编码甲病毒属复制酶的表达载体及其作为免疫佐剂的用途制造技术

本发明专利技术涉及用作免疫系统调节佐剂的甲病毒属复制酶，特别是Ｓｅｍｌｉｋｉ森林病毒复制酶，或编码甲病毒属复制酶的表达载体，所述甲病毒属复制酶包含ＲＮＡ依赖型ＲＮＡ聚合酶活性。所述甲病毒属复制酶可与疫苗组合使用，提供佐剂功能，与向需要疫苗的对象仅施用疫苗时相比，当组合中存在所述甲病毒属复制酶时，所述甲病毒属复制酶能够对施用该组合的对象产生额外的免疫应答增强。本发明专利技术的目的在于提供一种有效且易于施用的与物种无关的佐剂，该佐剂优于与目前的疫苗组合施用的佐剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】编码甲病毒属复制酶的表达载体及其作为免疫佐剂的用途
本专利技术涉及免疫用品领域，特别涉及疫苗领域，并且涉及适用于疫苗组合物的佐剂。
技术介绍
为了在包括定居在如皮肤、肠道、上呼吸道和下呼吸道、泌尿生殖道等小生境中的大量微生物的环境中存活，哺乳动物的免疫系统已经进化。部分小生境如结肠和皮肤本质上被内源性微生物群占据，而其它小生境(内脏器官和下呼吸道)在免疫活性宿主内通常保持无菌。微生物可对宿主发挥积极作用，如很多肠道共生细菌。在其它情况下，微生物侵入对于宿主可能是有害的。这种消极作用取决于宿主免疫系统的情况-某些病原体(称作机会病原体)仅影响免疫系统受损的个体。微生物感染的潜在有害作用已经引起多种宿主防御机能的进化。在有颌类脊椎动物中，存在两种类型的防御：先天性免疫应答和适应性免疫应答。二者的主要区别在于用于识别病原体的受体类型、激发应答需要的时间延迟和是否存在记忆。这两类防御不能完全相互独立地进作。如在下文中所述，先天性免疫系统向适应性免疫系统发出特定信号，有助于激发对特定病原体最有效的应答；反之亦然，即适应性免疫系统也激活先天性免疫系统的部分模块。先天性免疫应答先天性免疫总是存在于健康的个体中，其主要功能在于阻止微生物和病毒侵入，以及快速除去成功侵入宿主组织中的病原体。先天性免疫为多细胞有机体提供即时保护。先天性免疫系统不是单一实体。该体系是在不同进化阶段出现的不同模块或子系统的集合：·产生抗微生物肽、防止宿主被病原体侵入的黏膜上皮；·针对细胞内细菌和细胞外细菌具有抗微生物机能的吞噬细胞；·在血液循环和体液中发挥作用的急性期蛋白和补体系统；·参与杀伤病毒感染的细胞的自然杀伤细胞；·参与抗多细胞寄生虫保护的嗜曙红细胞、嗜碱细胞和肥大细胞；·在病毒防御中起到关键作用的I型干扰素以及由其诱导的蛋白质。先天性免疫应答负责侵入微生物的早期检测和杀伤，并依赖于一组有限的胚系细胞编码的用于检测的模式识别受体(PRR)。为引发免疫应答，PRR识别病原相关分子模式(PAMP)，并诱导数个细胞外级联激活，例如导致炎症反应的补体途径和各种分子内信号途径。先天性免疫系统利用存在于三个不同分离部分的PRR，所述分离部分为：体液、细胞膜和细胞质。体液中的PRR在PAMP调理作用、补体途径的激活和某些情况下PAMP向其它PRR的转移中起主要作用。位于细胞膜上的PRR具有多种功能，例如呈递PAMP至其它PRR，促进通过吞噬作用进行的微生物摄取以及引发主信号途径。存在功能不同的多种PRR。最具特征的一种为Toll样受体(TLR)。识别病毒核酸和多种细菌产物的跨膜受体是产生初级信号的PRR，所述细菌产物包括脂多糖和脂磷壁酸(Akira，S2006)。另外，细胞质PRR可分为三类：干扰素(IFN)-诱导蛋白、胱天蛋白酶募集域(CARD)螺旋酶和核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体(NLR)。研究最充分的IFN诱导型抗病毒蛋白质为抗黏液病毒蛋白(Mx)家族、蛋白激酶R(PKR)、寡腺苷酸合成酶(2’-5’OAS)。