【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物基因工程育种，具体涉及亮氨酸拉链家族转录因子yer045c在促进酵母细胞絮凝及提高甾体化合物产量中的应用。
技术介绍
1、甾体化合物是广泛存在于自然界的一类化学成分，在医药、保健、农业及畜牧业中均有应用，对调节动植物的生命活动至关重要。甾体化合物的体外合成研究已经有了一百多年的历史，在二十世纪后半叶甾体化学得到了飞速发展，多种甾体激素类产品相继出现。化学合成的方式给环境带来较大负担，构建甾体激素细胞工厂利用生物法合成相关产品被寄予厚望。但由于甾体激素的合成使底盘细胞的代谢发生紊乱，细胞生长变差从而影响目标产物的产量。
2、絮凝是酵母在恶劣条件下自我保护的一种机制，通过絮凝形成一种特殊的微环境使菌株能够更好的生存。基因改造和环境诱变均可以触发酵母絮凝样表型。酵母絮凝在酿酒工艺上已经被很好的应用，其可以在发酵结束时简单高效、环境友好且低能耗的分离细胞，有利于下游的进一步加工。据报道，细胞絮凝的应用可减少约1/5的成本，但目前尚未发现细胞絮凝在发酵生产甾体化合物方面的应用。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是：如何提高酵母细胞中目标甾体化合物的产量。
2、为解决上述技术问题，第一个方面，本专利技术提供蛋白质或调控基因表达的物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质在下述任一项中的应用，所述基因编码所述蛋白质，所述蛋白质为亮氨酸拉链转录因子yer045c；
3、a1)在调控酵母细胞絮凝中的应用；
4、a2)在制备调控
5、a3)在调控酵母细胞甾体化合物产量中的应用；
6、a4)在制备调控酵母细胞甾体化合物产量的产品中的应用；
7、a5)在调控酵母细胞薯蓣皂素产量中的应用；
8、a6)在制备调控酵母细胞薯蓣皂素产量的产品中的应用；
9、a7)在调控酵母细胞菜油甾醇产量中的应用；
10、a8)在制备调控酵母细胞菜油甾醇产量的产品中的应用；
11、a9)在调控酵母细胞氢化可的松产量中的应用；
12、a10)在制备调控酵母细胞氢化可的松产量的产品中的应用；
13、a11)在微生物育种或微生物辅助育种中应用；
14、所述亮氨酸拉链转录因子yer045c是如下a1)-a3)任一种蛋白质：
15、a1)氨基酸序列是序列表中序列5所示的蛋白质；
16、a2)将a1)所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与a1)所示的氨基酸序列具有80％以上同一性，且与甾体化合物产量相关的蛋白质；
17、a3)在a1)或a2)的n端或/和c端连接标签得到的融合蛋白质。
18、进一步地，上述甾体化合物选自薯蓣皂素、菜油甾醇或氢化可的松中的一种或任意几种
19、所述亮氨酸拉链转录因子yer045c可来源于酿酒酵母。
20、其中，seq id no.5由489个氨基酸残基组成。
21、上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
22、所述蛋白标签(protein-tag)是指利用dna体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为flag蛋白标签、his蛋白标签、mbp蛋白标签、ha蛋白标签、myc蛋白标签、gst蛋白标签和/或sumo蛋白标签等。
23、进一步地，上述的应用中，调控所述蛋白质编码基因的表达的物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质为生物材料，所述生物材料为下述任一种：
24、b1)编码上述亮氨酸拉链转录因子yer045c的核酸分子；
25、b2)含有b1)所述核酸分子的表达盒；
26、b3)含有b1)所述核酸分子的重组载体、或含有b2)所述表达盒的重组载体；
27、b4)含有b1)所述核酸分子的重组微生物、或含有b2)所述表达盒的重组微生物、或含有b3)所述重组载体的重组微生物。
28、进一步地，上述的应用中，b1)所述核酸分子为如下g1)或g2)所述的dna分子：
29、g1)、编码链的编码序列是序列表中序列2第21-1490位的dna分子；
30、g2)、与g1)所述dna分子具有80％以上的同一性，且调控酵母细胞甾体化合物产量的dna分子。
31、本专利技术中，同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gap existence cost，per residue gap cost和lambdaratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
32、本专利技术中，所述80％以上的同一性可为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
33、进一步地，上述的应用中，所述酵母为酿酒酵母。
34、第二个方面，本专利技术提供一种调控酵母甾体化合物产量的方法，所述方法包括通过调控酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的表达或调控所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的活性或含量，来提高酵母的甾体化合物产量。
