一种抗丙型肝炎病毒抗体的获取以及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抗丙型肝炎病毒抗体的获取以及应用，具体涉及作为治疗和预防HCV感染药物的全人源单克隆抗体TRN1007或其功能性片段。TRN1007抗体作为光谱中和抗体，与不同抗原结合能力及不同病毒的中和能力都很强，展示了对所述包括基因型1a、1b、2、3、4、5、6和7的病毒均具有较强的结合活性，特别是对HCV真病毒株S52和HK6a的中和效率，IC50值仅为4.6nM和6.6nM。TRN1007抗体优异的结合、中和活性显示其在检测、治疗和预防HCV感染及其相关疾病的良好应用前景。

Acquisition and application of an anti hepatitis C virus antibody

The invention relates to the acquisition and application of an anti hepatitis C virus antibody, in particular to a full human monoclonal antibody TRN1007 or its functional fragment as a drug for the treatment and prevention of HCV infection. TRN1007 antibody as spectrum neutralizing antibody, neutralizing antigen binding ability with different and different viruses are very strong, has demonstrated strong binding activity of the genotype 1a, 1b, including 2, 3, 4, 5, 6 and 7 of the virus, especially the neutralization efficiency on S52 and HCV really HK6a virus strains, IC50 value is only 4.6nM and 6.6nM. The excellent binding and neutralizing activity of TRN1007 antibody shows its promising application in the detection, treatment and prevention of HCV infection and related diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种抗丙型肝炎病毒抗体的获取以及应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种全人源抗HCV的单克隆中和抗体及该中和抗体的制备方法和用途。
技术介绍
丙型肝炎病毒((HepatitisCvirus，HCV)目前仍是威胁人类健康的一大疾病，影响世界2.0-3.0％的人口。HCV是一种具有外周衣壳(pericapsid)和单链RNA的属于黄病毒家族的病毒。HCV目前根据其基因序列的差异分为7种基因型，每种均以数字标记。每种基因型又进一步分为若干亚型，每种亚型均以字母标记。不同HCV基因型的流行和分布在世界各地不相同。丙型肝炎病毒是嗜肝病毒，感染肝脏细胞，引起肝脏病变，最近也有一些研究表明HCV感染可以引起肝外一些病理改变。由于HCV感染急性期患者未表现出明显的症状，大部分感染者在被确诊时己经发展为慢性化阶段。HCV感染后约一周感染者体内就能检测到HCVRNA，而获得性免疫应答反应在数月之后才能检测到。对急性期HCV患者的研究表明，广泛且特异性的T细胞免疫应答在清除病毒的过程中具有重要作用。迄今为止，尚缺乏丙型肝炎病毒有效的疫苗和免疫疗法。尽管被赋予对不同病毒基因型的交叉反应性，HCV抗原结构的高变性至今仍阻碍可中和病毒的抗体的开发。因而迫切需要具有能识别不同基因型病毒特征的并从而在治疗和预防HCV感染中发挥有效作用的抗HCV抗体。越来越多的证据表明早期且特异性的抗体反应能够影响急性期HCV感染的结果，中和抗体在慢性感染的控制中具有很好的作用。如Burioni等于1998年发表在《Hepatology》第28卷第3期的文章就记载了编码五种特异于HCVE2糖蛋白(HCVE2)的重组人抗体片段(Fab)的序列的克隆和鉴定，所述的抗体片段能够结合不同病毒基因型的糖蛋白(交叉反应性)。随后又发现了能够在体外有效地中和不同HCV基因型的感染的e20抗体片段，但该研究直到现在还没有成功上市。而本专利技术提供的全人源抗HCV的单克隆中和抗体，且中和能力很强，由其针对病毒株S52(3a)和HK6a，IC50值仅为4.6nM和6.6nM。TRN1007抗体优异的中和活性显示其在疫苗中的良好应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够结合来自多种不同基因型的HCV病毒的全人源单克隆中和抗体或其抗原结合片段，其作为治疗或预防HCV感染的药剂，其特征在于所述抗体结合HCV表面包膜糖蛋白E2。进一步，所述重链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3和/或轻链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3；重链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4所示；轻链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8所示。其中所述重链可变区的互补性决定区域和/或轻链可变区的互补性决定区域经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活性，或者分别与SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4所示的序列至少具有80％同源性；轻链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8所示，或者分别与SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8所示的序列至少具有80％同源性。进一步，所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个包含氨基酸序列SEQIDNO：1或与SEQIDNO：1具有至少80％同一性的序列的重链可变区，以及至少一个包含氨基酸序列SEQIDNO：2或与SEQIDNO：5具有至少80％同一性的序列的轻链可变区。进一步优选的序列同一性百分比是至少81％、83％、85％、87％、89％、90％、91％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，其中所述表述“至少”是指对于所列的每个百分比。