快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡制造技术

一种快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡，其胶体金试纸条包括支持板、NC膜、金标抗体垫、样品垫和吸水垫，NC膜设置在支持板的上部，NC膜一端的支持板上依次黏贴金标抗体垫和样品垫，另一端的支持板上黏贴吸水垫；NC膜的中部有一条含有载脂蛋白B多克隆抗体的检测线和一条含有IgG二抗的质控线；该胶体金试纸条设置在扣板式卡槽的内置空腔内，并使扣板式卡槽的观察口对应胶体金试纸条的检测线和质控线；扣板式卡槽的加样孔对应样品垫。本实用新型专利技术的优点是：用胶体金的方法检测乳糜血，不需要使用额外的设备，速度快，灵敏度高，特别适用于街头采血时，对献血者进行筛选。即可保护献血者的血液资源，也可节约相关的检测、储存、返回血费等费用。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于临床血液学检测，具体涉及一种快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡。
技术介绍
乳糜血或称脂血，餐后脂肪经过在小肠消化、吸收后，变成细小的乳糜微粒进入血液，乳糜微粒多到一定程度时，血清就由清澈透明的淡黄色液体变成乳白色的黏稠液体。血浆中因含有大量甘油三酯，而不能将其输给患者。甘油三酯是心血管疾病的独立危险因素。目前国内并没有针对街头采血时，用末梢血快速检测甘油三酯含量的办法，因此导致采供血机构每年报废大量的脂血，造成血液资源的巨大浪费。载脂蛋白B-48 (apoB-48)是唯一由（人的）小肠分泌的脂蛋白，其与甘油三酯结合后生成乳糜微粒（chylomicrons CMs）及其残余物。CM中的apoB-48是结构蛋白，由apoB100 mRNA特异编辑而得。Apo B48共有2153个氨基酸。其被中性脂酯化后，在甘油三酯转运蛋白（triglyceride transfer protein (MTP)）的协助下，生成初期的CM颗粒。未结合的apoB48立即降解。与肝分泌极低密度脂蛋白（VLDL）不同，在肠细胞中降解apoB48不是其主要的调控机制，在脂质缺乏的状态下，肠细胞分泌的apoB48是一种高密度脂蛋白。血清中apoB48的浓度可以代表CM及CM残留物的颗粒数。可利用apoB48追踪肠分泌CM的代谢过程。免疫胶体金技术是快速临床检测的最佳选择。酶联免疫吸附实验（ELISA）、分子生物学实验技术适用于实验室使用。目前国内外并没有针对街头采血时，用末梢血快速检测乳糜血的办法。因此导致采供血机构每年报废大量的乳糜血，造成血液资源的巨大浪费。
技术实现思路
本技术的目的是为解决街头采血时，快速筛选乳糜血的问题。本技术为解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡，其特征在于，包括胶体金试纸条和卡槽，该卡槽具有一个容置胶体金试纸条的内置空腔，且在该卡槽上设置有观察口和加样孔；该胶体金试纸条主要由支持板、NC膜、金标抗体垫、样品垫和吸水垫组成，在该支持板的一侧从一端到另一端依次粘结样品垫、金标抗体垫、NC膜和吸水垫；在该NC膜的中部设有一条含有载脂蛋白多克隆抗体的检测线和一条含有二抗的质控线，该检测线与质控线间隔设置，并且检测线与金标抗体垫相邻；该胶体金试纸条设置在卡槽的内置空腔内，并使该观察口对应胶体金试纸条的检测线和质控线，加样孔对应样品垫。所述金标抗体垫涂有胶体金标记的鼠抗人载脂蛋白B48单克隆抗体。所述的检测线为兔抗鼠载脂蛋白B多克隆抗体；所述的质控线为兔抗鼠IgG二抗。所述的检测线和质控线的线宽度为1mm，两线平行相距3~5mm，位于NC膜的中间，距NC膜两端的距离6~7mm。所述的NC膜的两端与金标抗体垫和吸水垫的相邻端相互重叠，金标抗体垫和吸水垫的重叠部分压在NC膜两端的上面；该样品垫与金标抗体垫的相邻端有重叠，该样品垫的重叠部分压在金标抗体垫相邻端的上面。所述的卡槽为扣板式卡槽。本技术的优点是：用胶体金的方法检测乳糜血，不需要使用额外的设备，速度快，灵敏度高，特别适用于街头采血时，对献血者进行筛选。即可保护献血者的血液资源，也可节约相关的检测、储存、返回血费等费用。附图说明图1是本技术的免疫胶体金试纸条结构示意图；图2是本技术扣板式卡槽的立体结构示意图；图3（a-d）是使用本技术的检测结果示意图。附图标记说明：1、样品垫；2、金标抗体垫；3、NC膜（硝酸纤维素膜）；4、检测线、5、质控线；6、吸水垫；7、支持板；8、卡槽；9、观察口；10.加样孔。