一种抗流感病毒的鸡卵黄抗体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗流感病毒的鸡卵黄抗体，所述鸡卵黄抗体为特异性抗四价流感病毒的鸡卵黄抗体，所述流感病毒包括甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系）。该鸡卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：1）制备四价流感病毒抗原；2）对母鸡进行免疫；3）收集免疫母鸡产下的免疫鸡蛋；4）从免疫鸡蛋中制取混合抗体原液；5）检测抗体原液效价，配加稳定剂，从而获得抗四价流感病毒的鸡卵黄抗体。本发明专利技术可在短时间与四价流感病毒的特异性病原体结合，能够较长时间有效杀灭四价流感病毒，且安全性能较好、无毒副作用，可有效用于人口咽部和鼻咽部粘膜的相应病原体的预防。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物抗体免疫
，具体是指一种抗流感病毒的鸡卵黄抗体及其制备方法。
技术介绍
流行性感冒病毒，简称流感病毒，是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒，在分类学上，流感病毒属于正黏液病毒科，电镜下流感病毒呈球形或椭圆形，直径约为80~120nm，初次分离出现可见丝状，长短不一。根据病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MA）的抗原性的不同，可分为甲型、乙型和丙型。甲型流感并根据表面糖蛋白HA和NA的抗原性又存在不同的亚型，目前共有16个HA亚型（H1-H16）和9个NA亚型（N1-N9）。病毒基因组包括8个分段的单链负股RNA。其中甲型流感病毒8个基因片段编码10个蛋白，分别是：血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、基质蛋白M2和M1、非结构蛋白NS1和NS2、核衣壳蛋白NP、以及3种多聚酶（PB1、PB2和PA）。流感病毒变异有抗原性变异、温度敏感性变异、宿主范围以及对非特异性抑制物敏感性等方面的变异，但最主要的是抗原型变异。流感病毒会造成急性上呼吸道感染，主要通过空气飞沫迅速的传播，流感病毒存在于病人或隐性感染者的呼吸道分泌物中，通过咳嗽、打喷嚏或谈话等方式散播到空气中，并可存活30分钟，易感者吸入后即可感染，其次接触病人的餐具、玩具或其它物品，也可感染，传播速度取决于人群的拥挤程度。在世界各地常会有周期性的大流行，尤其容易感染老人和儿童，全球每年约有300-500万人感染，其中死亡的有10%左右，其中绝大部分是65岁以上的老人和2岁以下儿童。流感大流行一般较少发生，平均每10-50年发生一次，自16世纪以来，有文献记载的流感大流行至少有31起。流感可威胁各年龄群体，5~9岁年龄段的儿童感染率最高，但对6～24个月的儿童、老人以及有高危身体状况的人群如患有心肺疾病、包括糖尿病在内的代谢疾病、肾功能不全以及处于各种类型免疫抑制状态的病人都容易被流感病毒感染。由于流感可能与其它呼吸道感染混淆，而且流感最常见的并发症是肺炎，所以患有呼吸道疾病的人往往比较容易受到流感病毒的侵袭。此外，对孕妇的研究显示，在孕期最初三个月后患病，疾病的严重程度增加，孕期用药较为谨慎。现在不提倡用抗病毒药物，目前广谱抗流感病毒药物对甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系）病原体有一定效果，但同时其副作用较强，如金刚烷胺、金刚乙胺、奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦等都在不同程度上对消化道、呼吸系统及中枢神经系统等有影响；化学方法对甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系）病原体具有破坏微生物结构的特性，但对口腔和鼻咽部黏膜具有刺激作用；物理方法对甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系）病原体具有杀灭作用，但对口腔和鼻咽部黏膜有伤害。由于乙（B）型流感病毒Victoria系和Yamagata系每年发病人数基本相当，所以流感病毒抗体中仅包含一个系别的乙（B）型流感病毒是无法保证人群受到足够保护的，WHO在推荐流感病毒毒株时也经常面临两难境地。因此，为了保证免疫保护效果，在近年来WHO的报告中多次提到四价流感，现有3价流感病毒鸡卵黄抗体，对乙（B）型流感病毒另外一个系的病毒无法产生阻断及预防性保护。同时，在制备卵黄抗体时，尽管免疫鸡为经过挑选、检查和进行了某些疫病的预防接种的健康产蛋母鸡，仍存在一些鸡源性的细菌或/和病毒混存于鸡蛋从而进入卵黄抗体中的可能，如大肠杆菌、沙门氏菌、鸡减蛋综合征病毒、鸡禽白血病病毒等，从而影响抗体的安全性。目前，一些研究选用带有毒性的甲醛、二乙烯胺（BEI）及β-丙内酯（BPL）作灭活剂，对卵黄抗体中外源性病毒具有灭活效果，但对卵黄抗体的活性有影响从而影响效应的效果。目前使用的外源病毒灭活方法添加了具有毒性的物质，即对卵黄抗体生物活性影响明显，又对人体存在潜在的毒副作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种起效快、 用药量少、疗效好、且无毒副作用的用于人口咽部和鼻咽部粘膜的相应病原体预防的鸡卵黄抗体。本专利技术的另一个目的在于提供该抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法。本专利技术通过下述技术方案实现：一种抗流感病毒的鸡卵黄抗体，所述鸡卵黄抗体为特异性抗四价流感病毒的鸡卵黄抗体，所述流感病毒包括甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系）。