新颖的佐剂组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含三萜、固醇、免疫调节剂、聚合物及Ｔｈ２刺激剂的多种组合的佐剂配制物；用于制备该佐剂组合物的方法；及该佐剂配制物在含有不同抗原的免疫原性组合物和疫苗组合物中的用途。本发明专利技术还涉及该配制物在动物治疗中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新颖的佐剂组合物专利技术背景 专利
本专利技术一般涉及用于增强对抗原的免疫应答的新颖的佐剂配制物，该新颖的佐剂 配制物用于免疫原性和疫苗组合物中，但不在受试者中产生毒性或不想要的副作用。本发 明还涉及所述佐剂、免疫原性组合物及疫苗组合物的制备方法和用途。相关技术的历史和描述细菌、病毒及寄生虫感染广泛分布于人和动物。由这些感染剂引起的疾病通常对 抗微生物药学疗法具有抗性，使得无有效的治疗方法。因此，愈来愈多人使用疫苗学方法以 控制传染病。完整的传染性病原体可在经化学灭活或合适的遗传工程处理后变得适用于疫 苗配制物。或者，可将病原体的蛋白质亚基在重组表达系统中表达并纯化，以用于疫苗配制 物中。疫苗可通过在组合物中包含合适的佐剂而变得更有效。使用疫苗学方法以治疗动物和人的癌症的兴趣亦持续增加。用于治疗癌症的所述 治疗途径涉及以包含肿瘤特异性抗原及佐剂的疫苗为癌症患者接种疫苗。然而，研发中的 许多具有此性质的疫苗无一被主管机关批准。疫苗并未显示出可缩小肿瘤——此为癌症药 物效力的标准度量。术语“佐剂”一般是指增加对抗原的体液或细胞性免疫应答的任何物质。佐剂被 用于达成二个目的其减缓抗原从注射部位释出，且其刺激免疫系统。传统疫苗通常由灭活 或被杀死或经修饰的活致病微生物的粗制备物组成。与这些致病微生物的培养物相关的杂 质可作为增强免疫应答的佐剂。然而，以利用致病微生物或纯化的蛋白质亚基的同质制备 物作为抗原而制成的疫苗所激发出的免疫力通常不够。因此，加入某些外源物质(诸如佐 剂)变得必要。再者，制造合成及亚基疫苗很昂贵。加入佐剂可容许使用较小剂量的抗原 来刺激类似的免疫应答，从而减少疫苗的制造成本。因此，当将药剂与佐剂组合时可显著增 加某些可注射药剂的效力。在选择佐剂时必须考虑许多因素。佐剂应该以有效方式使抗原的释出和吸收速率 缓慢，且对宿主的毒性、变应原性、刺激及其它不想要的作用最小。为了使人满意，佐剂应为 非杀病毒性、可生物降解、可持续产生高水平的免疫力、能刺激交叉保护作用、可与多种抗 原兼容、在多种物种中有效、对宿主无毒且安全(如无注射部位反应)。其它期望的佐剂 特征为可微量给药、剂量节省、具有优良的货架稳定性、可承受干燥、可制成不含油、可作为 固体或液体存在、为等张性、容易制造且其制造并不昂贵。最后，高度期望能够根据疫苗接 种方案的需要而将佐剂配置成诱导体液或细胞免疫应答或二者兼有。然而，可符合上述条 件的佐剂的数量有限。佐剂的选择系取决于疫苗的需要，无论所述需要是增加抗体应答的幅度或功能、 增加由细胞介导的免疫应答、诱导黏膜免疫力或降低抗原剂量。已提出大量佐剂，然而，其 无一显示出理想适用于所有疫苗。第一种在文献中报导的佐剂为弗氏完全佐剂(Freimd' s Complete Adjuvant) (FCA)，其含有油包水乳液及分枝杆菌(mycobacterium)的提取物。不幸地，FCA的可耐受性差且可能引起无法控制的发炎。自从在超过80年前发现FCA起，人 们一直努力减少不想要的佐剂副作用。一些已作为佐剂使用的其它物质包括金属氧化物(如氢氧化铝)、明矾、盐的无 机螯合物、明胶、不同的石蜡型油、合成树脂、藻酸盐、类粘蛋白及多糖化合物、酪蛋白酸盐 及从血液衍生的物质诸如纤维蛋白凝块。