新的糖脂佐剂组合物制造技术

本发明专利技术涉及含有糖脂类、弱酸、醇、非离子表面活性剂和缓冲液的稳定的佐剂稀释剂储备溶液和最终的佐剂溶液的组合物及其制备方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利说明新的糖脂佐剂组合物 专利
本专利技术涉及新的糖脂佐剂组合物及其使用方法和制备方法。本专利技术中这些新的组合物长时间稳定而无絮凝。它们尤其有助于包括疫苗在内的多种药物的释放。
技术介绍
疫苗通常用于保护人类和兽医学的动物免于感染由细菌、病毒和寄生生物体引起的传染病。尽管用于疫苗的抗原可为任一种药剂，但其通常由已杀死的病原性生物体、虽存活但经修饰或减毒的病原性生物体、蛋白、重组蛋白或其片段构成。无论抗原的来源如何，通常有必要添加佐剂以增强宿主对抗原的免疫应答。 佐剂用于实现两个目的:它使抗原自注射位点的释放减慢且刺激免疫系统。 文献中所报道的第一个佐剂为弗氏完全佐剂(FCA)。FCA含有油包水乳液和分枝杆菌提取物。分枝杆菌提取物以天然形式提供免疫刺激性分子。油包水乳液产生储存作用，抗原在其中缓慢释放。不理想的是，FCA耐受性差且其可引起失控性炎症。自从80多年前发现FCA以来，人们已努力地减少佐剂的不良副作用。 已知糖脂类似物含有具有佐剂性质的一类新化合物。美国专利4,855,283，(下文为‘283)公开了糖脂类似物的合成，该糖脂类似物包括N-糖基酰胺，N-糖基脲，N-糖基氨基甲酸酯和特定的化合物:N-(2-脱氧-2-L-亮氨酰基氨基-β-D-吡喃葡萄糖基)-N-十八烷基十二酰胺乙酸盐(称为Bay R1005，O Lockhoff，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.(1991)30:1611-1620)。‘283专利中所述的化合物尤其适于用作佐剂。 糖脂佐剂制剂(formulation)需易于制造且当长期储存时稳定而无脂质组分絮凝。糖脂酰胺或糖基酰胺的非乙酸盐形式为高度不溶性的，且通常在室温或较低温度下储存时自溶液絮凝。 本文所提供的包含糖基酰胺的溶液和佐剂极少絮凝且极其稳定。它们易于制造且可以商业规模制备。液体糖脂佐剂制剂可用作再水合冷冻干燥抗原制剂的稀释剂。提供即时测试和通过加速稳定性测试方法测试这些制剂的稳定性的方法。 专利技术概述 本专利技术包含糖基酰胺储备溶液与糖脂佐剂溶液的组合物及其制造或生产方法。糖基酰胺储备溶液是通过将式1的糖脂溶解于醇中并结合适量弱酸加上“非离子”表面活性剂制备。将弱酸加入糖脂醇溶液中，其相对于糖脂为摩尔过量的。在一实施方案中，糖脂为N-(2-脱氧-2-L-亮氨酰基氨基-β-D-吡喃葡萄糖基)-N-十八烷基十二酰基酰胺水合乙酸盐(hydroacetate)。在一实施方案中，醇为乙醇。在一实施方案中，弱酸为乙酸。在一实施方案中，非离子表面活性剂为各种脱水山梨糖醇 或聚氧乙烯脱水山梨糖醇 尤其为脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Span )和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween )。糖脂佐剂溶液通过将适量糖基酰胺储备溶液引入“适当的缓冲液”中制备。本文所述的稳定的糖脂佐剂溶液的最终pH值应介于约6与约8之间。较佳的最终pH值介于约6与约7之间。描述了介于约6.3与约6.4之间的最终pH值。应避免超过30mM的NaCI高盐浓度的糖脂佐剂。 以下更详细的举例说明这两种溶液: 糖基酰胺储备溶液为包含下列各物质的组合物: a)式I的糖脂， 其中式I为 其中: R1为氢或具有至多20个碳原子的饱和烷基； X为-CH2-、-O-或-NH-； R2为氢或具有至多20个碳原子的饱和烷基； R3、R4和R5独立地为氢、-SO42-、-PO42-、-COC1-10烷基； R6为L-丙氨酰基、L-α-氨基丁基、L-精氨酰基、L-天冬酰胺酰基、L-天冬氨酰基、L-半胱氨酰基、L-谷氨酰基、L-甘氨酰基、L-组氨酰基、L-羟丙基、L-异亮氨酰基、L-亮氨酰基、L-赖氨酰基、L-甲硫氨酰基、L-鸟氨酰基、L-苯丙氨酰基、L-脯氨酰基、L-丝氨酰基、L-苏氨酰基、L-酪氨酰基、L-色氨酰基和L-缬氨酰基或它们的D-异构体； 该糖脂为盐的形式，其中该盐的形式衍生自弱酸； b)醇，其中该醇为HO-C1-3烷基； c)弱酸，其中1)该弱酸相对于糖脂含量为摩尔过量的；且2)为使用标准表或标准值pKa值介于约1.0与约9.5之间的任何酸；和 d)非离子表面活性剂，其中该非离子表面活性剂为降低使其溶解的材料的表面张力的试剂且具有一种疏水性组分和另一种亲水性组分。 