全人源抗狂犬病毒中和抗体及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体或其抗原结合片段，本发明专利技术的中和抗体能特异性与狂犬病病毒结合并且可以有效中和病毒活性。本发明专利技术还涉及该中和抗体的制备方法和用途。本发明专利技术的抗体可以用于狂犬病紧急预防和/或治疗以及狂犬病毒检测。此外，该抗体还可用于制备狂犬病毒检测试剂，发现有效中和抗原表位及开发狂犬病毒重组蛋白及亚单位疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞免疫学、分子生物学领域，涉及一种全人源的单克隆抗体，尤其涉及一种全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体。另外，本专利技术还涉及该中和抗体的制备方法和用途。
技术介绍
根据世界卫生组织(WHO)建议，对于严重暴露者应同时进行主动和被动免疫治疗，以获得快速有效的保护作用。狂犬病疫苗是减毒后的对人体无害的狂犬病病毒(也就是无害抗原)，需要15～20天才产生足够抗体刺激机体产生抗狂犬病毒的主动免疫作用。被动免疫制剂是含有特异性抗体的免疫血清或细胞因子，能够立即特异地中和狂犬病病毒，短期内起到治疗或紧急预防狂犬病的作用。随着对狂犬病毒及其单克隆抗体不断深入的研究，如何用单克隆抗体取代现有被动免疫制剂的思路越来越清晰。应用单克隆抗体技术开发抗狂犬病毒单克隆抗体(monoclonalantibodies，mAbs)防治狂犬病可以克服多抗血清的众多弊端，应用前景广阔。1975年创立体外杂交瘤技术得到了鼠源性单克隆抗体(Kohleretal.，1975)，开始了多克隆抗体走向单克隆抗体的新时代。与多克隆抗体相比，mAb具有无可比拟的优越性，它具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强、成本低并可大量生产等优点。在目前生产的单抗中，鼠源性单抗仍占其中较大比重。鼠源性单抗应用于人类有较强的免疫原性，但主要缺陷是诱发人抗鼠抗体(humanantimouseantibody，HAMA)反应，其次是鼠单抗不能有效地激活人体的生物效应功能，因此限制了其临床应用(Dharetal.，2004)。因此，在保持对特异性抗原表位高亲和力的基础上进行人源化改造，减少异源抗体的免疫原性，成为mAb研究的重点。随着对各类抗体结构和氨基酸序列及其变异的种属和功能之间关系的深入了解，能够利用抗体工程技术对抗体结构进行改造。目前，抗体的应用经历了从非人源抗体到人鼠嵌合抗体、人源化抗体，最终到制备全人源单抗的转基因小鼠和噬菌体展示文库等不同的阶段。人鼠嵌合抗体的实质是将鼠源性单抗的抗原结合活性保留下来，并在此基础上尽可能地消除鼠源化部分并用人源化片断取而代之；降低了免疫原性，减轻单抗异源性产生的排斥反应，又能同时维持亲本抗体特异性结合抗原的能力。但是人鼠嵌合抗体的鼠源性仍然高达30％左右，还是容易引HAMA反应。为减少鼠源成分，人们进一步用人的FR替代鼠FR，形成更为完全的人源化抗体，即除了3个CDR是鼠源的外，其余全部是人源结构，又称CDR移植抗体(CDRgraftedantibody)或改型抗体(reshapedantibody)。由于人源化抗体(CDR移植抗体)内还含有10％以上的鼠源蛋白，因而在临床应用时，仍然存在一些免疫排斥反应,没有达到治疗性抗体发展的最终目标——抗体完全人源化。从鼠源到全人源，单抗在患者体内人抗鼠免疫反应发生概率逐步降低，治疗效果和安全性逐步提高，因此全人源单抗是单抗发展的趋势。目前有部分抗狂犬病病毒特异性的mAbs进入临床研究阶段的报道，但至今仍没有此类药物被批准上市。因此，本领域迫切需要开发具有高亲和力的完全人源化的抗狂犬病病毒抗体，用于替代血清制品，以满足对于严重暴露者进行被动免疫治疗的需要。
技术实现思路
为了弥补现有技术的缺陷，本专利技术的目的之一在于提供一种用于诊断和/或治疗的全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体，该抗体具有降低患者免疫反应的可能性，并且具有利于治疗目的的药理学性质，具有高效和安全的特点。本专利技术的目的之二在于提供上述抗体的重链、轻链或其片段。本专利技术的目的之三在于提供编码上述抗体或其抗原结合片段的核酸分子或其片段，以及并入这些核酸分子以用于重组表达上述抗体的表达载体和宿主细胞。本专利技术的目的之四在于提供上述抗体的制备方法和用途。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了一种全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR1、轻链CDR2、轻链CDR3、重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3；重链CDR1具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；重链CDR2具有SEQIDNO:3所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；轻链CDR1具有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；轻链CDR2具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；轻链CDR3具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。优选地，重链CDR1具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；轻链CDR1具有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；轻链CDR2具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；轻链CDR3具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。