一类新型的诺西肽衍生物制造技术

本发明专利技术公开发明专利技术了一类新型的诺西肽衍生物，包括诺西肽衍生物1、2和3。这类化合物通过定向改变诺西肽生物生物合成基因簇中nosM基因来达到产生新型的具有抗菌活性的诺西肽衍生物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一类新型的诺西肽衍生物1、2和3，这类化合物具有抑制细菌生长或杀死细菌的作用。
技术介绍
近年来随着耐药菌感染的不断蔓延，现有的抗生素已经无法满足需求，因此开发结构新颖、抗耐药菌活性强的新型抗生素迫在眉睫。诺西肽(Nosiheptide)是一种由活跃链霉菌StreptomycesaetuosusATCC25421、Streptomycessp.ATCC31463、StreptomycesglaucoghseusNRRLLL-BP189产生的具有抗菌活性的硫肽类化合物。但是诺西肽的水溶性极大地限制了其应用。目前诺西肽仅用作为一种新型的非吸收性动物饲料添加剂，适合于抑制肠道内革兰氏阳性细菌的生长。诺西肽是由nosM编码的前体肽经过翻译后修饰合成的。前体肽由37个氨基酸构成的前导肽和13个氨基酸构成的核心肽构成。改变诺西肽核心肽基因将直接改变最终产物的结构，这为产生新型的具有良好水溶性及抗菌活性的诺西肽衍生物打下了基础。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术不足，公开了一类新型的诺西肽衍生物，该类衍生物在上述文献中未见报道，具有抗菌活性。本专利技术技术方案具体如下：具有下式结构的诺西肽类衍生物或其药学上可接受的盐、酯、对映异构体、非对映异构体或混合物：其中，R为CH3、CH2OH或CH(CH3)2。具体的，上述的诺西肽类衍生物优选如下结构的化合物：化合物1化合物2化合物3本专利技术还提供了上述诺西肽类衍生物或其药学上可接受的盐、酯、对映异构体、非对映异构体或混合物在制备抑菌或抗菌药物中的应用。上述诺西肽衍生物通过重组技术表达制备。通过定向改变诺西肽基因nosM核心肽序列得到。附图说明图1为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物1的HPLC色谱图。图2为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物1的高分辨质谱图。图3为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物1的核磁共振氢谱图。图4为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物1的核磁共振碳谱图。图5为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物2的HPLC色谱图。图6为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物2的高分辨质谱图。图7为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物2的核磁共振氢谱图。图8为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物2的核磁共振碳谱图。图9为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物3的HPLC色谱图。图10为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物3的高分辨质谱图。图11为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物3的核磁共振氢谱图。图12为本专利技术所述诺西肽衍生物化合物3的核磁共振碳谱图。具体实施方式以下结合具体实施例，对本专利技术做进一步说明。应理解以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限制本专利技术的范围。以下实施例中所述斜面培养基、遗传操作培养基和发酵培养基配方如下：斜面培养基：MS培养基遗传操作培养基：ISP1培养基发酵培养基：(g/L):酵母提取物3.0g，玉米淀粉10.0g，黄豆饼粉20.0g，KNO32.0g，CaCO34.0g,NaCl4.0g,pH7.0,121℃灭菌30min。工程菌株T3A，T3S和T3V的构建。根据GenBank公布的诺西肽生物合成基因簇序列，设计上下游引物，以活跃链霉菌基因组为模板，通过定点突变PCR技术扩增出含nosM上下游同源臂的下列nosM基因突变序列：(1)nosM基因第118位A碱基突变为G碱基的基因片段；(2)nosM基因第118位A碱基突变为T碱基的基因片段；(3)nosM基因第118位A碱基和119位的C碱基分别突变为G碱基和T碱基的基因片段。根据上述3种基因序列分别设计下述3组引物用于相应的基因扩增(下划线为限制酶切位点)，分别获得含目的突变基因的大小为2375bp的目的片段：(1)nosM-hF:5’-GGATCCACCAGGCTCACCAGCTCGGCGGAGA-3’BamHI；(SEQIDNo:1)nosM-hR:5’-AAGCTTTCCTCGCGGGGGATGCCGTCGAACA-3’HindIII；(SEQIDNo:2)T3A-A:5’-ACTCGCAGGTGGCGCACGAGGCCGACATGAC-3’；(SEQIDNo:3)T3A-B:5’-GTCATGTCGGCCTCGTGCGCCGCCTGCGAGT-3’。(SEQIDNo:4)(2)nosM-hF:5’-GGATCCACCAGGCTCACCAGCTCGGCGGAGA-3’BamHI；(SEQIDNo:1)nosM-hR:5’-AAGCTTTCCTCGCGGGGGATGCCGTCGAACA-3’HindIII；(SEQIDNo:2)T3S-A:5’-CAGCACTCGCAGGTGGAGCACGAGGCCGACA-3’；(SEQIDNo:5)T3S-B:5’-TGTCGGCCTCGTGCTCCACCTGCGAGTGCTG-3’。(SEQIDNo:6)(3)nosM-hF:5’-GGATCCACCAGGCTCACCAGCTCGGCGGAGA-3’BamHI；(SEQIDNo:1)nosM-hR:5’-AAGCTTTCCTCGCGGGGGATGCCGTCGAACA-3’HindIII；(SEQIDNo:2)T3V-A:5’-CAGCACTCGCAGGTGACGCACGAGGCCGACA-3’；(SEQIDNo:7)T3V-B:5’-TGTCGGCCTCGTGCGTCACCTGCGAGTGCTG-3’。(SEQIDNo:8)分别将目的基因测序正确后双酶切后连接至温度敏感型质粒pKC1139得到重组质粒。然后再通过属间接合转移将重组质粒转入nosM缺失菌株L1000的活跃链霉菌，抗生素筛选获得nosM突变菌株T3A、T3S和T3V，分别对应nosM基因第118位A碱基突变为G碱基(核心肽第三位苏氨酸突变为丙氨酸)、T碱基(核心肽第三位苏氨酸突变为丝氨酸)和第118位A碱基及119位的C碱基分别突变为G碱基和T碱基(核心肽第三位苏氨酸突变为缬氨酸)的的菌株。工程菌的培养和发酵将上述3种突变菌株T3A、T3S和T3V分别从冻干管中接种至MS培养基上，于30℃培养2天后，转入装入经121℃高压灭菌在30min的ISP1培养基的三角瓶中，置于摇床进行培养，其中，转速为220rpm，温度为30℃，培养时间为20h。然后，将种子液接种到已灭菌的发酵培养基的三角瓶中，转种量为10％，进行摇瓶发酵培养，转速为220rpm，温度为30℃，培养时间为120h。表达产物的分离纯化将上述三种突变菌株T3A、T3S和T3V经发酵后的发酵液，分别按照体积本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有下式结构的诺西肽类衍生物或其药学上可接受的盐、酯、对映异构体、非对映异构体或混合物：其中，R为CH3、CH2OH或CH(CH3)2。

【技术特征摘要】
1.具有下式结构的诺西肽类衍生物或其药学上可接受的盐、酯、对映异构体、非对映异
构体或混合物：
其中，R为CH3、CH2OH或CH(CH3)2。
2.如权利要求1所述的诺西肽类衍生物或其药学上可接受的盐、酯、对映异构体、非对
映异构体或混合物，其特征在于所述化合物具有如下结构式：
3.如权利要求1所述的诺西肽类衍生物或其药学上可接受的盐、酯、对映...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈依军，郑徐露，王淑珍，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32