本发明专利技术属于中药鉴定方法学领域，涉及吴茱萸汤中人参皂苷的检测方法和应用，具体涉及人参皂苷体内外的检测方法和其在治疗偏头痛的吴茱萸汤中的作用。本发明专利技术采用现代的HPLC和质谱检测技术相结合，结果准确,重现性好,操作简便快速,符合生物样品分析的要求,以佐药人参为切入点，研究吴茱萸汤中相关成分的大鼠血浆药动学，为客观的评价复方组分在人体或动物体内的药动学规律以及以及其在复方中的作用提供方法学参考。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于中药鉴定方法学领域，涉及，具体涉及人参皂苷体内外的检测方法和其在治疗偏头痛的吴茱萸汤中的作用。本专利技术采用现代的HPLC和质谱检测技术相结合，结果准确,重现性好,操作简便快速,符合生物样品分析的要求,以佐药人参为切入点，研究吴茱萸汤中相关成分的大鼠血浆药动学，为客观的评价复方组分在人体或动物体内的药动学规律以及以及其在复方中的作用提供方法学参考。【专利说明】
本专利技术属于中药鉴定方法学领域，涉及， 具体涉及人参皂苷体内外的检测方法和其在治疗偏头痛的吴茱萸汤中的作用。
技术介绍
人参自古作为"开心益智、轻身延年"的上品，临床应用已有几千年的历史，目前人 们研究认为其在体内发挥疗效的主要药效成分是人参皂苷，现代药理研究表明，人参皂苷 具有改善微循环、提高组织抗缺氧能力、抑制血小板聚集、Ca 2+拮抗作用、影响前列腺素代 谢、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性，近年来人们发现其在心血管系统中也具有较 好的作用，可以保护心功能、阻滞钙通道、抗自由基、抗休克、抗脑缺血、保护脑损伤等。 人参中分离得到的化合物主要是人参皂苷类化合物，人参根含总皂苷约4%，是多 种皂苷的混合物。根据皂苷元在酸性水解过程中转变得到的次皂苷元结构的不同，将人参 皂苷分成原人参萜二醇型人参皂苷、原人参萜三醇型人参皂苷和齐墩果酸型人参皂苷，主 要包括人参皂苷Rb 1，Rb2，Rc，Rd，Re，Rgl等。人参皂苷Rb 1具有营养神经，促进轴突外生和神经 再生的作用，人参皂苷Rg3具有选择性抑制肿瘤细胞生长、浸润和转移的作用。 吴茱萸汤源自汉代张仲景的《伤寒论》，由吴茱萸（9g)、生姜（18g)、人参(9g)和大 枣(4枚）四味中药组成。方中吴茱萸味辛性热，归肝肾脾胃经，温中下气止痛，温胃止呕，温 肝降逆，温肾以止吐利，为君药;生姜味辛性温，归肺胃脾经，温胃散寒，降逆止呕，以助吴茱 萸之力，为臣药;人参味甘微苦，性温，归脾肺经，补脾益气，以复中虚，以助吴茱萸温阳化浊 之力，为佐药;大枣味甘性温，归脾胃经，调和诸药，益气补脾，为使药。 皂苷类成分吸收差生物利用度低，再加上其UV吸收差，通常的检测器难以达到其 检测限。本专利技术拟采用不同条件下的HPLC、质谱技术，建立一种高效的以人参皂苷为切入点 的体内外检测方法。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种在一个条件下同时定量检测体外或血浆中 人参总皂苷的Rg1，Re，RbjPRd 4成分的方法。 本专利技术是通过如下技术方案实现的： 1.制备储备液，可采用常规方法制备。 2.制备血浆，可采用常规方法制备。 3.色谱条件调整:C18色谱柱，流动相为甲醇-0.1 %的甲酸溶液、0.5%。-0.1 %甲酸 水-0.5%。-0.1 %甲酸乙腈，进行梯度洗脱。甲醇-0.1 %的甲酸溶液中，甲醇的梯度为58%_ 90 %。0.5%。甲酸水-0.5%。甲酸乙腈条件下，乙腈的梯度为20 % -50 %。0.1 %甲酸水-0.1 % 甲酸乙腈条件下，水为45%-98%，乙腈为2%-55%流速0.2-lmL · min-1，柱温为20-35°C。 4.质谱条件调整:ESI正离子扫描碱金属加合峰+或 +。离子喷射电压 5500V，源内气体1为310.275KPa，源内气体2为344.75KPa，气帘气体137.9KPa，源内温度500 °C。检测方式为正离子检测，扫描方式为选择反应监测(MRM)方式。 电喷雾ESI离子源；气帘气为IOps;雾化气（GASl)为40ps;加热辅助气（GAS2)为 40ps;碰撞气CAD为Medium;喷雾电压IS为5500V;雾化温度为500 °C;检测方式为正离子多离 子反应检测。 