本实用新型专利技术公开了一种同步检测血清样本中十二种抗体的蛋白悬浮芯片系统，包括：芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机。该悬浮芯片系统不仅可以同步检测十二种病原抗体也可以灵活组合所需检测的抗体，也可检测单一病原抗体。悬浮芯片技术利用微球在溶液中反应，利用激光检测技术，提高了样品检测的准确性和重复性，具有操作简便、重复性好等特点。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及一种同步检测血清样本中东方马脑炎病毒抗体、西尼罗病毒抗体、黄热病毒抗体、土拉菌抗体、登革病毒抗体、禽流感病毒抗体、普氏立克次体病原体抗体、蜱传脑炎病毒抗体、Q热立克次体病原体抗体、委内瑞拉马脑炎病原体抗体、马秋波病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体共十二种病原抗体的蛋白悬浮芯片系统。
技术介绍
东方马脑炎病毒传染性强，对人群危害性大，其临床表现与乙型脑炎很相似，病死率约在35%以上。该病毒也是目前国际社会列为防生物恐怖的主要种类之一，国内属一类管理的病毒种类，备受关注。西尼罗热是由西尼罗病毒感染引起的急性传染病。人感染西尼罗病毒多数表现为隐性感染，约140 300个感染者中有1个临床病例。其症状为突然发热、头痛、背痛、肌肉痛等。发烧可表现为双波热，约半数病人可见皮疹。出疹时间在发热期或发热末期。皮疹可为玫瑰样疹或斑丘疹，部位主要在颈背和上肢，持续时间约为1周。土拉菌病是由土拉弗朗西斯菌引起的多种野生动物、家畜及人共患病，亦称野兔热。临床上以体温升高、淋巴结肿大、脾和其他内脏坏死为特征，土拉菌可以被用作生物战中的致病病菌，感染者会出现高烧、浑身疼痛、腺体肿大和咽食困难等症状。登革热是登革热病毒引起、依蚊传播的一种急性传染病。临床特征为起病急骤，高热，全身肌肉、骨髓及关节痛，极度疲乏，部分患可有皮疹、出血倾向和淋巴结肿大。禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，也能感染人类，人感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡，病死率很高，通常人感染禽流感死亡率约为百分之33。此病可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途径传播，区域间的人员和车辆往来是传播本病的重要途径。伯氏考克斯体(JJoxiella burnetii, Cb)俗称Q热立克次体，是人和动物Q热的病原体，为革兰氏染色阴性的严格胞内寄生菌。急性Q热常表现为发热、头痛、肌肉酸痛常伴有肺炎、肝炎等。慢性Q热表现为心内膜炎、肉芽肿性肝炎、骨髓炎等。近年来，Q热性脑膜炎、肾小球肾炎、孕妇流产等亦有报道。马秋波病毒是一种沙粒病毒，染病初期表现为发烧，然后鼻子和牙龈开始出血，胃肠内出血，30%的感染者会死亡，病毒体积小但威力大。病程第1周，逐渐出现不适、厌食和头痛，中度发热，肌痛和腰痛，20% 30%病人在起病后8 12日表现严重出血或神经系统损害、休克和/或合并细菌感染，大出血或严重神经损害或两者同时并存，均可导致死亡， 急性肾功能衰竭不常见，但可以发生于休克未及时纠正和急性肾小管坏死的病人，合并感染常因白细胞增高不明显，而导致诊断延误。免疫学方法酶联免疫实验(ELISA)中利用抗原与抗体特异性反应来检测抗原或抗体主要有由双抗原夹心测抗体、双抗体夹心测抗原、 竞争法、间接法等。间接法测抗体的原理是特异性抗原结合到固相载体上，然后和待检血清中的相应抗体结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记二抗与免疫复合物中的抗体结合形成酶标记二抗_抗体_固相抗原复合物，加底物显色，判断抗体含量。悬浮芯片(suspension array)也称液相芯片，是20世纪70年代美国Luminex 公司研制出的新一代生物芯片技术，利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、 核酸研究、酶学分析、抗体筛选及受体与配体的识别分析等领域。目前发展的悬浮芯片主要是基于实验室检测方法的建立和方法评价及优化，以缩短检测时间，降低检测成本。但是悬浮芯片方法是否能够同步检测人血清中的东方马脑炎病毒抗体、西尼罗病毒抗体、黄热病毒抗体、土拉菌抗体、登革病毒抗体、禽流感病毒抗体、 普氏立克次体病原体抗体、蜱传脑炎病毒抗体、Q热立克次体病原体抗体、委内瑞拉马脑炎病原体抗体、马秋波病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体共十二种抗体，其定量检测能力如何， 尚缺乏模型和评价。