公开了包含HIV-1 Env蛋白质的一部分和增强抗体的ScFv的融合蛋白，其可以适用于针对HIV-1感染的疫苗接种的免疫原性制剂。还公开了新型广泛中和抗体和经改造的双/三特异性抗HIV-1抗体，其可以适用于预防和/或治疗受试者中的HIV-1感染，以及使用融合蛋白和抗体的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 联邦政府资助的研宄和开发的声明 本专利技术在由NIH授予的授权号AI087181、AI084830、CA149196和AI084580下由政府支 持进行。政府在本专利技术中拥有一定权利。
本专利技术涉及免疫学和病毒学领域。更具体而言，本专利技术涉及可以适用于针对HIV-I 感染的免疫原性制剂的新型融合蛋白，以及可以适用于预防和/或治疗受试者中的HIV-I 感染的新型广泛中和抗体。 专利技术背景 公认针对Hiv-I包膜蛋白（Env)的中和抗体（nAb)可以是保护性的，如通过在非人灵长 类动物中的被动免疫接种研宄中证实的。因此，追求可以中和多样性HIV-I毒株的广 泛nAb (bnAb)的分离作为有效HIV-I疫苗的合理设计的主要路径。 大量有效的新bnAb近来已从多个供体中分离，主要是由于用于分离人单 克隆抗体(mAb)的新技术和采用高流通量中和筛选系统。四类新的有效的HIV-I bnAb已得到鉴定。1)新近分离的'VRC01样'bnAb 可以阻断Env与主要受体⑶4 的结合，并且它们优于先前的⑶4结合位点（⑶4bs)nAb bl2 。2)新近分离的PGT系列 bnAb 是聚糖依赖性的，并且比以前的聚糖依赖性nAb 2G12更加有效和广泛活性， 其可以阻断Env与辅受体CCR5的结合。3)所谓的'PG9样' bnAb结合HIV-I的Env三聚体 上的保守构象表位，所述保守构象表位涉及V1/V2和V3区和聚糖，所述'PG9样' bnAb包括 PG9、PG16 和CH01~04 。与先前鉴定的毒株特异性有效nAb(其识别HIV-I Env的 四价中和表位（QNE ))相比较，它们在广泛性中更佳。新分离的bnAb 10E8靶向gp41 的膜近端外侧区（MPER)，并且比以前的nAb 2F5和4E10更加有效和广泛活性（J. Huang等 人，(2012) 491 :406 - 412)。 这些新的bnAb共同中和大多数高度多样化的HIV-I毒株。然而，这些bnAb还 展示可以是用于HIV-I疫苗开发的重大障碍物的一些罕见特点。这些高度突变的bnAb从 罕见的（〈3%) "优良中和剂"中分离，所述优良中和剂选自超过一千个感染HIV-I的人。与其他Ab应答中的体细胞突变程度相比较，这些HIV-I bnAb的共同特点 是其明显的非常高水平的突变，尤其是在重链V (VH)基因中。这种高水平的突变 对疫苗生成这类Ab应答提出很高的门槛，这可能是HIV-I疫苗开发的重大障碍。另外，这 些bnAb中的一些显示自身/多反应性，这对于B细胞应答是有害的。目前，没有 HIV-I疫苗候选物可以引发bnAb应答。 因此，仍非常需要可以引发bnAb应答的HIV-I疫苗候选物以及具有改良特征的有 效 HIV-I bnAb。 专利技术概述 本专利技术提供了（i)包含HIV-I Env的共同过渡构象结构的融合蛋白免疫原，其可以用 于疫苗制剂中，和（ii)HIV-l广泛中和人单克隆抗体（N60-B1. 1)。另外，本专利技术提供了以多 种方式利用Env免疫原和抗体的疫苗制剂和方法。 在第一个实施方案中，本专利技术涉及包含HIV-I Env多肽的一部分和增强抗体的单 链片段V区的融合蛋白。这些Env融合蛋白包括：gpl20-bl2-ScFV、gpl20-VRC01-ScFV、 gpl20-JR4-ScFV和gpl20-JR48. 1-ScFV。因此，在该实施方案的方面中，本专利技术涉及：包 含SEQIDN0:8中所示的氨基酸序列的gpl20-bl2-ScFV多肽 ；包含SEQIDN0:10中所 示的氨基酸序列的gpl20-VRC01-ScFV多肽；包含SEQ ID N0:12中所示的氨基酸序列的 gpl20-JR4-ScFV多肽；以及包含SEQIDN0:14中所示的氨基酸序列的gpl20-JR48·l-ScFV 多肽。 