一种活性乳酸菌素的制备方法及其在生物饲料中的应用技术

本发明专利技术公开了一种活性乳酸菌素的制备方法及其在生物饲料中的应用，制备方法包括：将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节pH至4～5，得到黄绿色透明乳清液；每升乳清液加蛋白胨5～15克，酵母膏2～5克，调节pH值至中性得培养液；培养液在100～120℃下灭菌10～20分钟，冷却至30～40℃后，添加化合物Heteroclitin I，再接入固定化嗜酸乳杆菌发酵培养18～24小时，控制pH值为6～7；发酵结束后，将发酵液离心后上清液与复合浓浆按照重量比1～3:1进行混合，混合均匀后在‑30～‑50℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为20～30％，淀粉的质量百分浓度为5～15％，灭菌后使用。本发明专利技术提供的活性乳酸菌素能够显著改善断奶仔猪的生长性能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物饲料领域，涉及抗菌肽，具体涉及一种活性乳酸菌素的制备方法及其在生物饲料中的应用。
技术介绍
乳酸菌素是由乳酸菌产生的一种具有活性的多肽或蛋白质。大部分细菌素对近缘关系的细菌有抑制作用，少数细菌素抑菌谱很广。乳酸菌素主要可分为热稳定的小分子肽，热敏感的大分子蛋白和羊毛硫抗生素。市面上销售的乳酸菌素是一种纯乳酸菌产生的制剂，是将脱脂乳经杀菌、真空浓缩，再接种乳酸菌发酵后干燥而制成的乳酸菌体及其代谢产物的混合粉状物，可作医药用或食品添加剂，属功能型乳制品。乳酸菌素性质稳定，不受加工条件限制，所以应用范围更为广泛，可应用在包括发酵制乳品、保健食品、化妆品及食品保鲜等领域。乳酸菌素的抗菌功能主要是利用其蛋白质结构上的不同位点电荷数的不同，可造成目标菌细胞膜结构部分改变，具有类似清洁剂功能。一般而言，其杀菌机制是先吸附在目标菌的细胞膜上、再侵入膜内而形成通透孔道，以引起胞内重要物质，如ATP、K+等之流失或生化反应障碍，而导致指标菌死亡。乳酸菌素的作用类似抗生素，但作用机制不同，具专一性，完全不产生抗药性及毒性，而且不易被小肠胰蛋白酶破坏，可有效抑制病原菌的生长。乳酸菌素可以用于生物饲料的添加剂，可以提高牲畜的抗病菌能力，改善牲畜的胃口，进而提高牲畜的生长性能。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种高活性的乳酸菌素，以用于生物饲料的添加剂，显著改善牲畜的生长性能；本专利技术的第二目的在于提供一种含有上述高活性乳酸菌素的生物饲料。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种活性乳酸菌素，通过如下步骤制备而成：步骤S1，先将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节脱脂乳的pH值至4～5，去除蛋白质，得到黄绿色透明乳清液；步骤S2，调制培养液：每升乳清液加蛋白胨5～15克，酵母膏2～5克，调节pH值至中性；步骤S3，制备嗜酸乳杆菌固定化细胞：采用MARS培养基培养嗜酸乳杆菌至
10^10cfu/mL，离心去上清液，下层菌泥加1：1质量比的0.9％生理盐水混匀，制得嗜酸乳杆菌稀释液，每1体积嗜酸乳杆菌稀释液加40～60体积2.5％～3.5％的海藻酸钠溶液，38℃水浴5分钟后吸入注射器，缓慢滴入200～300体积的3％氯化钙溶液中，形成2～3mm直径小球，室温稳定8～10小时。步骤S4，将步骤S2中制备的培养液在100～120℃下灭菌10～20分钟，冷却至30～40℃后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培养液中的浓度为20～30μg/g，再按3～5％的接种量接入步骤S3中制备的固定化嗜酸乳杆菌细胞发酵培养18～24小时，控制pH值为6～7；步骤S5，发酵结束后，将发酵液离心后上清液与复合浓浆按照重量比1～3:1进行混合，混合均匀后在-30～-50℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为20～30％，淀粉的质量百分浓度为5～15％，灭菌后使用。进一步地，所述的活性乳酸菌素通过如下步骤制备而成：步骤S1，先将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节脱脂乳的pH值至4.5，去除蛋白质，得到黄绿色透明乳清液；步骤S2，调制培养液：每升乳清液加蛋白胨10克，酵母膏3.5克，调节pH值至中性；步骤S3，制备嗜酸乳杆菌固定化细胞：采用MARS培养基培养嗜酸乳杆菌至10^10cfu/mL，离心去上清液，下层菌泥加1：1质量比的0.9％生理盐水混匀，制得嗜酸乳杆菌稀释液，每1体积嗜酸乳杆菌稀释液加40体积2.5％的海藻酸钠溶液，38℃水浴5分钟后吸入注射器，缓慢滴入200体积的3％氯化钙溶液中，形成2mm直径小球，室温稳定8小时。