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种同步检测血清样本中十二种抗体的蛋白悬浮芯片系统，该芯片系统包括芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机，其中，芯片基体内装有相关缓冲溶液和待测抗体，相关缓冲液中设置有若干种编码微球，各种编码微球上分别包被有相应的捕获抗原，加液系统依次向芯片基体中加入生物素标记的二抗和/或 SPA、荧光信号检测物，悬浮芯片检测仪包括微细管检测通道和检测激光，反应后的溶液吸入到微细管检测通道中，以使得每个编码微球依次通过微细管检测通道，检测激光激发并识别编码微球的颜色及其上待测物的荧光信号，计算机与悬浮芯片检测仪相连，并记录、分析悬浮芯片检测仪的测量结果。进一步，所述相关缓冲溶液包括用于所述待测抗体稀释的样品稀释液、稀释所述编码微球所用的微球稀释液、稀释所述生物素标记的二抗和/或SPA所用的抗体稀释液、每个反应之后洗涤编码微球所用的微球清洗液、SA-PE稀释液、检测缓冲液。进一步，所述编码微球包括011号编码微球、025号编码微球、027号编码微球、028 号编码微球、031号编码微球、032编码微球、033号编码微球、034号编码微球、043号编码微球、044编码微球、061号编码微球、071号编码微球。进一步，所述011编码微球用东部马脑炎病毒ElC蛋白抗原作为捕获抗原来包被， 所述025编码微球用西尼罗E蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述027号编码微球用黄热 E蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述028号编码微球用土拉fopA蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述031号编码微球用登革热E2蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述032号编码微球用禽流感H5蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述033号编码微球用普氏立克次体120C 蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述034号编码微球用蜱传脑炎病毒E-D3蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述043号编码微球用Q热立克次体coml蛋白抗原作为捕获抗原来包被， 所述044号编码微球用委内瑞拉马脑炎病毒E2蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述061号编码微球用马秋波GP2蛋白抗原作为捕获抗原来包被，所述071号编码微球用西部马脑炎病毒ElC蛋白抗原作为捕获抗原来包被。进一步，所述待测抗体为血清样品。进一步，所述生物素标记的二抗和/或SPA，优选为Biotin-羊抗兔和/或Biotin-SPA。进一步，所述荧光信号检测物为链亲和素-藻红蛋白。进一步，所述芯片基体为96孔滤板或者微量离心管。进一步，所述检测激光包括用激发所述编码微球基质中的颜色、识别编码微球分类编码以确定检测项目的红色激光，用于激发并识别待测分子的颜色信号、记录信号强弱以检测所述待测抗体的含量的绿色激光。本技术能灵活检测，本芯片系统可以单一检测血清样品中的单一抗体，也可以同时完成血清样品中几种抗体的检测。经过大量试验和深入的研究，对同步检测东方马脑炎病毒抗体、西尼罗病毒抗体、黄热病毒抗体、土拉菌抗体、登革病毒抗体、禽流感病毒抗体、普氏立克次体病原体抗体、蜱传脑炎病毒抗体、Q热立克次体病原体抗体、委内瑞拉马脑炎病原体抗体、马秋波病毒抗体、西方马脑炎病毒抗体的蛋白悬浮芯片制备及其检测条件作了实质性的改进和创新，其具有下列优点1、抗原包被量的改进抗原的包被量是成功检测的关键，本技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种同步检测十二种病原抗体的蛋白悬浮芯片系统，其特征在于，该芯片系统包括：芯片基体、加液系统、悬浮芯片检测仪和计算机，其中，芯片基体内装有相关缓冲溶液和待测抗体，相关缓冲液中设置有若干种编码微球，各种编码微球上分别包被有相应的捕获抗原，加液系统依次向芯片基体中加入生物素标记的二抗和／或ＳＰＡ、荧光信号检测物，悬浮芯片检测仪包括微细管检测通道和检测激光，反应后的溶液吸入到微细管检测通道中，以使得每个编码微球依次通过微细管检测通道，检测激光激发并识别编码微球的颜色及其上待测物的荧光信号，计算机与悬浮芯片检测仪相连，并记录、分析悬浮芯片检测仪的测量结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王静，杨永莉，杨宇，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：实用新型
国别省市：11
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