具体实施方式参见图1和图2，本技术一种快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡，其特征在于，包括胶体金试纸条A和扣板式卡槽8，该扣板式卡槽8具有一个容置胶体金试纸条A的内置空腔11，且在该扣板式卡槽8上设置有观察口9和加样孔10；该胶体金试纸条A主要由支持板7、NC膜3、金标抗体垫2、样品垫1和吸水垫6组成，在该支持板7的一侧从一端到另一端依次粘结样品垫1、金标抗体垫2、NC膜3和吸水垫6；在该NC膜3的中部设有一条含有载脂蛋白B多克隆抗体的检测线4和一条含有IgG二抗的质控线5，该检测线4与质控线5间隔设置，并且检测线4与金标抗体垫2相邻；该胶体金试纸条A设置在扣板式卡槽8的内置空腔11内，并使该观察口9对应胶体金试纸条A的检测线4和质控线5（对应NC膜3的区域），加样孔10对应胶体金试纸条的样品垫1。所述金标抗体垫2中金标抗体为胶体金标记的载脂蛋白B48单克隆抗体。所述NC膜3上的检测线4为载脂蛋白B多克隆抗体，质控线5为IgG二抗。本技术乳糜血快速检测试纸卡的制备方法，包括以下步骤：1）制备NC膜3：检测线4的制备：采用喷金仪，用包被缓冲液稀释载体蛋白B多克隆抗体，在NC膜中检测线位置划线，即为检测线，晾干备用；所述的包被缓冲液为经过0.45μm滤膜过滤的0.05M pH9.6的碳酸盐缓冲液。质控线5的制备：采用喷金仪，用包被缓冲液稀释二抗，在NC膜上与检测线平行的位置划线，间隔5mm，即为质控线，所述的包被缓冲液为经过0.45μm滤膜过滤的0.05M pH9.6的碳酸盐缓冲液。NC膜组装制备：晾干检测线和质控线，得到含有检测线和质控线的NC膜；用封闭工作液将制备的NC膜于室温72h晾干，封存备用；所述的封闭工作液为2.5~3% BSA、2~2.5%脱脂奶粉和0.01M，pH7.0的碳酸盐缓冲液混合后用0.45μm滤膜过滤得到封闭工作液。2）制备涂覆金标抗体垫2：用含1.5% BSA、0.1%叠氮钠的Trs-HCl缓冲液稀释金标的载脂蛋白B48单抗；将金标抗体溶液用喷金仪，均匀喷洒于玻璃纤维棉，56℃干燥1h，加入干燥剂真空密封后，室温保存备用。3）组装乳糜血快速检测试纸卡：将涂有检测线和质控线的NC膜黏贴在支持板的中部，在NC膜的一侧依次黏贴含有金标抗体的玻璃纤维膜和样品垫，在NC膜的另一侧粘贴吸水垫，得到试纸板，将试纸板切割成不同宽度的试纸条，将试纸条安放于卡槽中，即为乳糜血快速检测试纸卡。4）乳糜血快速检测试纸卡的使用及判定：对街头献血的献血者进行初筛时，采集献血者的末端血液40微升，滴加于本试纸卡的样品垫1上（图1中箭头B处），滴加血液后，血清将按图1中箭头C所指方向进行虹吸前进，血清中的apoB48首先会与金标垫2上的标记有胶体金的apoB48单克隆抗体特异结合，并随血清向前运动，当到达检测线4位置时，apoB48会被固定于检测线4的apoB48多克隆抗体所捕获，当有足够多的apoB48被捕获时，其上连接的胶体金因聚集而显红色。未结合apoB48的标记有胶体金的apoB48单克隆抗体会继续向前运动直至质控线5，在质控线5上固定有IgG二抗，二抗将捕获所有的未结合apoB48的标记有胶体金的apoB48单克隆抗体，并显红色。在试纸卡的检测线4、质控线5位置均出现红色条带时，乳糜血检测为阳性（如图3b）；仅质控线5出现一条红色条带时，为阴性结果（如图3a）；在试纸卡的质控线5未出现红色条带时为无效结果（如图3c和图3d）。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡，其特征在于，包括胶体金试纸条和卡槽，该卡槽具有一个容置胶体金试纸条的内置空腔，且在该卡槽上设置有观察口和加样孔；该胶体金试纸条主要由支持板、NC膜、金标抗体垫、样品垫和吸水垫组成，在该支持板的一侧从一端到另一端依次粘结样品垫、金标抗体垫、NC膜和吸水垫；在该NC膜的中部设有一条用载脂蛋白多克隆抗体画出的检测线和一条用二抗画出的质控线，该检测线与质控线间隔设置，并且检测线与金标抗体垫相邻；该胶体金试纸条设置在卡槽的内置空腔内，并使该观察口对应胶体金试纸条的检测线和质控线，加样孔对应样品垫。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡，其特征在于，包括胶体金试纸条和卡槽，该卡槽具有一个容置胶体金试纸条的内置空腔，且在该卡槽上设置有观察口和加样孔；该胶体金试纸条主要由支持板、NC膜、金标抗体垫、样品垫和吸水垫组成，在该支持板的一侧从一端到另一端依次粘结样品垫、金标抗体垫、NC膜和吸水垫；在该NC膜的中部设有一条用载脂蛋白多克隆抗体画出的检测线和一条用二抗画出的质控线，该检测线与质控线间隔设置，并且检测线与金标抗体垫相邻；该胶体金试纸条设置在卡槽的内置空腔内，并使该观察口对应胶体金试纸条的检测线和质控线，加样孔对应样品垫。2.根据权利要求1所述的快速检测乳糜血的免疫胶体金试纸卡，其特征在于，所述金标抗体垫涂有胶体金标记的鼠抗人载脂蛋白B48单克隆抗体。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：王成，刘建强，
申请(专利权)人：诺莱生物医学研究院北京有限公司，
类型：新型
国别省市：北京;11