一种B型流感病毒广谱中和抗体、其制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种B型流感病毒广谱中和抗体，为人源单克隆抗体，命名为0809。所述抗体的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。本发明专利技术所述抗体能够很好的中和Yamagata种系、Victoria种系和古老的B/Lee/1940株的B型流感病毒，该抗体能抑制B型流感病毒凝集鸡红细胞的能力，是血凝抑制抗体；且所述抗体能够抑制B型流感病毒在小鼠体内的复制，抑制B型流感病毒感染小鼠引起的体重下降，保护小鼠在B型流感病毒感染后仍有100％存活率，具有重要的经济和社会意义。

【技术实现步骤摘要】
一种B型流感病毒广谱中和抗体、其制备方法及应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种流感病毒抗体、其制备方法及应用，尤其涉及一种B型流感病毒广谱中和抗体、其制备方法及应用。
技术介绍
流感病毒(Influenzavirus)是引起流行性感冒的人畜共患传染病病原，属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，流感病毒属。按照流感病毒核蛋白和基质蛋白抗原性的不同，流感病毒可分为A、B、C三型，近年来发现的牛流感病毒归为了D型。A型流感病毒可引起人、禽、哺乳动物和蝙蝠等感染和发病，危害最为严重。根据病毒颗粒表面血凝素蛋白(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)的不同，A型流感病毒可分为多个亚型，目前已发现的HA有18个亚型(H1-H18)，NA有11个亚型。A型流感病毒容易发生抗原变异和漂移，曾四次引起世界性大流感，也是季节性流感的主要元凶。B型流感种系较少。自1940年首次分离后，B型流感病毒逐渐进化成以B/Victoria/2/1987为代表的B-Victorialineage(BV)和以B/Yamagata/16/1988(BY)的两个种系。截止目前为止，B型流感病毒仅为3个种系：现在流行的BV系、BY系，以及在BV和BY出现以前的B型流感毒株种系。B型流感病毒的自然宿主主要是人，曾经在海豹中检测到。B型流感病毒的变异频率和宿主范围比A型流感病毒要低，要小，也从未造成过流感大流行。人们认为B型流感病毒的危害远远低于A型流感病毒，这致使B型流感的研究也相应较少。然而，近些年来有研究发现，B型流感病毒在特定的情况下所导致的疾病负担甚至超过了A型流感病毒。原因在于B型流感多发于儿童和老年人。幼儿园或学校等人群密集环境因素使得B型流感在儿童间呈集体性暴发，儿童感染后常见的临床症状为高烧、肌肉酸痛、咳嗽和头痛等，如治疗不及时，可在短时间内引发肺炎、脑膜炎和心肌炎等症状。由于老年人抵抗力较低，感染B型流感后出现并发症较多，致使病情严重，无疑增加了死亡率。在2013-2014年流感流行季节，在北美地区特别是美国爆发了大范围的B型流感疫情，使得美国疾病预防控制中心提出了B型流感病毒的致病性不可低估的指导性意见。疫苗接种是目前预防和控制流感的首选策略。临床上经常使用流感疫苗包括A型流感病毒中的H1N1亚型流感病毒、H3N2亚型流感病毒和一个种系B型流感病毒三种流感组份，为三价流感疫苗。近些年来，季节性流感疫苗又增加了一个种系的B型流感病毒组分，称之为四价疫苗。流感疫苗候选毒株会随着流行毒株的变化而更新，然而仍然赶不上季节性流感病毒变异的速度，更无法预防跨种传播而来的禽流感和猪流感。简而言之，流感病毒的不可预测性及高度的变异性致使流感防控成为研究的重点与难点。这些无疑使得能预防多个亚型A型流感病毒或多个种系B型流感病毒的广谱流感疫苗显得尤为重要。研究学者尝试了多种方法来开发广谱流感疫苗，如表达高度保守的HA茎部区作为亚单位疫苗、或以形成纳米颗粒的蛋白为骨架，递呈HA茎部区的病毒样颗粒疫苗等。此外，在广谱流感疫苗的概念和基础上，广谱流感病毒中和抗体也逐渐成为流感预防和治疗药物的研究焦点和重点。HA是流感病毒的主要表面抗原，结合在HA受体结合部位或茎部区的抗体能有效抑制HA蛋白的受体结合和膜融合活性。目前，已有多个靶向HA头部区的人源或鼠源单克隆抗体，其中11个抗体的抗原抗体复合物结构已解析。这类抗体主要通过抑制病毒与受体结合来发挥作用。大多数为型特异性，也有一些广谱型单克隆抗体，如可中和多个A型流感病毒亚型的广谱中和抗体C05、F045-092、S139/1，以及中和多个B型流感病毒种系的CR8033和CR8071人源单克隆抗体。HA头部的抗原变异较为频繁，容易发生免疫逃逸现象，HA茎部区相对于头部区更为保守，靶向HA茎部区的广谱型抗体的研发更受青睐。近些年研发出较多靶向HA茎部区的单克隆抗体：如CR6261，F10，CR8020，FI6v3和6F12等。CR6261和F10可中和group1的A型流感病毒，CR8020可中和group2的A型流感病毒，而FI6v3甚至可中和所有亚型的HA，而CR9114抗体则是可中和A型流感病毒和B型流感病毒超级广谱中和抗体。常用的人源流感病毒中和抗体的筛选方法有噬菌体抗体库展示筛选、单个B细胞测序技术、B细胞永生化和人源化小鼠杂交瘤细胞筛选等等，目前，已利用这些方法获得了多种人源广谱中和抗体，如C05、F045-092、CR6261、CR9114、CR8033、CR8071、F10和FI6v3等。而我们则利用高通量测序的方法获得了一株A型流感病毒的广谱中和抗体AF4H1K1。这种方法利用患者或疫苗免疫个体的PBMC来构建抗体文库，采用二代高通量测序的方式获得BCR文库，通过分析感染或疫苗不同免疫时期的抗体重链和轻链可变区的频率变化来挑选，简化了抗体的筛选流程，为抗体药物的研发提供了一个捷径。