具有上述优选序列的本专利技术的全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体命名为TRN073。进一步，所述单克隆抗体的重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。优选地，所述单克隆抗体的重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体的轻链可变区具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。包括优选抗体氨基酸序列的保守序列变体的抗体也包括在本专利技术的范围之内。保守氨基酸序列变体包括不显著改变本专利技术的全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体结合性质和中和性质的氨基酸序列的修饰，如源于本领域熟知的相似氨基酸替代的变体，氨基酸的缺失、增加导致的变体。本专利技术的抗体还包括人源与非人源抗体，以及具有与TRN073抗体相同功能或改造及优化的一切抗体。进一步，所述抗体的抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链抗体。Fab是指含有一条轻链的可变区和恒定区和一条重链的可变区和恒定区经二硫键结合起来的抗体分子的一部分。Fab’是指包含了部分铰链区的Fab片段。F(ab’)2指的是Fab’的二聚体。Fv指的是含有抗体重链可变区、轻链可变区并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。单链抗体指的是由轻链可变区与重链可变区直接相连或通过一个肽链连接而成的工程抗体。本专利技术的公开的抗体可以在重链和轻链可变区包含一个或多个糖基化位点，如本领域内熟知的，在可变区中存在的一个或多个糖基化位点可以导致增强的抗体免疫原性，或者由于改变了抗原结合而改变抗体的药物动力学。本专利技术的抗体可以被设计为在Fc区域内包含修改，通常是改变抗体的1个或多个功能特性，如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗原依赖的细胞毒性。此外，本专利技术的抗体可以被化学修饰(如，可以将一个或多个化学基团连接于抗体)，或被修饰以改变其糖基化，从而再改变抗体的一个或多个功能特性。专利技术还提供了编码前面所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子，所述核酸分子包括编码抗体重链可变区的核苷酸序列或编码抗体轻链可变区的核苷酸序列。本专利技术的编码本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR1、轻链CDR2、轻链CDR3、重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3；重链CDR1具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；重链CDR2具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；轻链CDR1具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；轻链CDR2具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；轻链CDR3具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种全人源抗狂犬病毒的单克隆中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链CDR1、轻链CDR2、轻链CDR3、重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3；重链CDR1具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；重链CDR2具有SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；重链CDR3具有SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；轻链CDR1具有SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；轻链CDR2具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；轻链CDR3具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链可变区具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链抗体。4.编码权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子或其DNA片段。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求4所述的核酸分子。6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的表达载体。7.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。8.一种狂犬病毒检测产品，其特征在于，所述检测产品包括权利要求1-3中任一项所述的抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖化新，王月明，袁晓辉，
申请(专利权)人：广州泰诺迪生物科技有限公司，暨南大学，珠海泰诺麦博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44