这些抗病毒蛋白和CARD螺旋酶(例如RIG-I和Mda5)参与抗病毒防御。相反，NLR主要参与抗菌免疫应答。Toll样受体(TLR)TLR是PRR中最具特征的信号生成受体。其引发关键的炎症反应，并形成适应性免疫。哺乳动物中已知的所有TLR(TLR1-11)均为I型膜内在糖蛋白，所述膜内在糖蛋白包括负责配体识别的细胞外亮氨酸富集重复(LRR)结构域以及用于引发信号的细胞质Toll-白细胞介素-1受体同源(TIR)结构域。TLR识别细菌、真菌、寄生虫和含核酸病毒中非常不同的微生物成分。尽管通常存在于质膜中以检测细胞外的PAMP，但是包括TLR3、TLR7、TLR8和TLR9的少量TLR识别细胞内部分(例如核内体)的配体。后者中的TLR共有核酸识别能力，以检测dsRNA(双链RNA)(TLR3)、ssRNA(单链RNA)(小鼠中的TLR7，人体中的TLR8)和非甲基化CpGDNA基序(TLR9)。TLR通过募集四个含TIR结构域的衔接分子：MyD88、TIRAP、Trif和TRAM的不同组合引发共有信号途径和不同的信号途径。除TLR3以外，所有其它TLR募集髓样分化因子88(MyD88)，所述MyD88与IL受体相关激酶(IRAK)家族的成员有关(MouldySioud2006)。这些信号途径激活核转录因子κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)，所述AP-1是所有TLR共有的，导致炎性细胞因子和趋化因子的产生。这些信号途径还激活TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9中的干扰素调节因子-3(IRF3)和/或IRF7，其为产生I型干扰素(如IFN-α和IFN-β)的先决条件(ForreviewEdwardsetal2007，Vercammenetal2008，MedzitovR2007)。除先天性宿主防御机能的直接活化外，部分PRR与适应性免疫应答的诱导相结合。适应性免疫系统中的两种主要细胞，即T细胞和B细胞，表达具有随机特性的抗原结合受体，从而识别缺失任何指示其来源的固有特征的抗原。因此，T淋巴细胞和B淋巴细胞需要标示其所识别的抗原的来源的指示。这些指示以PRR诱导型特征信号的形式来自先天性免疫系统。对于T细胞，该联系通过树突状细胞进行解释。I型干扰素参与树突状细胞的活化和迁移(在抗病毒应答中更加详细地描述)。当活化树突状细胞迁移至淋巴结时，其将源于病原体的抗原与PRR诱导的信号一起呈递至T细胞。这导致T细胞活化，并使T辅助(Th)细胞分化成多种效应Th细胞(Th1细胞、Th2细胞和Th-17细胞)中的一种。例如TLR衔接(TLR-engagement)通过树突状细胞诱导IL-12的产生，这指示Th细胞分化成Th1细胞。从而，这类效应应答(effectorresponse)由先天性免疫系统指令。另外，I型干扰素还直接或间接地通过诱导IL-15的产生来调节细胞毒T细胞和NK细胞的功能。先天性免疫系统还从适应性免疫系统中接收正反馈信号。例如，效应Th细胞产生适宜的细胞因子，所述细胞因子活化先天性免疫系统的特定模块：巨噬细胞由Th1细胞分泌的细胞因子(干扰素-γ)活化，嗜中性粒细胞由Th-17细胞(白介素-17)活化，肥大细胞和嗜碱细胞由Th2细胞(白介素-4和白介素-5)活化。同样地，结合抗体(lgG)活化补体蛋白，并通过调理病原促进吞噬作用。适应性免疫系统适应性免疫系统使用较宽范围的分子进行活化。其中部分分子还用于先天性免疫系统，如补体蛋白，包括抗原特异性B细胞和T细胞受体的其它物质仅适用于适应性免疫系统。适应性免疫系统区别于先天性免疫的最重要的性质在于B细胞受体和T细胞受体的良好特异性，和应答的更加缓慢的发展以及对先前暴露于抗原的记忆。