技术实现思路
针对现有技术的不足及实际的需求，本专利技术提供了一种流感病毒抗体、其制备方法及应用，特别是一种B型流感病毒广谱中和抗体、其制备方法及应用。本专利技术提供的B型流感病毒广谱中和抗体为流感的预防和治疗提供了新的治疗方法，为B型流感病毒感染诊断以及B型流感病毒表面抗原HA的检测提供了新的选择，具有重要的经济和社会意义。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：在本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种B型流感病毒广谱中和抗体，所述抗体为人源单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，该抗体的轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNo.5、SEQIDNo.6和SEQIDNo.7所示；其重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNo.8、SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。根据本专利技术的实施例，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；其重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。根据本专利技术的实施例，序列可以包含某些生物学功能等同的氨基酸或“保守性替代”，其它序列可以包含功能非等同的氨基酸或“非保守性替代”，其经基因工程改造以改进CDR或含CDR抗体的特性。根据本专利技术的实施例，前面所述的氨基酸序列如下：SEQIDNo.1：DIQLTQSPSFLSTSVGDRVTITCRASHDIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQTGVPSRFSGSGFGTEFTLTISSLQPEDFGTYYCQQLRSYPYTFGQGTKLEIK。SEQIDNo.2：QVQLVQSGSELRRPGASVKISCKASGYTFTDYAMNWVRQVPGQGLEWVGWINTDNGNPTYAEAFAGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCAANWGGYYYDSSVNSGGGYFDNWGQGTLVTVFS。SEQIDNo.5：HDIYSY。SEQIDNo.6：AAS。SEQIDNo.7：QQLRSYPYT。SEQIDNo.8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种B型流感病毒广谱中和抗体，其特征在于，所述抗体为人源单克隆抗体，其轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示；其重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.8、SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示。

【技术特征摘要】
1.一种B型流感病毒广谱中和抗体，其特征在于，所述抗体为人源单克隆抗体，其轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNo.5、SEQIDNo.6和SEQIDNo.7所示；其重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNo.8、SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。2.如权利要求1所述的B型流感病毒广谱中和抗体，其特征在于，i)其轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；以及ii)其重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的B型流感病毒广谱中和抗体，其特征在于，其轻链框架区的氨基酸序列如SEQIDNo.11、SEQIDNo.12或SEQIDNo.13所示；其重链框架区的氨基酸序列如SEQIDNo.14、SEQIDNo.15或SEQIDNo.16所示。4.一种编码如权利要求1-3之一所述B型流感病毒广谱中和抗体的DNA片段，其特征在于，其编码轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列分别如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：高福，校海霞，冯俊霞，严景华，陈维之，洪媛媛，孙中平，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，苏州金唯智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12