步骤S4，将步骤S2中制备的上述培养液在110℃下灭菌15分钟，冷却至35℃后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培养液中的浓度为25μg/g，再按4％的接种量接入步骤S3中制备的固定化嗜酸乳杆菌细胞发酵培养21小时，控制pH值为6～7；步骤S5，发酵结束后，将发酵液离心后上清液与复合浓浆按照重量比2:1进行混合，混合均匀后在-40℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为25％，淀粉的质量百分浓度为10％，灭菌后使用。进一步地，所述的活性乳酸菌素通过如下步骤制备而成：步骤S1，先将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节脱脂乳的pH值至4，去除蛋白质，得到黄绿色透明乳清液；步骤S2，调制培养液：每升乳清液加蛋白胨5克，酵母膏2克，调节pH值至中性；步骤S3，制备嗜酸乳杆菌固定化细胞：采用MARS培养基培养嗜酸乳杆菌至10^10cfu/mL，离心去上清液，下层菌泥加1：1质量比的0.9％生理盐水混匀，制得嗜酸乳杆
菌稀释液，每1体积嗜酸乳杆菌稀释液加50体积3％的海藻酸钠溶液，38℃水浴5分钟后吸入注射器，缓慢滴入250体积的3％氯化钙溶液中，形成2.5mm直径小球，室温稳定9小时。步骤S4，将步骤S2中制备的上述培养液在100℃下灭菌20分钟，冷却至30℃后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培养液中的浓度为20μg/g，再按3％的接种量接入步骤S3中制备的固定化嗜酸乳杆菌细胞发酵培养24小时，控制pH值为6～7；步骤S5，发酵结束后，将发酵液与复合浓浆按照重量比3:1进行混合，混合均匀后在-30℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为20％，淀粉的质量百分浓度为5％，灭菌后使用。进一步地，所述的活性乳酸菌素通过如下步骤制备而成：步骤S1，先将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节脱脂乳的pH值至5，去除蛋白质，得到黄绿色透明乳清液；步骤S2，调制培养液：每升乳清液加蛋白胨15克，酵母膏5克，调节pH值至中性；步骤S3，制备嗜酸乳杆菌固定化细胞：采用MARS培养基培养嗜酸乳杆菌至10^10cfu/mL，离心去上清液，下层菌泥加1：1质量比的0.9％生理盐水混匀，制得嗜酸乳杆菌稀释液，每1体积嗜酸乳杆菌稀释液加60体积3.5％的海藻酸钠溶液，38℃水浴5分钟后吸入注射器，缓慢滴入300体积的3％氯化钙溶液中，形成3mm直径小球，室温稳定10小时。步骤S4，将步骤S2中制备的上述培养液在120℃下灭菌10分钟，冷却至40℃后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培养液中的浓度为30μg/g，再按5％的接种量接入步骤S3中制备的固定化嗜酸乳杆菌细胞发酵培养18小时，控制pH值为6～7；步骤S5，发酵结束后，将发酵液离心后上清液与复合浓浆按照重量比1:1进行混合，混合均匀后在-50℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为30％，淀粉的质量百分浓度为15％，灭菌后使用。一种生物饲料，含有上述活性乳酸菌素，每100kg生物饲料中添加60～80g活性乳酸菌素。上述活性乳酸菌素在提高牲畜生长性能方面的应用。上述生物饲料在提高牲畜生长性能方面的应用。本专利技术的优点：本专利技术提供的活性乳酸菌素生物活性高，添加到饲料中后，可以显著改善断奶仔猪生长性能。本专利技术与现有技术相比，具有突出的实质性特点和显著的进步。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种活性乳酸菌素，其特征在于，通过如下步骤制备而成：步骤S1，先将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节脱脂乳的pH值至4～5，去除蛋白质，得到黄绿色透明乳清液；步骤S2，调制培养液：每升乳清液加蛋白胨5～15克，酵母膏2～5克，调节pH值至中性；步骤S3，制备嗜酸乳杆菌固定化细胞：采用MARS培养基培养嗜酸乳杆菌至10^10cfu/mL，离心去上清液，下层菌泥加1：1质量比的0.9％生理盐水混匀，制得嗜酸乳杆菌稀释液，每1体积嗜酸乳杆菌稀释液加40～60体积2.5％～3.5％的海藻酸钠溶液，38℃水浴5分钟后吸入注射器，缓慢滴入200～300体积的3％氯化钙溶液中，形成2～3mm直径小球，室温稳定8～10小时。步骤S4，将步骤S2中制备的培养液在100～120℃下灭菌10～20分钟，冷却至30～40℃后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培养液中的浓度为20～30μg/g，再按3～5％的接种量接入步骤S3中制备的固定化嗜酸乳杆菌细胞发酵培养18～24小时，控制pH值为6～7；步骤S5，发酵结束后，将发酵液离心后上清液与复合浓浆按照重量比1～3:1进行混合，混合均匀后在‑30～‑50℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为20～30％，淀粉的质量百分浓度为5～15％，灭菌后使用。...