后一性质形成了疫苗接种的基础-通过减毒的病原体、病原体的选定成分或以其它方式(例如通过编码来自病原体的选择抗原的DNA-疫苗)模拟感染引发免疫系统，导致免疫记忆的发展，在遭遇病原体时，更加迅速和更加有效地引起应答。存在两类适应性免疫，体液免疫和细胞介导免疫。体液免疫通过B细胞介导。活化的B细胞开始向血液循环和黏膜液(mucosalfluid)中分泌受体，在此情况下将其称作抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲病毒属复制酶，所述复制酶包含ＲＮＡ依赖型ＲＮＡ聚合酶，并用作用于调节免疫系统的佐剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US61/071,8982008年5月23日1.甲病毒属复制酶在制备免疫系统调节佐剂中的用途，所述复制酶包含RNA依赖型RNA聚合酶，其中，没有为所述佐剂提供包含用于与复制酶佐剂的RNA依赖型RNA聚合酶相互作用的顺式信号的甲病毒属模板RNA。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述甲病毒为Semliki森林病毒。3.根据权利要求2所述的用途，其中所述复制酶的氨基酸序列与SEQIDNO:1具有至少99％的一致性。4.根据权利要求3所述的用途，其中所述复制酶在nsP2区域突变，产生在SEQIDNO:1的1185-1187位点的突变体RRR>RDR。5.根据权利要求3所述的用途，其中所述复制酶在nsP2区域突变，产生在SEQIDNO:1的1185-1187位点的突变体RRR>AAA。6.根据权利要求1-5任一项所述的用途，其中所述复制酶与药学上可接受的赋形剂和/或成分一起配制。7.根据权利要求1-5任一项所述的用途，其中所述复制酶存在于疫苗组合物中。8.根据权利要求1-5中任一项中所定义的甲病毒属复制酶在制备用于调节免疫系统的佐剂中的用途，其中，所述复制酶由表达载体编码，没有为所述佐剂提供包含用于与所述复制酶的RNA依赖型RNA聚合酶相互作用的顺式信号的甲病毒属模板RNA。9.根据权利要求8所述的用途，其中所述复制酶由SEQIDNO:4编码。10.根据权利要求9所述的用途，其中所述表达载体为pRSV-Nsp1234、pRSV-RDR或者pRSV-AAA。11.根据权利要求8所述的用途，其中所述表达载体为DNA载体。12.根据权利要求8-11任一项所述的用途，其中编码所述复制酶的所述表达载体与药学上可接受的赋形剂和/或成分一起配制。13.根据权利要求8-11任一项所述的用途，其中所述复制酶存在于疫苗组合物中。14.权利要求1-13中的任一项中所定义的甲病毒属复制酶用于制备预防和/或治疗传染性疾病的药物的用途，所述复制酶在疫苗组合物中，其中，没有为所述药物提供包含用于与所述复制酶的RNA依赖型RNA聚合酶相互作用的顺式信号的甲病毒属模板RNA。15.根据权利要求14所述的用途，其中所述疫苗组合物用于细菌性疾病的预防和/或治疗。16.根据权利要求14所述的用途，其中所述复制酶用于病毒性疾病的预防和/或治疗。17.根据权利要求16所述的用途，其中所述病毒性疾病为HIV。18.根据权利要求14-17任一项所述的用途，其中所述疫苗组合物包含基于蛋白质的疫苗。19.根据权利要求14-17任一项所述的用途，其中所述疫苗组合物包含编码一种或多种抗原的表达载体。20.根据权利要求19所述的用途，其中所述复制酶和所述一种或多种抗原由相同的表达载体编码。21.根据权利要求19所述的用途，其中所述编码一种或多种抗原的表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·克伊沃，
申请(专利权)人：非特生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：FI