人参皂苷Rh2的生产方法技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，公开了人参皂苷Rh2的生产方法，包括菌种培养、选取原料、生物发酵转化、压滤、灭菌、干燥，得到产物。本发明专利技术制备的人参皂苷Rh2提取物具有疗效高，纯度高，吸收好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳，含量高，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，尤其涉及人参皂苷Rh2的生产方法。
技术介绍
人参皂苷Rh2为人参类皂苷经水解产生的次级皂苷，药效学研究表明：人参皂苷Rh2对肝癌、黑色素瘤B16、宫颈癌及肉瘤S180等癌细胞的增殖有显著的特异性的抑制作用。其作用机理为：在癌细胞增殖过程中，经人参皂苷Rh2作用，使癌细胞停止在一定的增殖期，并促使其逆转为正常细胞。现有技术分离人参皂苷Rh2的效果不佳。过去多采用化学方法如酸或碱水解，化学法存在产率低、副产物多、污染环境等缺点。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的缺点，公开了人参皂苷Rh2的生产方法。为了解决上述技术问题，本专利技术通过下述技术方案得以解决。人参皂苷Rh2的生产方法，包括以下步骤，A.在无菌状态下，将保加利亚乳杆菌接种到培养基上，温度控制在37℃厌氧培养24小时；将培养好的保加利亚乳杆菌菌种，接种保加利亚乳杆菌菌种，在厌氧培养箱中静置培养24小时，再进行两次扩培；B.选取表面呈灰黄色的人参，将人参粉碎成人参粉末，粉末中杂质不超过1％；C.把人参粉末与水加入发酵罐内，5L水中加入0.8-1.5kg人参粉末，开始搅拌；打开蒸汽阀，向罐体夹层通入蒸汽，蒸汽走向为上部进入，下部排出，当料液温度升至121℃时，关闭搅拌，控制夹层压力为0.1-0.12mpa，保温灭菌30分钟；灭菌结束后，关闭夹层的进汽阀，排空夹层内的蒸汽，等夹层的压力降为零时，打开搅拌，接着往夹层通冷水降温，水的流向为下进上出，当料液温度降至50-55℃时，关闭进水开关，排空夹层内的水；向发酵罐内加入食用磷酸调节料液的PH值至6时，按照400U/mg加入纤维素酶，酶解3小时；酶解完毕后，调节料液的PH为7，降温至42-45℃之间，将乳酸菌培养液加入发酵罐进行二次发酵，发酵时间24小时，加入乳酸菌培养液的体积为料液体积的15％；D.把发酵好的料液，加入到压滤机中压滤得到物料，物料经灭菌、干燥，干燥后物料的水份达到8％以下，得到产物；步骤A中，培养基配比为蛋白胨8-12g，葡萄糖18-23g，牛肉浸膏9-12g，酵母浸膏3.5-6g，乙酸钠3.5-6g，柠檬酸氢二铵1.5-2.5g，磷酸氢二钾1.5-2.5g，四水硫酸锰0.2-0.3g。作为优选，步骤A中，培养基配比为蛋白胨10g，葡萄糖20g，牛肉浸膏10g，酵母浸膏5g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二铵2g，磷酸氢二钾2g，四水硫酸锰0.25g。作为优选，步骤A中，培养基的pH值为5.5-6.0，培养基在121℃高温灭菌30分钟，灭菌后冷却至45度。作为优选，步骤A中，第一次扩培使用200ml的培养基；第二次扩培使用400ml的培养基。作为优选，步骤B中，人参表面不得有霉斑。作为优选，步骤B中，人参中水分的含量≤8％。人参气味浓烈、纯正。作为优选，步骤C中，发酵罐在使用前，冲洗干净罐内和罐体。