35、进一步地，上述的方法中，所述调控酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的表达为向受体酵母中导入上述应用中b1)所述的核酸分子来促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c编码基因的表达或促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的活性或含量，得到甾体化合物产量高于所述受体酵母的目的酵母。
36、进一步地，上述的方法中，所述甾体化合物选自：薯蓣皂素、菜油甾醇或氢化可的松中的一种或任意几种。
37、第三个方面，本专利技术提供一种制备甾体化合物高产酵母的方法，所述方法包括向受体酵母中导入上述应用中b1)所述的核酸分子来促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c编码基因的表达或促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的活性或含量，得到甾体化合物产量高于所述受体酵母的目的酵母。
38、进一步地，上述的方法中，所述酵母或受体酵母为酿酒酵母。
39、在本专利技术实施例中，所述酿酒酵母选自下述任一种
40、c1)、合成薯蓣皂素的重组酿酒酵母lp118；
41、c2)、合成菜油甾醇的重组酿酒酵母by-cam；...
【技术保护点】
1.蛋白质或调控基因表达的物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质在下述任一项中的应用，所述基因编码所述蛋白质，所述蛋白质为亮氨酸拉链转录因子YER045C；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：调控所述蛋白质编码基因的表达的物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质为生物材料，所述生物材料为下述任一种：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于：所述酵母为酿酒酵母。
5.一种调控酵母甾体化合物产量的方法，其特征在于：所述方法包括通过调控酵母中所述亮氨酸拉链转录因子YER045C的表达或调控所述亮氨酸拉链转录因子YER045C的活性或含量，来调控酵母的甾体化合物产量。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述调控酵母中所述亮氨酸拉链转录因子YER045C的表达为向受体酵母中导入权利要求2或3所述应用中B1)所述的核酸分子来促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子YER045C编码基因的表达或促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子YER045C的活性或
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述甾体化合物选自：薯蓣皂素、菜油甾醇或氢化可的松中的一种或任意几种。
8.一种制备甾体化合物高产酵母的方法，其特征在于：所述方法包括向受体酵母中导入权利要求2或3所述应用中B1)所述的核酸分子来促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子YER045C编码基因的表达或促进或提高所述受体酵母中所述亮氨酸拉链转录因子YER045C的活性或含量，得到甾体化合物产量高于所述受体酵母的目的酵母。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的方法，其特征在于：所述酵母或受体酵母为酿酒酵母。
10.权利要求1所述应用中的所述蛋白质或/和权利要求2或3所述应用中的所述生物材料。
...【技术特征摘要】
1.蛋白质或调控基因表达的物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质在下述任一项中的应用，所述基因编码所述蛋白质，所述蛋白质为亮氨酸拉链转录因子yer045c；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：调控所述蛋白质编码基因的表达的物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质为生物材料，所述生物材料为下述任一种：
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于：所述酵母为酿酒酵母。
5.一种调控酵母甾体化合物产量的方法，其特征在于：所述方法包括通过调控酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的表达或调控所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的活性或含量，来调控酵母的甾体化合物产量。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述调控酵母中所述亮氨酸拉链转录因子yer045c的表达为向受体酵母中导入权利要求2或3所述应用中b1)所述的核酸分子来促进...
【专利技术属性】
技术研发人员：张学礼，许丽萍，樊飞宇，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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