卵黄抗体是禽类对特定抗原在所产生的相应特异性抗体。卵黄抗体是一种天然存在、无残留、无毒副作用的免疫球蛋白，是抗病毒药物及抗生素的替代品。目前高免卵黄液广泛应用于一些疾病的紧急预防和治疗。特异性抗四价流感病毒（甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系））的鸡卵黄抗体与抗病毒药物作用原理不同，其与病毒表面相应抗原发生特异性结合，改变了该抗原的状态，封闭了抗原的功能和影响病毒的活性；遮蔽了病毒表面与组织、细胞结合的受体，阻止病毒粘附于组织、细胞，排斥了病毒在炎症部位的存在。因此在当今抗病毒药物滥用和广泛的耐药菌株存生的情况下，更显示出特异性抗四价流感病毒（甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系））的鸡卵黄抗体制剂的重要性和可行性。根据上述特异性鸡卵黄抗体的作用原理，用这种特异性抗四价流感病毒（甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系））的鸡卵黄抗体制剂能够有效地治疗由该四价流感病毒引起的高传染性的呼吸道症状，如喉咙痛、流鼻涕、咳嗽、鼻塞、流眼泪、全身酸痛、软弱无力、畏寒、发热等。上述一种抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：（1）制备四价流感病毒抗原；（2）对母鸡进行免疫；（3）收集免疫母鸡产下的免疫鸡蛋；（4）从免疫鸡蛋中制取混合抗体原液；（5）检测抗体原液效价，配加稳定剂，从而获得抗四价流感病毒的鸡卵黄抗体。为了更好地实现本专利技术的方法，进一步地，所述步骤（1）中，制备四价流感病毒抗原的具体过程为：取甲型、乙型和丙型流行性感冒病毒株，分别接种鸡胚；将接种有不同类型流行性感冒病毒株的鸡胚进行培养；待鸡胚出现病变时，分别收取病毒液，之后进行病毒灭活；最后经超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心后分别制得四价流感病毒抗原。为了更好地实现本专利技术的方法，进一步地，所述步骤（2）中，对母鸡进行免疫的过程包括以下步骤：（2.1）将制备得到的四价抗原按含量比1:1:1:1混合，加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂混合，然后在组织裂解仪上25Hz共振5min，重复2次，制得乳化混合液，经安全试验、无菌检验及物理性状检验合格后，供产蛋母鸡免疫使用；（2.2）取健康适龄的产蛋母鸡，取乳化混合液在产蛋母鸡的翅基部三角肌或胸肌等位置用乳化好的免疫抗原进行肌肉、皮下多点注射；其中首次免疫采用弗氏完全佐剂，其余采用弗氏不完全佐剂；首次免疫间隔0、2、4、8周加强免疫，每次免疫剂量为0.5~1ml/只。为了更好地实现本专利技术的方法，进一步地，所述步骤（4）中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗流感病毒的鸡卵黄抗体，其特征在于，所述鸡卵黄抗体为特异性抗四价流感病毒的鸡卵黄抗体，所述流感病毒包括甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系）。

【技术特征摘要】
1.一种抗流感病毒的鸡卵黄抗体，其特征在于，所述鸡卵黄抗体为特异性抗四价流感病毒的鸡卵黄抗体，所述流感病毒包括甲（A）型H1N1、甲（A）型H3N2、乙（B）型（Victoria系）、乙（B）型（Yamagata系）。2.权利要求1所述的一种抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备四价流感病毒抗原；（2）对母鸡进行免疫；（3）收集免疫母鸡产下的免疫鸡蛋；（4）从免疫鸡蛋中制取混合抗体原液；（5）检测抗体原液效价，配加稳定剂，从而获得抗四价流感病毒的鸡卵黄抗体。3.根据权利要求2所述的一种抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，制备四价流感病毒抗原的具体过程为：取甲型、乙型和丙型流行性感冒病毒株，分别接种鸡胚；将接种有不同类型流行性感冒病毒株的鸡胚进行培养；待鸡胚出现病变时，分别收取病毒液，之后进行病毒灭活；最后经超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心后分别制得四价流感病毒抗原。4.根据权利要求2或3所述的一种抗流感病毒鸡卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，对母鸡进行免疫的过程包括以下步骤：（2.1）将制备得到的四价流感病毒抗原按含量比1:1:1:1混合，加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂混合，然后在组织裂解仪上25Hz共振5min，重复2次，制得乳化混合液，经安全试验、无菌检验及物理性状检验合格后，供产蛋母鸡免疫使用；（2.2）取健康适龄的产蛋母鸡，取乳化混合液在产蛋母鸡的翅基部三角肌或胸肌等位置用乳化好的免疫抗原进行肌肉、皮下多点注射；其中首次免疫采用弗氏完全佐剂，其余采用弗氏不完全佐剂；首次免疫间隔0、2、4、8周加强免疫，每次免疫剂量为0.5~1ml/只。5.根据权利要求2或3所述的一种抗流感...

【专利技术属性】
技术研发人员：林小军，朱玲，林烨暄，万强，雷雨，冯梅，胡方焱，何珊，江秀坤，叶琳，
申请(专利权)人：成都安蒂康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51