【技术特征摘要】
1.一种活性乳酸菌素，其特征在于，通过如下步骤制备而成：步骤S1，先将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节脱脂乳的pH值至4～5，去除蛋白质，得到黄绿色透明乳清液；步骤S2，调制培养液：每升乳清液加蛋白胨5～15克，酵母膏2～5克，调节pH值至中性；步骤S3，制备嗜酸乳杆菌固定化细胞：采用MARS培养基培养嗜酸乳杆菌至10^10cfu/mL，离心去上清液，下层菌泥加1：1质量比的0.9％生理盐水混匀，制得嗜酸乳杆菌稀释液，每1体积嗜酸乳杆菌稀释液加40～60体积2.5％～3.5％的海藻酸钠溶液，38℃水浴5分钟后吸入注射器，缓慢滴入200～300体积的3％氯化钙溶液中，形成2～3mm直径小球，室温稳定8～10小时。步骤S4，将步骤S2中制备的培养液在100～120℃下灭菌10～20分钟，冷却至30～40℃后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培养液中的浓度为20～30μg/g，再按3～5％的接种量接入步骤S3中制备的固定化嗜酸乳杆菌细胞发酵培养18～24小时，控制pH值为6～7；步骤S5，发酵结束后，将发酵液离心后上清液与复合浓浆按照重量比1～3:1进行混合，混合均匀后在-30～-50℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为20～30％，淀粉的质量百分浓度为5～15％，灭菌后使用。2.根据权利要求1所述的活性乳酸菌素，其特征在于，通过如下步骤制备而成：步骤S1，先将鲜乳脱脂得到脱脂乳，调节脱脂乳的pH值至4.5，去除蛋白质，得到黄绿色透明乳清液；步骤S2，调制培养液：每升乳清液加蛋白胨10克，酵母膏3.5克，调节pH值至中性；步骤S3，制备嗜酸乳杆菌固定化细胞：采用MARS培养基培养嗜酸乳杆菌至10^10cfu/mL，离心去上清液，下层菌泥加1：1质量比的0.9％生理盐水混匀，制得嗜酸乳杆菌稀释液，每1体积嗜酸乳杆菌稀释液加40体积2.5％的海藻酸钠溶液，38℃水浴5分钟后吸入注射器，缓慢滴入200体积的3％氯化钙溶液中，形成2mm直径小球，室温稳定8小时。步骤S4，将步骤S2中制备的上述培养液在110℃下灭菌15分钟，冷却至35℃后，先添加化合物Heteroclitin I，使其在培养液中的浓度为25μg/g，再按4％的接种量接入步骤S3中制备的固定化嗜酸乳杆菌细胞发酵培养21小时，控制pH值为6～7；步骤S5，发酵结束后，将发酵液离心后上清液与复合浓浆按照重量比2:1进行混合，混合均匀后在-40℃下冷冻干燥得到活性乳酸菌素；其中，所述复合浓浆为葡萄糖和淀粉的复合溶液，葡萄糖的质量百分浓度为25％，淀粉的质量百分浓度为10％，灭菌后使用。3.根据权利要求1所述的活性乳酸菌素，其特征在于，通过如下步骤制备而成：步骤S...

【专利技术属性】
技术研发人员：李世超，方华，季春源，朱校适，李旺军，夏佳吉，
申请(专利权)人：江苏盐城源耀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32