本发明专利技术涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种基于抗原‑适配体的竞争法检测试纸条，所述试纸条包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜、吸水垫和底板；所述标记物垫包被有检测探针，所述检测探针为标有用于显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；所述反应膜上设置有检测区和质检区；所述检测区固定包被有靶标物抗原；所述质检区固定包被有质控探针。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条及其应用。
技术介绍
核酸适配体(Aptamer)是一种单链的寡核苷酸，多为单链DNA，长度在10～100bp之间，通常是利用特异的靶标从随机序列的寡核苷酸文库中通过体外筛选获得，作为一种新型生物识别分子，可以与靶标物质高亲和力特异性结合。目前文献报道的已经筛选到适配体的靶标有几百种，建立的基于适配体的检测方法主要包括比色法、荧光法、电化学等上百种方法，但到目前为止基于适配体的商品化的检测产品还几乎没有。胶体金免疫层析试纸条技术是目前最常见最成熟也最受欢迎的快速检测产品形式之一，被广泛应用与临床诊断、食品安全以及环境分析等，比如著名的早孕试纸条、瘦肉精试纸条等。适配体作为一种特异性的识别分子，也可以被用来开发基于试纸条形式的快速检测产品，但是目前有关适配体试纸条的文献报道却很少，仅有几篇文献。这些文献一般采用的原理是在试纸条检测线处固定适配体的互补链，样品中含有靶标时，标记有荧光或胶体金的适配体和样品中的靶标结合，则不能和试纸条检测线处的互补链结合，检测线处荧光信号降低或不出信号；反之，样品中没有靶标时，标记有荧光或胶体金的适配体流经试纸条时和检测线处的互补链结合，检测线处出现较强的信号，从而根据荧光或胶体金信号大小判断样品中靶标含量。然而，在实际的应用中，由于该检测方法的原理主要是基于适配体-靶标和适配体-互补链的竞争来实现的，因此很难设计比较可靠的检测方法。由于不同适配体长度不同，因此其互补链的长度也不同，从而适配体与互补链的的亲和力也不同。由于适配体链一般比较长，所以适配体与互补链的亲和力经常大于适配体与靶标的亲和力，从而导致无法检测；目前文献的解决方法都是通过将互补链截短，仅将部分互补链固定到检测线上，从而降低互补链和适配体的亲和力，但是这种方法需要繁杂的摸索，且互补链长度过短时适配体无法与互补链杂交，从而也导致无法检测。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，以解决上述问题。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述试纸条包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜、吸水垫和底板；所述标记物垫包被有检测探针，所述检测探针为标有显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；所述反应膜上设置有检测区和质检区；所述检测区固定包被有靶标物抗原；所述质检区固定包被有质控探针。本专利技术提出了利用靶标抗原代替互补链的方法，将靶标抗原固定到试纸条检测线，这样适配体与样品中的靶标和检测线上的靶标亲和力一致，保证了检测方法的可行性和准确性。且实验条件也更简单，摸索起来更容易。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，当所述靶标物为有机物大分子靶标时，所述靶标物抗原即为靶标物本身；当所述靶标物为无机小分子靶标时，所述靶标物抗原为所述无机小分子靶标与载体蛋白的偶联物。这里所指的大分子是指可以直接固定到膜上并暴露抗原表位的物质，小分子是指需要通过偶联载体蛋白才能固定到膜上并暴露抗原表位的物质。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述载体蛋白包括酪蛋白、牛血清白蛋白或鸡卵清白蛋白。鸡卵清白蛋白(Ovalbumin，OVA)由386个氨基酸组成，分子量约43Kd。OVA作为载体蛋白可以协助小分子物质固定到硝酸纤维素膜上并暴露其抗原表位，从而利于抗原与适配体的结合。同样的，载体蛋白也可选用酪蛋白(Casein)或牛血清白蛋白(BSA)等。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述显示信号强度的指示剂包括荧光物质、生物素、放射性同位素、电子致密物、胶体金或酶中的任一种。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述荧光标记包括Alexa350、Alexa405、Alexa430、Alexa488、Alexa555、Alexa647、AMCA、氨基吖啶、BODIPY630/650、BODIPY650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素、5-羧基-2′，4′，5′，7′-四氯荧光素、5-羧基荧光素、5-羧基罗丹明、6-羧基罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、CascadeBlue、Cy2、Cy3、Cy5、CY7、6-FAM、丹磺酰氯、荧光素、