在相关方面，本专利技术涉及：编码SEQ ID N0:7中所示的gpl20-bl2-ScFV多肽的多 核苷酸序列；编码SEQ ID N0:9中所示的gpl20-VRC01-ScFV多肽的多核苷酸序列；编码SEQ ID N0:11中所示的gpl20-JR4-ScFV多肽的多核苷酸序列；以及编码SEQ ID N0:13中所示 的gpl20-JR48. I-ScFV多肽的多核苷酸序列。 在进一步相关方面，本专利技术涉及 gpl20-bl2-ScFV、gpl20-VRC01-ScFV、 gpl20-JR4-ScFV 和 gpl20-JR48.1-ScFV 的变体。例如，本专利技术涵盖：在如 SEQ ID N0:8 中 所示的gpl20-bl2-ScFV多肽的全长上具有至少约95%序列同一性的变体；在如SEQ ID N0:10中所示的gpl20-VRC01-ScFV多肽的全长上具有至少约95%序列同一性的变体；在 如SEQ ID NO: 12中所示的gpl20-JR4-ScFV多肽的全长上具有至少约95%序列同一性的 变体；以及在如SEQ ID NO: 14中所示的gpl20-JR48. I-ScFV多肽的全长上具有至少约95% 序列同一性的变体。作为另一个例子，本专利技术涵盖在gpl20-bl2-ScFV、gpl20-VRC01-ScFV、 gpl20-JR4-ScFV和gpl20-JR48. I-ScFV多肽的结构域中仅一个或两个内具有至少约95% 序列同一性的变体。例如，氨基酸变化可以限制于下述中的一个或多个：（〇多肽的HIV-I Env多肽结构域，（ii)多肽的接头结构域，和（iii)多肽的ScFV结构域。在变体中的每一 种中，氨基酸变化可以是添加、置换或缺失中的一种或多种，并且变化类型可以通过特定变 体多肽的结构域而改变。 在第二个实施方案中，本专利技术涉及包含下述的免疫原性制剂：Env融合蛋白免 疫原 gpl20-bl2-ScFV、gpl20-VRC01-ScFV、gpl20-JR4-ScFV 和 gpl20-JR48. I-ScFV 中 的一种或多种，其一种或多种变体，以及药学可接受的载体和/或佐剂。因此，在一个方 面，本专利技术涉及包含下述的免疫原性制剂：（a)多肽gpl20-bl2-ScFV(SEQ ID N0:8)、 gpl20-VRC01-ScFV(SEQ ID N0:10)、gpl20-JR4-ScFV(SEQ ID N0:12^Pgpl20-JR48.1-ScFV (SEQ ID NO: 14)中的一种或多种，以及药学可接受的载体和/或佐剂，或（b) (a)的制剂， 其中多肽中的至少一种是变体，并且其中所述变体与全长参考序列具有至少约95%序列 同一性。在相关方面，本专利技术涉及包含下述的免疫原性制剂：多肽或其变体中的两种或更 多种，多肽或其变体中的三种或更多种，以及多肽或其变体中的每一种。在示例性但非限 制性方面，本专利技术涉及包含下述的免疫原性制剂：多肽gpl20-bl2-ScFV (SEQ ID N0:8)、 gpl20-VRC01-ScFV(SEQ ID N0:10)、gpl20-JR4-ScFV(SEQ ID N0:12^Pgpl20-JR48.1-ScFV (SEQ ID NO: 14)中的每一种和药学可接受的载体和/或佐剂。 在第三个本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种免疫原性制剂，其包含：（a）选自gp120‑b12‑ScFV（SEQ ID NO:8）、gp120‑VRC01‑ScFV（SEQ ID NO:10）、gp120‑JR4‑ScFV（SEQ ID NO:12）和gp120‑JR48.1‑ScFV（SEQ ID NO:14）的至少一种多肽，以及药学可接受的载体和/或佐剂，或（b）（a）的制剂，其中所述多肽中的至少一种是变体，并且其中所述变体与所述全长参考序列具有至少约95%序列同一性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：管永军，G路易斯，A德维科，M萨加迪，刘彤云，M佩斯吉尔，
申请(专利权)人：马里兰州大学巴尔的摩，
类型：发明
国别省市：美国;US
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