作为优选，步骤D中，压滤的过程具体为，把发酵好的料液，用输料泵加入到压滤机中，随着料液的进入，压滤机的压力会渐渐上升；在泵液过程中，压力要控制平稳，压滤机的进口压小于0.6MPa；当压滤机的进口压力升至0.6MPa时，关闭压滤机的进料阀，同时开循环阀，然后关闭输料泵，等压滤机的压力降为零时，摇动液压杆，打开压滤机，取出物料。采用压滤机循环过滤，使产物能最大化的收集。作为优选，步骤D中，灭菌、干燥过程，把从压滤机中取出的物料铺平在干燥箱中的托盘中，物料的厚度控制在1-2厘米，箱体内通入蒸汽，当温度升至121℃时，保温灭菌30分钟；打开抽湿装置，进行抽真空，将温度控制在70-80℃，经2小时后得到产物。采用喷雾干燥，能使产物更均匀干燥。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：人参皂苷Rh2提取难度大，要转化高含量人参皂苷成为高活性的稀有人参皂苷实际上就是将人参皂苷中的糖链选择性水解。本专利技术使用酶催化的生物转化法，具有选择性高、副产物少、环境污染小等优点；解决了现有化学方法(如酸或碱水解)存在的产率低、副产物多、污染环境等技术缺点。本专利技术制备的人参皂苷Rh2提取物具有疗效高，纯度高，吸收好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳，含量高，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。具体实施方式实施例1人参皂苷Rh2的生产方法，包括以下步骤，A.在无菌状态下，将保加利亚乳杆菌接种到培养基上，温度控制在37℃厌氧培养24小时；将培养好的保加利亚乳杆菌菌种，接种保加利亚乳杆菌菌种，在厌氧培养箱中静置培养24小时，再进行两次扩培；B.选取表面呈灰黄色的人参，将人参粉碎成人参粉末，粉末中杂质不超过1％；C.把人参粉末与水加入发酵罐内，5L水中加入0.8kg人参粉末，开始搅拌；打开蒸汽阀，向罐体夹层通入蒸汽，蒸汽走向为上部进入，下部排出，当料液温度升至121℃时，关闭搅拌，控制夹层压力为0.1mpa，保温灭菌30分钟；灭菌结束后，关闭夹层的进汽阀，排空夹层内的蒸汽，等夹层的压力降为零时，打开搅拌，接着往夹层通冷水降温，水的流向为下进上出，当料液温度降至50℃时，关闭进水开关，排空夹层内的水；向发酵罐内加入食用磷酸调节料液的PH值至6时，按照400U/mg加入纤维素酶，酶解3小时；酶解完毕后，调节料液的PH为7，降温至42-45℃之间，将乳酸菌培养液加入发酵罐进行二次发酵，发酵时间24小时，加入乳酸菌培养液的体积为料液体积的15％；D.把发酵好的料液，加入到压滤机中压滤得到物料，物料经灭菌、干燥，干燥后物料的水份达到8％以下，得到产物；步骤A中，培养基配比为蛋白胨8g，葡萄糖18g，牛肉浸膏9g，酵母浸膏3.5g，乙酸钠3.5g，柠檬酸氢二铵1.5g，磷酸氢二钾1.5g，四水硫酸锰0.2g。步骤A中，培养基的pH值为5.5，培养基在121℃高温灭菌30分钟，灭菌后冷却至45度。第一次扩培使用200ml的培养基；第二次扩培使用400ml的培养基。步骤B中，人参表面不得有霉斑。人参中水分的含量≤8％。步骤C中，发酵罐在使用前，冲洗干净罐内和罐体。步骤D中，压滤的过程具体为，把发酵好的料液，用输料泵加入到压滤机中，随着料液的进入，压滤机的压力会渐渐上升；在泵液过程中，压力要控制平稳，压滤机的进口压小于0.6MPa；当压滤机的进口压力升至0.6MPa时，关闭压滤机的进料阀，同时开循环阀，然后关闭输料泵，等压滤机的压力降为零本文档来自技高网...