一级全扫描条件:ESI正离子扫描，毛细管电压：2.8kV;锥孔电压：30V;提取电压： 3.0￥，透镜电压 ：0.0￥;源温：120°(：;脱溶剂气流速和温度分别为6001111/1^11和350°(：;锥孔 气：50ml/min〇 5.软件分析 人参阜苷类成分在电喷雾离子源正离子扫描模式下有很强的碱金属加合峰+或 +，而准分子离子峰+强度很弱或没有，这是因为人参皂苷的+峰在离 子源内具有十分强的热不稳定性，容易源内裂解(CID)成碎片，而+峰非常稳定。根据 人参皂苷类成分的+峰源内可裂解成不同的碎片，可以判断人参皂苷的母核类型。m/z 405和423是20S-原人参萜三醇型人参皂苷的特征源内裂解碎片，m/z 407和425是20S-原人 参萜二醇型人参皂苷的特征源内裂解碎片，而m/z 439是齐墩果烷型人参皂苷的特征源内 裂解碎片。 正离子多离子反应监测(MRM)，用于定量分析的离子为m/zRgl 832.8-643.6;Re 969.8-789.7;Rbi 1132.1-365.3,定性分析的离子为m/z Rgi832.8-203.2;Re 969·8- 203.2;Rbi 1132.1-789.7。 本专利技术还提供了对含人参的吴茱萸汤在不同配伍条件下，各个化学成分的提取量 进行色谱分析的方法:流动相：乙腈-0.1-0.2 %磷酸水系统为流动相，其中乙腈为8-85 %， 水为15-92%。检测波长:吴茱萸碱、吴茱萸内酯和6-姜酚选择在最大吸收波长220-230nm， 尤其225nm下检测，而去氢吴茱萸碱、吴茱萸次碱和绿原酸选择在340-350nm，尤其345nm波 长下检测，干扰少，专属性强。提药：用50倍80 %甲醇水超声提取40min，即可将样品中的待 测组分提取完全。 将传统的液液萃取样品预处理方法与现代的HPLC和质谱检测技术相结合，结果准 确，重现性好，操作简便快速，符合生物样品分析的要求，以佐药人参为切入点，研究吴茱萸 汤中相关成分的大鼠血浆药动学，为客观的评价复方组分在人体或动物体内的药动学规律 以及以及其在复方中的作用提供方法学参考。【具体实施方式】 实施例1:色谱条件:色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6mmX150mm，5ym)，流 动相为甲醇-〇. 1 %的甲酸溶液，梯度洗脱(4min-58%甲醇，6min-90%甲醇，6.01min-58% 甲醇）。流速为〇. 5mL · min-1，柱温为20 °C。 质谱条件：离子喷射电压5500V，源内气体1为310.275KPa，源内气体2为 344.75KPa，气帘气体137.9KPa，源内温度500°C。检测方式为正离子检测，扫描方式为选择 反应监测(MRM)方式，用于定量分析的离子对(m/z): 823.6/203.1 (人参皂苷Rg1 )，969.7/ 789.0(人参皂苷Re)，1131.8/365.1 (人参皂苷Rbi)和823.6/789.5(人参皂苷Rd)。实施例2:色谱条件：色谱柱为RESTEK Pinnacle-C18柱（50mm-2 · Imm,5μπι);柱温： 20°C ;流速为200yL/m in;流动相为A水（体积分数0.5%。甲酸），Β乙腈（体积分数0.5%〇甲 酸），梯度洗脱（〇-in，流动相B体积分数20 %-50 % ; 13-13. Imin，流动相B体积分数50%-20% ; 13. l-23min,流动相B体积分数20% )。质本文档来自技高网...
【技术保护点】
吴茱萸汤中人参皂苷的检测方法，采用高效液相与质谱联用技术，其特征在于，所述高效液相的流动相为甲醇‑0.1%的甲酸溶液、0.5‰‑0.1%甲酸水‑0.5‰‑0.1%甲酸乙腈，进行梯度洗脱；流速0.2 ‑1mL·min‑1，柱温为20‑35℃；所述质谱为ESI正离子扫描。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁子悦，毕开顺，李清，许华容，胡紫霞，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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