虽然这些物质通常可有效刺激免疫系统，但由于 宿主中的不利作用(如产生无菌脓肿、损伤、致癌性或变应原性应答)或令人不满的药学 性质(例如物质从注射部位快速分散或分散控制不良，或膨胀)，因此无一令人完全满意。合成油及石油衍生物已被用作佐剂，因其显示出在体内分散得相对缓慢，但其可 能令人不满意，因其经常分裂成芳香烃，而此物质可能具致癌性。再者，这些物质中有些已 被发现能够产生无菌脓肿且可能永远无法从身体完全排出。当正确选择且调制成正确浓度 时，油可相对安全且无毒性。自南美洲皂树(Qui 1 laja saponaria)的树皮取得的皂苷已作为佐剂一段 时间° 见，Lacaille-Dubois, M and Wagner H. (A review of the biological and pharmacological activities of saponins。许多现今使用的兽医疫苗包含QuilA，其为来 自南美洲智利皂荚树(Quillaja saponaria moIina)的树皮的皂苷馏分。将Quil A进一 步分馏则产生次馏分，包括QS-7、QS-17、QS-18及QS-21。(见美国专利No. 5，057，540)。使用皂苷作为佐剂有多种缺点。皂苷为可溶性，因此刺激非特异性免疫应答。然 而，疫苗学的目的是刺激针对一种或多种特异性抗原的靶向应答。皂苷对胆固醇具有强亲 和力。其与细胞膜中所发现的胆固醇形成复合物而使细胞溶血。其亦显示出引起注射位点 坏死且难以配制成微粒构造。当用于含有经修饰的活包膜病毒的疫苗中时，皂苷可破坏病 毒被膜从而将病毒抗原灭活。为了克服Qui 1 A的溶血及杀病毒性质，现已将其与胆固醇和磷脂组合而形成称为 免疫刺激性复合物(ISCOM)或ISCOM基质(ISC0MATRIX)的特殊构造。见，Ozel M.，et al.； J. Ultrastruc. and Molec. Struc. Re 102，240-248 (1989)。当与抗原组合时，ISCOM 通常会 诱导Thl细胞毒性T细胞应答。然而，尽管大幅减弱Quil A的溶血性质，但Quil A与胆固 醇组合并不会完全消除此类性质。ISCOM的另一限制为蛋白质抗原必须具有足够大的疏水 结构域来与ISCOM交互作用，从而被并入ISCOM中。高度亲水的蛋白质无法被并入ISCOM 中。最后，ISCOM可在受试者内刺激不想要的自体免疫应答。免疫调节剂已被用作佐剂，其例子包括二甲基双十八烷基溴化铵(以下称“DDA”) 和拉韦定(avirdine)。DDA为亲脂性季铵化合物(胺)，其带有结合正电荷季铵分子的二 个18碳烷基链及二个甲基基团，分子量为631。其作为佐剂的用途由fell (Immunol. V. 11， p. 369,1966)发现。据报导，DDA可刺激强烈的经细胞介导的免疫应答，亦显示出可诱导 体液免疫应答。许多论文已发表，证明DDA作为蛋白质抗原、半抗原(hapten)、肿瘤、病 毒、原生动物及细菌的佐剂的效力。(见，Korsholm, K S.，et al.，Immunology, vol. 121， PP. 216-226,2007)。大部分研究已在实验室动物中进行，然而仅有少量在较大型的动物诸 如鸡(见,Katz, D.，et al. FEMSImmunol Med Microbiol. Vol 7(4) :303_313，1993)、猪和 牛中进行。DDA可在实验室动物以及较大型的动物中有效诱导延迟型超敏(DTH)反应。然 而，其在水中不易溶。聚合物亦已被用作佐剂，其例子包括二乙基-氨乙基(DEAE)-葡聚糖、聚乙二醇及聚丙烯酸(如(CARBOPOL ))。本领域中已知多糖DEAE-葡聚糖为非常强的佐剂。然 而，其与令人无法接受的反应原性(reactogenicity)有关。CARBOPOL 聚合物为丙烯 酸与聚链烯基醚本文档来自技高网...