【技术保护点】
人参皂苷Rh2的生产方法，其特征在于：包括以下步骤，A.在无菌状态下，将保加利亚乳杆菌接种到培养基上，温度控制在37℃厌氧培养24小时；将培养好的保加利亚乳杆菌菌种，接种保加利亚乳杆菌菌种，在厌氧培养箱中静置培养24小时，再进行两次扩培；B.选取表面呈灰黄色的人参，将人参粉碎成人参粉末，粉末中杂质不超过1％；C.把人参粉末与水加入发酵罐内，5L水中加入0.8‑1.5kg人参粉末，开始搅拌；打开蒸汽阀，向罐体夹层通入蒸汽，蒸汽走向为上部进入，下部排出，当料液温度升至121℃时，关闭搅拌，控制夹层压力为0.1‑0.12mpa，保温灭菌30分钟；灭菌结束后，关闭夹层的进汽阀，排空夹层内的蒸汽，等夹层的压力降为零时，打开搅拌，接着往夹层通冷水降温，水的流向为下进上出，当料液温度降至50‑55℃时，关闭进水开关，排空夹层内的水；向发酵罐内加入食用磷酸调节料液的PH值至6时，按照400U/mg加入纤维素酶，酶解3小时；酶解完毕后，调节料液的PH为7，降温至42‑45℃之间，将乳酸菌培养液加入发酵罐进行二次发酵，发酵时间24小时，加入乳酸菌培养液的体积为料液体积的15％；D.把发酵好的料液，加入到压滤机中压滤得到物料，物料经灭菌、干燥，干燥后物料的水份达到8％以下，得到产物；步骤A中，培养基配比为蛋白胨8‑12g，葡萄糖18‑23g，牛肉浸膏9‑12g，酵母浸膏3.5‑6g，乙酸钠3.5‑6g，柠檬酸氢二铵1.5‑2.5g，磷酸氢二钾1.5‑2.5g，四水硫酸锰0.2‑0.3g。...

【技术特征摘要】
1.人参皂苷Rh2的生产方法，其特征在于：包括以下步骤，
A.在无菌状态下，将保加利亚乳杆菌接种到培养基上，温度控制在37℃厌
氧培养24小时；
将培养好的保加利亚乳杆菌菌种，接种保加利亚乳杆菌菌种，在厌氧培养
箱中静置培养24小时，再进行两次扩培；
B.选取表面呈灰黄色的人参，将人参粉碎成人参粉末，粉末中杂质不超过
1％；
C.把人参粉末与水加入发酵罐内，5L水中加入0.8-1.5kg人参粉末，开始
搅拌；打开蒸汽阀，向罐体夹层通入蒸汽，蒸汽走向为上部进入，下部排出，
当料液温度升至121℃时，关闭搅拌，控制夹层压力为0.1-0.12mpa，保温灭菌
30分钟；
灭菌结束后，关闭夹层的进汽阀，排空夹层内的蒸汽，等夹层的压力降为
零时，打开搅拌，接着往夹层通冷水降温，水的流向为下进上出，当料液温度
降至50-55℃时，关闭进水开关，排空夹层内的水；
向发酵罐内加入食用磷酸调节料液的PH值至6时，按照400U/mg加入纤
维素酶，酶解3小时；
酶解完毕后，调节料液的PH为7，降温至42-45℃之间，将乳酸菌培养液
加入发酵罐进行二次发酵，发酵时间24小时，加入乳酸菌培养液的体积为料液
体积的15％；
D.把发酵好的料液，加入到压滤机中压滤得到物料，物料经灭菌、干燥，
干燥后物料的水份达到8％以下，得到产物；
步骤A中，培养基配比为蛋白胨8-12g，葡萄糖18-23g，牛肉浸膏9-12g，
酵母浸膏3.5-6g，乙酸钠3.5-6g，柠檬酸氢二铵1.5-2.5g，磷酸氢二钾1.5-2.5g，

\t四水硫酸锰0.2-0.3g。
2.根据权利要求1所述的人参皂苷Rh2的生产方法，其特征在于：步骤A中，
培养基配比...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯建平，常勇进，
申请(专利权)人：杭州双马生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33