基于Cas6e的RNAi基因干扰系统和RNA编辑系统的构建与应用技术方案

本发明专利技术涉及一种基于CRISPR‑Cas6e开发的在原核细胞中的RNAi基因干扰系统和真核细胞中的定点RNA编辑系统。本发明专利技术的方法是进行RNAi基因干扰时，Cas6e与crRNA形成复合体，促进crRNA寻找和结合目标mRNA的RBS区域，从而阻断mRNA与核糖体结合，显著降低mRNA翻译水平，最终导致基因干扰的目的。在进行RNA编辑时，Cas6e与腺嘌呤脱氨酶ADAR2(E488Q)的催化结构域融合表达，随后与crRNA形成复合体，将ADAR2的催化结构域带到指定的RNA位置完成定点A到I的编辑。上述两个系统基于Cas6e的ssRNA结合活性，实现了的RNA水平的调控和编辑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及rnai基因干扰系统和rna编辑系统的构建与应用，更具体涉及基于crispr-cas6e的rnai基因干扰技术和定点rna编辑技术。

技术介绍

1、精确的基因调控和可编程的rna编辑在rna水平提供了关键的调控层，对基因功能分配、细胞表型工程和代谢工程至关重要。在自然界中，细胞已经演化出多种调整基因表达的方式，以适应发育和适应不断变化的环境，包括细菌中通过转录活性小非编码rna(srnas)介导的基因抑制和真核细胞中通过microrna(mirnas)介导的rna干扰(rnai)，它们已经发展成为强大的基因调控工具。srnas和mirnas介导基因调控的基本机制依赖于它们能够在mrna和它们的目标反义区域之间形成碱基对。为了高效地定位它们各自的靶向mrnas，srnas和mirnas都与rna分子伴侣结合，促进它们与mrna的相互作用。在细菌中存在hfq和proq这样的rna分子伴侣与srna骨架相互作用，充当rna媒介促进srna-mrna的退火结合。这些分子伴侣是通过中和srnas的负电荷，减少两个rna底物之间的静电排斥，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种以基因精细调控为目的基于EcCas6e蛋白的原核生物RNAi基因干扰系统，其特征在于，包括(1)EcCas6e作为核酸酶；(2)crRNA是由能与靶标基因的mRNA的RBS区域互补的序列和EcCas6e可识别结合并切割的特定发卡结构序列组成；(3)可促进crRNA与mRNA结合的蛋白，例如MRP1或MRP2。

2.如权利要求1所述的原核生物RNAi基因干扰系统，其特征在于，所述的EcCas6e识别结合并切割的特定发卡结构序列如SEQ ID NO: 1中所示；所述的EcCas6e的氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示；所述的crRNA中与靶标基因的mRNA的RBS区...

【技术特征摘要】

1.一种以基因精细调控为目的基于eccas6e蛋白的原核生物rnai基因干扰系统，其特征在于，包括(1)eccas6e作为核酸酶；(2)crrna是由能与靶标基因的mrna的rbs区域互补的序列和eccas6e可识别结合并切割的特定发卡结构序列组成；(3)可促进crrna与mrna结合的蛋白，例如mrp1或mrp2。

2.如权利要求1所述的原核生物rnai基因干扰系统，其特征在于，所述的eccas6e识别结合并切割的特定发卡结构序列如seq id no: 1中所示；所述的eccas6e的氨基酸序列如seq id no: 2所示；所述的crrna中与靶标基因的mrna的rbs区域序列互补的长度为10～50bp；任选地，所述的crrna中与靶标基因的mrna序列互补时允许部分碱基错配；所述的crrna中包含一个或多个靶标基因的mrna的rbs区域序列互补序列。

3.如权利要求1所述的原核生物rnai基因干扰系统，其特征在于，eccas6e还与mrp1或mrp2中一个或两个的一个拷贝或多拷贝融合，所述的mrp1氨基酸序列如seq id no: 3中所示，所述的mrp2氨基酸序列如seq id no: 4中所示。

4.一种以基因精细调控为目的基于eccas6e蛋白的原核生物rnai基因干扰的方法，其特征在于，

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的eccas6e的氨基酸序列如seq id no:...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛超友，蔡朝辉，李穆桐，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：