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑)、OregonGreen488、OregonGreen500、OregonGreen514、PacificBlue、邻苯二甲酸、对苯二甲酸、间苯二甲酸、甲酚固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、三双吡啶基二胺铕、铕穴状化合物或螯合物、二胺、双花青苷、LaJolla蓝染料、别藻蓝蛋白、allococyaninB、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、硫胺、藻红青蛋白、藻红蛋白R、REG、罗丹明绿、罗丹明异硫氰酸酯、罗丹明红、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基罗丹明异硫醇)、四甲基罗丹明和德克萨斯红中的一种或多种。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述荧光物质包括PE、CY5、CY7、per-CP、TRITC、AlexaFluor647以及量子点中的任一种。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述质控探针的核酸序列与所述适配体上连接的序列互补。碱基的种类根据适配体的核苷酸序列进行选择，以不出现与适配体发生内部的互补配对，且不影响适配体与靶标结合的效率的核苷酸序列为准。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述适配体上连接的序列为PolyA、PolyT、PolyG或PolyC中的一种。优选的，碱基的数量为6～24个。优选的，适配体上连接的序列在适配体核苷酸序列的5'端。优选的，如上所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，所述适配体上连接的序列为PolyT18。与上述适配体上连接的序列配对的质控探针的核酸序列为：5'-biotin-AAA-AAA-AAA-AAA-AAA-AAA-3'。如上所述的抗原-适配体的竞争法检测试纸条在检测黄曲霉毒素B1和凝血酶中的应用。优选的，如上所述的应用，包括：1)、用试纸条检测靶标物标准品，得到标准品在试纸条的检测区和质控区的信号强度比值，制作靶标标准品的浓度对应信号强度比值的线性回归曲线，计算回归方程；2)、用试纸条检测待测样品，得到待测样品在试纸条的检测区和质控区的信号强度比值，根据步骤1)得到回归方程，得到所述待测样品中靶标物的含量。用上述的试纸条检测靶标标准品或待测样品，得到标准品在所述试纸的检测区和质控区的荧光或显色信号比值包括如下步骤：取靶标标准品或待测样品滴加到试纸的样品吸收垫上，10分钟后，将试纸条放入试纸条检测仪器ESEQuant-LR3中进行检测，分别测定检测区和质控区的荧光或显色信号强度；将检测区的荧光信号强度(T)比上质控区的荧光信号强度(C)，得到T/C值，为检测区和质控区的荧光信号比值。本专利技术基于抗原-适本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于抗原‑适配体的竞争法检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜、吸水垫和底板；所述标记物垫包被有检测探针，所述检测探针为标有用于显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；所述反应膜上设置有检测区和质检区；所述检测区固定包被有靶标物抗原；所述质检区固定包被有质控探针。
【技术特征摘要】
1.一种基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜、吸水垫和底板；所述标记物垫包被有检测探针，所述检测探针为标有用于显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；所述反应膜上设置有检测区和质检区；所述检测区固定包被有靶标物抗原；所述质检区固定包被有质控探针。2.根据权利要求1所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，其特征在于，当所述靶标物为有机物大分子靶标时，所述靶标物抗原即为靶标物本身；当所述靶标物为无机小分子靶标时，所述靶标物抗原为所述无机小分子靶标与载体蛋白的偶联物。3.根据权利要求2所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，其特征在于，所述载体蛋白包括酪蛋白、牛血清白蛋白或鸡卵清白蛋白。4.根据权利要求1所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，其特征在于，所述显示信号强度的指示剂包括荧光物质、生物素、放射性同位素、电子致密物、胶体金或酶中的任一种。5.根据权利要求4所述的基于抗原-适配体的竞争法检测试纸条，其特征在于，所述荧光物质包括PE、...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈爱亮，朱超，张桂兰，黄亚飞，闫娇，白文荟，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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