化合物双旋覆花内酯丁及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体为一种化合物双旋覆花内酯丁及其制备方法和应用。该化合物从旋覆花中提取分离得到。经实验研究表明，该化合物对多种人肿瘤细胞具有良好的抑制活性，对于炎症具有的抑制作用。因此，该化合物可用于制备抗肿瘤药物和抗炎症药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属医药
，具体涉及一种从植物旋覆花中分离得到的新化合物双旋覆花 内酯丁 (JaponiconeD)及其制备方法和应用。技术背景旋覆花属(InulaL.)植物是菊科(Compositae)中的一属，全世界约有100种，分别于亚 洲、欧洲和非洲，以地中海地区为主。我国有20余种，本属多种植物常供药用，如土木香 (//je/em',)可作为健胃、利尿、祛痰和驱虫药；大花旋覆花(/6n'to"m'ca)具有消痰、下气、 软坚、行水等功效。倍半萜类化合物是本属植物的特征性成分，以桉垸型、吉马垸型和愈 创木烷型为主，还包括伪愈创木烷型、裂环桉垸型、榄垸型、苍耳烷型和少量的无环倍半 萜及倍半萜二聚体。研究表明，该属植物中的倍半萜类化合物具有驱虫杀虫、抗菌抗肿瘤、 抗病毒、免疫抑制的功效。旋覆花(i/7"^ ^gp朋7'w)又名金佛花，金佛草(江浙)，六月菊(河北)。多年生 草本。根状茎短，横走或斜生，有多少粗壮的须根。分布在我国北部、东北部、中部、东 部、四川、广东等地。我国通称的旋覆花应是此种，供药用。根及叶治刀伤、疔毒，煎服 可平喘镇咳；花是健胃祛痰药，也治疗胸中痞闷、胃部膨胀、嗳气、咳嗽、呕逆等(《江 苏省药材志》)。古方祛痰、除湿、利肠，又为治水肿的主要药。我们对采自安徽亳州的 旋覆花进行了系统的化学成分研究，以期明确其化学成分，为天然药物化学研究积累资料; 发现具有良好活性的天然产物，为后续深入的研究开发提供物质基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的双倍半萜内酯类天然化合物及其制备方法和其在制 备抗肿瘤、抗炎药物中的应用。本专利技术提供的新的双倍半萜内酯类化合物是从旋覆花(生长于安徽亳州)中提取分离 得到，命名为双旋覆花内酯丁 (JaponiconeD)，其化学结构式如下<formula>formula see original document page 4</formula>双旋覆花丙酯丁D。该化合物的制备方法如下(1) 提取将旋覆花地上部分干燥，粉碎，以80 95%乙醇室温浸泡提取3 4次， 每次12 24小时；合并提取液，提取液减压浓缩成流浸膏，加水稀释后先以石油醚萃取， 再以二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集二氯甲烷部位；(2) 分离将上述二氯甲垸部位应用硅胶柱色谱，以体积比为100: 1 2: 1的二 氯甲垸/甲醇系统梯度洗脱，薄层色谱检测，收集含有双旋覆花内酯丁的流分，再经葡聚糖 凝胶柱色谱，以体积比为1: 1的二氯甲垸/甲醇洗脱，最后经液相色谱制备，得双旋覆花 内酯丁。本专利技术的双倍半萜内酯类化合物Japonicone D为白色粉末，由电喷雾离子质谱信号 w/z595_,高分辩质谱得该化合物精密质量数为619.2880 +，推算其分子式为 C34H4409。该化合物的结构通过'H-NMR， 13C-NMR， 2D-NMR等手段进行确证。^和13C 核磁共振数据见表l:<table>table see original document page 5</column></row><table>具体实施方式下面的实施例可以使本专业技术人员更全面的理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1:将干燥的旋覆花(/j^om'ca)地上部分20.0 kg粉粹，室温下用95%的乙醇提取3次， 每次分别用时24， 12， 12小时。将所得粗提物925.3 g加适量水稀释后，依次用石油醚， 二氯甲烷，乙酸乙酯，正丁醇萃取，收集二氯甲垸部位。