糖脂佐剂溶液为含有下列各物质的组合物: a)糖基酰胺储备溶液；和 b)合适的缓冲液，其中该缓冲液适于兽医或医疗用途且可在水溶液中维持约6.0与约8.0之间的相对恒定的pH值。 专利技术详述 除另外说明的之外，该说明书和权利要求中所使用的下列术语具有如下含义: 术语“醇”指下式化合物:HO-C1-3烷基。其可为甲醇、乙醇或任何形式的丙醇，如正丙醇或异丙醇。优选乙醇。 术语“烷基”指直链和支链的饱和烃部分。 术语“糖脂”指下式I的化合物。这些化合物描述于美国专利6,290,971和1989年8月8日颁布的美国专利4,855,283中。美国专利6,290,971与美国专利4,855,283均全文引用在此作为参考。本文特定描述的糖脂在呈乙酸盐形式时具有的商标名为Bay 和化学名为“N-(2-脱氧-2-L-亮氨酰基氨基-β-D-吡喃葡萄糖基)-N-十八烷基十二酰胺乙酸盐”。此化合物的酰胺形式具有的商标名为Bay15- 和化学名为“N-(2-脱氧-2-L-亮氨酰基氨基-β-D-吡喃葡萄糖基)-N-十八烷基十二酰胺”。 式I的糖脂为: 式I 其中 R1为氢或具有至多20个碳原子的饱和烷基； X为-CH2-、-O-或-NH-； R2为氢或具有至多20个碳原子的饱和烷基； R3、R4和R5独立地为氢、-SO42-、-PO42-、-COC1-10烷基； R6为L-丙氨酰基、L-α-氨基丁基、L-精氨酰基、L-天冬酰胺酰基、L-天冬氨酰基、L-半胱氨酰基、L-谷氨酰基、L-甘氨酰基、L-组氨酰基、L-羟丙基、L-异亮氨酰基、L-亮氨酰基、L-赖氨酰基、L-甲硫氨酰基、L-鸟氨酰基、L-苯丙氨酰基、L-脯氨酰基、L-丝氨酰基、L-苏氨酰基、L-酪氨酰基、L-色氨酰基和L-缬氨酰基或它们的D-异构体； 或其药学上可接受的盐。 另一特定实施方案描述了式1的糖脂，其中: R1为氢或饱和C12-18烷基； R2为氢或饱和C7-11烷基； X为-CH2； R4和R5独立地为氢； R6选自L-亮氨酰基； 式I的变量是分开的且独立的，且所有变量的组合均于此描述并要求保护。 在另一实施方案中，糖脂为式II(a)所述的糖脂: 式II(a) 在另一实施方案中，糖脂为式II(b)所述的糖脂: 式II(b) 在另一实施方案中，糖脂具有式III的结构: 式III 式III化合物可以酰胺形式或乙酸盐形式存在。此化合物的酰胺形式具有商标名Bay 15- 乙酸盐形式具有商标名Bay 式I的糖脂可使用下列选自美国专利4,855,283的步骤制备。 正如从式1看到的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含：　ａ）式Ⅰ的糖脂，　其中式Ⅰ为　＊＊＊　其中　Ｒ↑［１］和Ｒ↑［２］独立地为氢或具有至多２０个碳原子的饱和烷基；　Ｘ为－ＣＨ↓［２］－、－Ｏ－或－ＮＨ－；　Ｒ↑［２］为氢或具有至多２０个碳原子的饱和或不饱和烷基；　Ｒ↑［３］、Ｒ↑［４］和Ｒ↑［５］独立地为氢、－ＳＯ↓［４］↑［２－］、－ＰＯ↓［４］↑［２－］、－ＣＯＣ↓［１－１０］烷基；　Ｒ↑［６］为Ｌ－丙氨酰基、Ｌ－α－氨基丁基、Ｌ－精氨酰基、Ｌ－天冬酰胺酰基、Ｌ－天冬氨酰基、Ｌ－半胱氨酰基、Ｌ－谷氨酰基、Ｌ－甘氨酰基、Ｌ－组氨酰基、Ｌ－羟丙基、Ｌ－异亮氨酰基、Ｌ－亮氨酰基、Ｌ－赖氨酰基、Ｌ－甲硫氨酰基、Ｌ－鸟氨酰基、Ｌ－苯丙氨酰基、Ｌ－脯氨酰基、Ｌ－丝氨酰基、Ｌ－苏氨酰基、Ｌ－酪氨酰基、Ｌ－色氨酰基和Ｌ－缬氨酰基或它们的Ｄ－异构体；　该糖脂为盐的形式，其中该盐的形式衍生自弱酸；　ｂ）醇，其中该醇为ＨＯ－Ｃ↓［１－３］烷基；　ｃ）弱酸，其中该弱酸是１）相对于糖脂含量为摩尔过量的，且２）使用标准表或标准值ｐＫａ（Ｋａ的－ｌｏｇ）值介于１．０与９．５之间的任何酸；　ｄ）非离子表面活性剂，其中该非离子表面活性剂为一种降低使其溶解的材料的表面张力的试剂且具有一种疏水性组分和另一种亲水性组分。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：PJ多米诺夫斯基，RM曼南，S麦迪拉塔，
申请(专利权)人：辉瑞产品公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]