包括优选抗体氨基酸序列的保守序列变体的抗体也包括在本专利技术的范围之内。保守氨基酸序列变体包括不显著改变本专利技术的全人源抗HCV的单克隆中和抗体结合性质和中和性质的氨基酸序列的修饰，如源于本领域熟知的相似氨基酸替代的变体，氨基酸的缺失、增加导致的变体。本专利技术的抗体还包括人源与非人源抗体，以及具有与TRN1007抗体相同功能或改造及优化的一切抗体。进一步，所述抗体的抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体和这样的多肽，或同时包含重链与轻链可变区或CDRs的单链抗体，或包含来源于免疫球蛋白重链可变区与轻链可变区的CDR片段的一个或更多个拷贝的骨架，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。术语“抗体”意指任意种类的全长免疫球蛋白及其包含轻链可变区与重链可变区的任意片段，例如Fab、F(ab’)2、CDR(互补决定区)，或同时包含重链与轻链可变区或CDRs的单链抗体，或包含来源于免疫球蛋白重链可变区与轻链可变区的CDR片段的一个或更多个拷贝的骨架。术语“Fv”意指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段；术语“dAb”意指由VH结构域组成的抗体片段；术语“Fab”意指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段；术语“F(ab')2”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段。本文所用的术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。可变性集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区(可变区中较保守的部分)，它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，可形成部分β折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗体的抗原结合部位。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。本专利技术的抗体可以是游离形式或缀合形式。缀合形式是与能够调节体内持续性、促进或限制体内分布、降低对蛋白水解剂的敏感性、降低抗原性、提高细胞毒能力和/或易于在体液和组织中检测的分子缀合的上述的抗体。适于缀合的分子的非限制例子包括人血清白蛋白，麦芽糖结合蛋白，谷胱甘肽-S-转移酶，噬菌体外壳p3或p8蛋白，肽，糖，PEG或PEG样分子，动物、植物或微生物源毒素，细胞因子，酶，化学发光化合物，生物发光化合物，金属原子，放射性同位素，荧光化合物，标签基团或磷酸化、糖基化、泛素化、苏素化或内肽酶解的底物。为便于缀合，抗体的C末端或N末端可以是修饰的，例如，通过插入额外的氨基酸残基，如一个或更多个可形成二硫桥的半胱氨酸残基。本专利技术应用的抗体还可以连接人红血球或其它细胞载体，连接特定制剂，或连接缓释系统例如但不限于脂质体、树形聚合物、微粒体、纳米颗粒、微胶囊、病毒载体等等。本专利技术还提供了一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码SEQIDNO:1所示的氨基酸序列或SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。本专利技术的编码前面所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子包括具有上述核苷酸序列的保守核苷酸序列变体的核酸分子。所谓的保守核苷酸序列变体源本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够结合来自多种不同基因型的HCV病毒的全人源单克隆中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，抗体或其抗原结合片段包括重链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3和/或轻链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3；重链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示；轻链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示，重链可变区的互补性决定区域和/或轻链可变区的互补性决定区域经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活性。

【技术特征摘要】
1.一种能够结合来自多种不同基因型的HCV病毒的全人源单克隆中和抗体或其抗原结合片段，其特征在于，抗体或其抗原结合片段包括重链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3和/或轻链可变区的互补性决定区域CDR1、CDR2、CDR3；重链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4所示；轻链CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8所示，重链可变区的互补性决定区域和/或轻链可变区的互补性决定区域经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活性。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，抗体的重链可变区具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；抗体的轻链可变区具有SEQIDNO:5所示的氨基酸序列，重链和/或轻链的可变区序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且形成的抗体或其片段具有相同或相似活性。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，抗体的抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、dAb和互补性决定区片段、单链抗体、嵌合抗体、双抗，或同...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖化新，张远旭，袁晓辉，王月明，昝利鹏，吴昌文，刘彤，
申请(专利权)人：广州泰诺迪生物科技有限公司，珠海泰诺麦博生物技术有限公司，暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44