将得到的二氯甲烷萃取物84.5g 用200-300目的薄层硅胶分离，用CH2Cl2-MeOH (100:0, 50:1， 20:1, 10:1, 5:1, 2:1，)进行梯 度洗脱。薄层色谱检测，分别收集其中含有双旋覆花内酯丁的组分，再采用Sephadex LH-20进行分离，用CH2Cl2-MeOH(l:l)进行洗脱，得到混合物，香草醛浓硫酸显色为倍半萜类 化合物，采用prep HPLC分离得到双旋覆花内酯丁(Japonicone D) 98 mg。 实施例2:双旋覆花内酯丁的细胞毒活性实验1、 实验材料 1.1、受试样品Japonicone D用DMSO (Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000 ng/ml的溶液或均匀 的混悬液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。1.2、 细胞株A549 (人肺癌细胞)LOVO (人肠癌细胞)6T-CEM (人T细胞白血病细胞)MDA-MB-435 (人乳腺癌细胞)1.3、 培养液RPMI1640+150/oNB S+双抗1.4、 其他材料全自动酶标仪型号WellscanMK-2，生产厂商Labsystems 进口96孔培养板等。2、 试验方法MTT法96孔板每孔加入浓度为4 6X 1()4个/ml的细胞悬液100pl，置37°C， 5% C02 培养箱内。24h后，加入样品液，10 pl/孔，设双复孔，37°C， 5。/。C02作用72h。每孔加 入5 mg/rnl的MTT溶液20 作用4h后加入溶解液，100 pl/孔，置培养箱内，溶解后 用MK-2全自动酶标仪测570 nm OD值。3、 试验结果结果见表2，结果显示，Japonicone D对人肺癌细胞，人肠癌细胞，人T细胞白血病 细胞，人乳腺癌细胞均有较好的抑制活性，双旋覆花内酯丁有很好的抗肿瘤作用。因此， 可用于制备抗肿瘤药物。实施例3:双旋覆花内酯丁对小鼠S180肉瘤(实体型)的疗效实验 1、 实验材料 1.1受试样品Japonicone D分别用少量吐温一80助溶后用0.5%CMC配成溶液。 1.2动物品系昆明种小鼠来源第二军医大学实验动物中心提供。 合格证号沪动合证字107号 体重18 — 20g 性别雌性。 1.3移植性肿瘤小鼠S180肉瘤，由上海医药工业研究院传代维持。 2、实验方法取生长良好的小鼠S180肉瘤腹水，用生理盐水以l: 4稀释，每只小鼠腋皮下接种0.2 ml，随机分组，分为对照组，环磷酰胺组(CTX组，20mg/kg， ipX7)、给药(5mg/kg) 组，接种后次日起给药，给药体积为0.5ml/20g体重，连续灌胃7天。接种后10日脱颈处 死动物，称动物体重后解剖取瘤块，称瘤重。结果判定根据以下公式对照组平均瘤重一给药组平均瘤重肿瘤抑制率％= - x100%对照组平均瘤重3、实验结果Japonicone D有显著的抑瘤作用。实验结果见表3。表3 Japonicone D对小鼠S180肉瘤的抑制作用<table>table see original document page 7</column></row><table>表2 Japonicone D对人体肿瘤细胞的体外增殖抑制作用 样品号<table>table see original document page 8</column></row><table>实施例4:双旋覆花内酯丁抗炎实验小鼠耳肿胀模型 1实验动物Swiss种小鼠，雄性，体重20-24 g。 2.实验模型和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化合物双旋覆花内酯丁，其特征在于从双旋覆花中提取分离获得，其化学结构式如下：＊＊＊。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张卫东，金慧子，单磊，苏娟，柳润辉，李慧梁，覃江江，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]