【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及甘蓝型油菜基因育种，尤其涉及甘蓝型油菜调控含油量积累基因bnlec1分子标记的开发与应用。
技术介绍
1、含油量是油菜主要的农艺性状，也是产量构成的主要因素，含油量每增加1％，相当于油菜增产2.3％至2.5％，所以提高种子含油量是增加油菜单产的有效方法之一。
2、植物油脂的合成过程复杂，涉及到多种酶的催化作用。编码这些酶类物质的基因表达或调控发生变化都有可能会使油脂合成受到影响。目前，越来越多的油脂代谢相关基因被鉴定和验证,对油脂合成过程的分子机制也逐渐明晰，这对筛选和培育高含油量品系油菜具有重大意义。lec1(leafy cotyledon 1)是胚胎发生发育过程关键的调控因子，对脂肪酸的合成起着重要调控作用，其编码一个与hap3亚基同源的模序(motif)，可以同相关基因启动子ccaat-box特异性结合，激活或增强该基因的表达。lec1通过调控参与糖酵解和脂肪酸合成途径的关键酶编码基因表达，增加参与油脂合成途径的碳源，促进植物油脂的积累。tan等的研究表明过表达bnlec1可以提高2％-20％的种子含油量(tan et al.,2011)，lec1是调控油菜甘油酯合成的关键基因。
3、dna分子标记是建立在dna分子多态性基础上的遗传标记，直接反映了生物体dna水平的遗传多态性，具有不受环境条件和生长阶段影响及快速、准确等优点，可作为作物遗传育种中辅助选择的重要方法。相比于传统育种方法，分子标记辅助选择育种能极大的节省劳动力和减少育种年限，但相对于水稻、玉米、大豆、小麦等作物，分子标记
4、indel作为高通量分子标记,兼具各类遗传标记的优点。传统分子标记开发一般只基于一份序列,而indel标记开发完全基于序列差异,所以开发过程中无多型位点较少。与其他分子标记相比,indel标记准确性高、变异稳定,避免了由于特异性和复杂性导致的后续分析模糊。indel标记本质上仍属于长度多态性遗传标记,可基于pcr扩增技术对indel进行分型。与分型系统复杂的snp标记相比,indel检测简单便捷,对仪器设备和技术要求较低,在电泳技术平台上即可进行同时indel标记的扩增产物带型清晰简单,其稳定性和产物分离效果明显，一些扩增产物较短的indel标记对dna质量要求较低,且对样品量要求较少,能扩增高度降解的dna。
5、indel标记开发方法一般是先获取相关dna序列,通过blast比对分析筛选indel位点,进而根据indel位点两端的序列设计引物来扩增这些插入/缺失位点。但对于非模式植物或基因组测序深度不够的植物来说，开发indel标记的精确度就有失偏颇。
技术实现思路
1、为了解决上述的技术问题，本专利技术的目的是提供一种与甘蓝型油菜调控含油量积累相关的indel位点基因，该indel位点基因为bnlec1-a07启动子区域16626069位碱基处出现的265bp插入片段，所述插入片段的核苷酸序列如seq id no:1所示。该位点的变异导致1.3-2.0百分点的含油量差异。这种基于重测序挖掘的indel可以在分子水平准确的鉴定品种间的含油量差异。
2、进一步，本申请还公开了所述的indel位点基因在制备筛选提高甘蓝型油菜含油量积累的检测试剂中的应用。
3、进一步，本申请还公开了一种检测所述的indel位点基因的引物对。
4、作为优选，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-tgcatcggttttacagattatc-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-aggcacttattatttgattacca-3’。
5、进一步，本申请还公开了所述的引物对扩增的扩增片段，扩增片段的长度为640bp，核苷酸序列如seq id no:4所示。
6、进一步，本申请还公开了一种包含所述的引物对的试剂盒。
7、进一步，本申请还公开了所述的indel位点基因、所述的引物对或所述的试剂盒在提高甘蓝型油菜含油量积累遗传育种中应用。
8、进一步，本申请还公开了一种筛选提高甘蓝型油菜含油量积累的方法，该方法包括以下的步骤：
9、1)提取甘蓝型油菜dna；
10、2)利用所述的引物对进行pcr扩增，对扩增产物中所述的indel位点基因进行检测，从而筛选筛选甘蓝型油菜含油量积累性状。
11、作为优选，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-tgcatcggttttacagattatc-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-aggcacttattatttgattacca-3’。
12、作为优选，pcr扩增体系如下：
13、
14、pcr程序如下:
15、
16、本申请由于采用了上述的技术方案，发现bnlec1-a07启动子区域16626069位碱基处出现265bp的插入片段，该位点的变异导致1.3-2.0百分点的含油量差异。这种基于重测序挖掘的indel可以在分子水平准确的鉴定品种间的含油量差异。针对此处变异，申请人设计一对适用于选育高含油量性状的甘蓝型油菜indel分子标记，可直接通过pcr技术对材料进行分型，加快育种进度。通过我们开发的分子标记辅助选择，可以在前期迅速、便捷、定向、省力的筛选出高含油量油菜材料，加快高含油品种选育进程。
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1.一种与甘蓝型油菜调控含油量积累相关的InDel位点基因，该InDel位点基因为BnLEC1-A07启动子区域16626069位碱基处出现的265bp插入片段，所述插入片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.权利要求1所述的InDel位点基因在制备筛选提高甘蓝型油菜含油量积累的检测试剂中的应用。
3.一种检测权利要求1所述的InDel位点基因的引物对。
4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-TGCATCGGTTTTACAGATTATC-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-AGGCACTTATTATTTGATTACCA-3’。
5.权利要求3所述的引物对扩增的扩增片段，其特征在于，扩增片段的长度为640bp，核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
6.一种包含权利要求3或4所述的引物对的试剂盒。
7.权利要求1所述的InDel位点基因、权利要求3或4所述的引物对或权利要求6所述的试剂盒在提高甘蓝型油菜含油量积累遗传育种中应用。
8.一种
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-TGCATCGGTTTTACAGATTATC-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-AGGCACTTATTATTTGATTACCA-3’。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，PCR扩增体系如下：
...【技术特征摘要】
1.一种与甘蓝型油菜调控含油量积累相关的indel位点基因，该indel位点基因为bnlec1-a07启动子区域16626069位碱基处出现的265bp插入片段，所述插入片段的核苷酸序列如seq id no:1所示。
2.权利要求1所述的indel位点基因在制备筛选提高甘蓝型油菜含油量积累的检测试剂中的应用。
3.一种检测权利要求1所述的indel位点基因的引物对。
4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述的引物对的上游引物的核苷酸序列为：5’-tgcatcggttttacagattatc-3’，下游引物的核苷酸序列为5’-aggcacttattatttgattacca-3’。
5.权利要求3所述的引物对扩增的扩增片段，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱论文，李文，姚敏，傅鹰，何昕，刘忠松，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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