following steps: Step 1: take a serum-free medium, and the non serum culture add 20 35mg/L medium B27, 10 IFO and 1 25mg/L 3mg/L MPF; step 2: the medium is heated to 37 DEG C, and sterilized by ultraviolet; step 3: under sterile conditions, the tumor tissue into the culture medium and the same to the mixing; step 4: to add in 0.5mg/L 3 Accutase, and every four hours to add one, each time more than the previous 0.1mg/L, each Accutase to add a stirring direction reverse regulation; step 5: the incubation time was centrifuged at 20 35h after Tumor stem cell. The invention relates to a method for in vitro amplification of tumor stem cells, which has high quality of stem cells.
【技术实现步骤摘要】
体外扩增肿瘤干细胞的方法
本专利技术涉及细胞培养领域,更具体地说,特别涉及体外扩增肿瘤干细胞的方法。
技术介绍
肿瘤干细胞是具有“自我复制”(Self-Renewal)以及“具有多细胞分化”(Differentiation)等能力的细胞,通常这类的细胞被认为有形成肿瘤,发展成癌症的潜力,特别是随着癌症转移出去后,产生新型癌症的来源,由于肿瘤干细胞的存在数量极少,因此很难被发现,抗癌药物也很难对其产生效果,因此为了能够尽早攻克肿瘤,需要对肿瘤干细胞进行研究,体外扩增肿瘤干细胞的技术也就应运而生。目前,公开号为CN103571792A的中国专利公开了一种体外扩增肿瘤干细胞的方法及其加工方法,其首先确定所需体外扩增肿瘤干细胞于生物体内所处环境的基质刚度,然后利用海藻酸盐凝胶支架包埋所需体外扩增肿瘤细胞,使包埋后的凝胶支架的基质刚度为上步中所确定的肿瘤干细胞所处环境的基质刚度的90-110%,最后进行包埋后肿瘤细胞的体外三维培养,以实现肿瘤干细胞的体外扩增,但是由于肿瘤干细胞在培养的过程中发生分化,从而形成干性较小的其他细胞,并且通过肿瘤干细胞分化出来的细胞能够在培养基中进行正常的生长,所以最终所得到的细胞群中就会包括有一定的分化细胞,并使得肿瘤干细胞的质量较差。因此,需要提出一种新的方案来解决上述问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足,本专利技术的目的在于提供体外扩增肿瘤干细胞的方法,通过除去分化出来的细胞而使得肿瘤干细胞的质量更高。为实现上述目的,本专利技术提供了如下技术方案:一种体外扩增肿瘤干细胞的方法,包括有以下步骤:步骤1:取无血清培养基,并向无血清培 ...
【技术保护点】
一种体外扩增肿瘤干细胞的方法,其特征在于:包括有以下步骤:步骤1:取无血清培养基,并向无血清培养基中添加20‑35mg/L的 B27 ,10‑25mg/L的IFO以及1‑3mg/L 的MPF;步骤2:将培养基升温至37℃,并通过紫外线进行杀菌;步骤3:在无菌条件下将肿瘤组织移入到培养基中并同向搅拌;步骤4:向步骤3中添加0.5mg/L的Accutase,并且每隔四小时添加一次,每次比上次多0.1mg/L,每添加一次Accutase搅拌的方向反向调节;步骤5:培养时间在20‑35h后进行离心分离,得到肿瘤干细胞。
【技术特征摘要】
1.一种体外扩增肿瘤干细胞的方法,其特征在于:包括有以下步骤:步骤1:取无血清培养基,并向无血清培养基中添加20-35mg/L的B27,10-25mg/L的IFO以及1-3mg/L的MPF;步骤2:将培养基升温至37℃,并通过紫外线进行杀菌;步骤3:在无菌条件下将肿瘤组织移入到培养基中并同向搅拌;步骤4:向步骤3中添加0.5mg/L的Accutase,并且每隔四小时添加一次,每次比上次多0.1mg/L,每添加一次Accutase搅拌的方向反向调节;步骤5:培养时间在20-35h后...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈继冰,吴振化,
申请(专利权)人:浙江译美生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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