【技术保护点】
免疫原性组合物，其包含佐剂配制物及免疫有效量的抗原成分，其中所述佐剂配制物包含皂苷、固醇、季铵化合物及聚合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/076,2322008年6月27日1.免疫原性组合物，其包含佐剂配制物及免疫有效量的抗原成分，其中所述佐剂配制 物包含皂苷、固醇、季铵化合物及聚合物。2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述皂苷的存在量为每剂量约1微克 至约5，000微克，所述固醇的存在量为每剂量约1微克至约5，000微克，所述季铵化合物的 存在量为每剂量约1微克至约5，000微克且所述聚合物的存在量为约0. 0001%体积比体积 (ν/ν)至约 75% ν/ν。3.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述皂苷为QuilA或其经纯化的馏 分，所述固醇为胆固醇，所述季铵化合物为二甲基双十八烷基溴化铵(DDA)且所述聚合物 为聚丙烯酸。4.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其还包含Th2刺激剂。5.根据权利要求4所述的免疫原性组合物，其中所述Th2刺激剂为糖脂。6.根据权利要求5所述的免疫原性组合物，其中所述Th2刺激剂为N-(2-脱氧 基-2-L-亮氨酰氨基-β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。7.根据权利要求5所述的免疫原性组合物，其中所述糖脂的存在量为每剂量约0.01毫 克至约10毫克。8.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述抗原成分包含灭活的病毒。9.制备根据权利要求1所述的免疫原性组合物的方法，所述方法包括a)在缓冲液中制备所述抗原成分的组合物；b)将所述皂苷加入步骤a的组合物中；c)将所述固醇加入步骤b的组合物中；d)将所述季铵化合物加入步骤c的组合物中；e)将所述聚合物加入步骤d的组合物中。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述皂苷为QuilA或其经纯化的馏分，所述固醇 为胆固醇，所述季铵化合物为DDA且所述聚合物为聚丙烯酸。11.根据权利要求9所述的方法，其还包括下述步骤将步骤a的组合物勻化，并在步 骤a至d的每个步骤期间持续勻化。12.根据权利要求11所述的方法，其还包括下述步骤，所述步骤包括将步骤d的组合物 微射流勻化。13.根据权利要求9所述的方法，其还包括步骤f)将Th2刺激剂加入步骤e的组合物中。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述Th2刺激剂为糖脂。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述Th2刺激剂为N-(2-脱氧基-2-L-亮氨酰 氨基- β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。16.疫苗组合物，其包含佐剂配制物及治疗有效量的抗原成分，其中所述佐剂配制物包 含皂苷、固醇、季铵化合物及聚合物。17.根据权利要求16所述的疫苗组合物，其中所述皂苷的存在量为每剂量约1微克至 约5，000微克，所述固醇的存在量为每剂量约1微克至约5，000微克，所述季铵化合物的存 在量为每剂量约1微克至约5，000微克且所述聚合物的存在量为约0. 0001% ν/ν至约75%18.根据权利要求16所述的疫苗组合物，其中所述皂苷为QuilA或其经纯化的馏分， 所述固醇为胆固醇，所述季铵化合物为DDA且所述聚合物为聚丙烯酸。19.根据权利要求16所述的疫苗组合物，其还包含Th2刺激剂。20.根据权利要求19所述的疫苗组合物，其中所述Th2刺激剂为糖脂。21.根据权利要求20所述的疫苗组合物，其中所述Th2刺激剂为N-(2-脱氧基-2-L-亮 氨酰氨基- β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。22.根据权利要求20所述的疫苗组合物，其中所述糖脂的存在量为每剂量约0.01毫克 至约10毫克。23.根据权利要求16所述的疫苗组合物，其中所述抗原成分包含灭活的病毒。24.制备根据权利要求16所述的疫苗组合物的方法，所述方法包括a)在缓冲液中制备所述抗原成分的组合物；b)将所述皂苷加入步骤a的组合物中；c)将所述固醇加入步骤b的组合物中；d)将所述季铵化合物加入步骤c的组合物中；e)将所述聚合物加入步骤d的组合物中。25.根据权利要求M所述的方法，其中所述皂苷为QuilA或其经纯化的级分，所述固 醇为胆固醇，所述季铵化合物为DDA且所述聚合物为聚丙烯酸。26.根据权利要求M所述的方法，其还包括下述步骤将步骤a的组合物勻化，并在步 骤a至d的每个步骤期间持续勻化。27.根据权利要求沈所述的方法，其还包括下述步骤，所述步骤包括将步骤d的组合物 微射流勻化。28.根据权利要求M所述的方法，其还包括将Th2刺激剂加入步骤e的组合物中的步 骤f)。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述Th2刺激剂为糖脂。30.根据权利要求观所述的方法，其中所述Th2刺激剂为N-(2-脱氧基-2-L-亮氨酰 氨基- β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。31.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其还包含油。32.根据权利要求16所述的疫苗组合物，其还包含油。33.根据权利要求1至8中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述抗原成分包含猫白血病病毒。34.根据权利要求9至15中任一项及权利要求M至30中任一项所述的方法，其中所 述抗原成分包含猫白血病病毒。35.根据权利要求16至23中任一项所述的疫苗组合物，其中所述抗原成分包含猫白血病病毒。36.根据权利要求35所述的疫苗组合物，其中所述猫白血病病毒的存在量为约100纳 克/毫升(含)至约350，000纳克/毫升(含)。37.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中所述抗原成分包含由持续受 KT-FeLV-UCD-I猫白血病病毒株感染的FL-74细胞系所制造的gp70。38.针对由猫白血病病毒引起的感染来治疗猫的方法，所述方法包括对所述猫施用根据权利要求35所述的疫苗组合物。39.如权利要求35所述的疫苗组合物在制备下述药物中的用途，所述药物用于针对由 猫白血病病毒引起的感染来治疗猫。40.用于卵内施用的禽球虫病疫苗，其包含(a)佐剂，所述佐剂包含QuilA或其包括QS21在内的经纯化的馏分、胆固醇、 CARB0P0L、DDA 及 R1005 ；及(b)选自下列的原生动物抗原(1)一或多种经重组表达的蛋白质，( 一或多种通过 常规手段从所述原生动物分离的蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：克多·马丁·巴吉，
申请(专利权)人：辉瑞有限公司，
类型：发明
国别省市：US