一种快速检测甜茶苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测甜茶苷的方法，属于分析化学技术领域。本发明专利技术反相高效液相色谱方法，在色谱柱：C18(5μm，150×4.6mm i.d)，流动相组成的体积比：甲醇：水＝50～80:10～30，流速：1.0mL/min，柱温：30℃，检测波长：210nm，进样量：3～5μL的检测条件下分别建立甜茶苷的标准曲线和测定纯化的甜茶苷粉末。该方法能够准确快速地测定出样品中甜茶苷的含量，且本方法成本低，为大批量样品的快速检测甜茶苷提供简便可靠的分析方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学
，具体地说是。
技术介绍
甜茶，是蔷薇科悬钩子属、多年生有刺灌木，主要分布于广西。甜茶主要成分有甜 茶苷、茶多酚、总黄酮、碳水化合物、蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质等。其中，含甜茶苷 4-6%，茶多酚8. 9%左右，黄酮大约3. 2%。甜茶苷，ent-贝壳松烯糖苷，与甜叶菊糖苷结构 相似，只是在C13位上少一个葡萄糖分子。甜茶苷是一种无毒、高甜度、低热值的甜味物质， 具有降血压、降血糖、促进新陈代谢、治疗胃酸过多等功效，可广泛应用于食品、医药工业， 现已出口日本、东南亚等地。 甜茶苷是由斯替维醇和葡萄糖结合而成的二萜苷，可以通过测定斯替维醇的含量 来定量甜茶苷。目前，用于斯替维醇含量的检测方法主要有：分光光度法、气相色谱法、薄 层-气谱联用法、超高效液相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法。其中，分光光度法耗时 长达6h，操作复杂；气相色谱法虽然技术成熟，但是常与其他的色谱技术联用检测，而且气 相色谱不适用于不挥发性和热敏性的物质；对于难分离的样品，气相色谱受到限制；和气 相色谱相比液相色谱对样品易回收且是定量的。所以，相对于其它几种方法，高效液相色谱 法更适合于甜茶苷的检测。 现有技术中用于检测甜茶苷的高效液相色谱法大多采用乙腈以及乙腈混合体系 作为流动相，成本较高；也有采用甲醇作为流动相报道，但是流动相中甲醇比例较高，因而 检测成本较高，且已有报道方法中甜茶苷出峰时间长达16. 60min和28. 80min，严重影响检 测甜茶苷的效率。如《甜茶叶中甜茶苷的测定》中虽然是采用高效液相色谱法对甜茶苷进 行检测，但是此文中流动相组分体积比为甲醇：三氟乙酸=75:25,且保留时间为7.Omin左 右，此方法成本高，耗时长，效率低；又如《甜茶叶中甜茶苷的UPLC-MS/MS分析》中采用超高 效液相色谱-质谱联用法测定广西特产甜茶叶中的主要甜味成分甜茶苷的含量，流动相为 乙腈和蒸馏水混合液，乙腈相体积由20%变化到65%，因而，此方法检测成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种采用高效液相色谱法快速检测甜茶中甜茶苷的方法，以 克服现有技术中甜茶苷检测成本高、效率低的问题。本专利技术提供的技术方案为： -种快速检测甜茶苷的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)分别配制甜茶苷的标样及样品溶液； (2)将甜茶苷标样在紫外检测器波长190?400nm进行扫描，得到最佳吸收波长； (3)采用反相高效液相色谱方法，高效液相色谱条件为： 色谱柱：C18 (5um，150X4. 6mmi.d), 流动相组成的体积比：甲醇：水=50?80:10?30， 流速：1.OmL/min， 柱温：30°C， 进样量：3 ?5iiL; (4)建立标准曲线，求出甜茶苷样品溶液中甜茶苷的含量。 作为优选，所述流动相组成的体积比：甲醇：水=75:25。 作为优选，所述配制甜茶苷标样溶液的方法为：准确称取25mg甜茶苷标样用甲 醇：水=75:25体积比的流动相溶解，定容至2511^，分别取母液0,0.2,0.4,0.6,0.8，1，1.2， 1. 4,1. 6,1. 8, 2mL用流动相定容至10mL，得到不同浓度的甜茶苷标准品。 作为优选，所述配制甜茶苷样品溶液的方法为：称取l〇mg纯化的甜茶苷粉末用流 动相溶解定容至10mL，然后过膜、进样。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于： 1、本专利技术用到的是较低比例的甲醇和水为流动相，避免了乙腈流动相的高成本。 2、本专利技术目标峰出峰时间耗时短，可以用于大批量甜茶苷样品的检测，大大提高 了检测效率。 【附图说明】 图1为甜茶苷在波长190?400nm的扫描图谱； 图2为甜茶苷标准样品在流动相（甲醇：水=75:25)的色谱图； 图3为甜茶苷的标准曲线。 【具体实施方式】 1、下列实施例所用材料和仪器： 纯化的甜茶苷粉末（自制），甜茶苷标准品（市售）； waters高效液相色谱仪，超声波，分析天平，容量瓶，注射器，滤膜。 2、标准品溶液和样品溶液的配制： (1)准确称取25mg甜茶苷标准品用流动相定容至25mL，备用； (2)准确称取10mg纯化的甜茶苷粉末加流动相超声溶解，定容至10mL，过膜备用。 实施例1 :最伴波长的诜择 选取甜茶苷标准溶液，随行试剂重蒸水为空白，在190?400nm扫描，所得波长扫 描图谱如图1所示，甜茶苷在波长210nm有最大吸收峰，因此，选择210nm为最佳吸收波长。 实施例2:标准曲线的绘制 分别取配制好的lmg/L的甜茶苷标准品溶液0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1、1. 2、1. 4、 1. 6、1. 8、2mL至10mL容量瓶，用流动相定容至刻度线，得到不同浓度的甜茶苷标样溶液，过 膜进样。在甲醇：水=75:25,波长210nm，柱温30°C，流速lmL/min的条件下进样lOiiL。 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作出甜茶苷的标准曲线，详见图3。 实施例3:本方法的准确度及仪器的精密度测定 在已知含量的一系列样品中添加标准品，分别计算添加回收率。从表1中可以看 出，本方法添加回收率在99. 41?100. 03%之间，平均回收率为99. 90%，说明该方法准确 度好。 表1加样回收率试验（n=6) 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测甜茶苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制甜茶苷的标样溶液及样品溶液；(2)将甜茶苷标样在紫外检测器波长190～400nm进行扫描，得到最佳吸收波长；(3)采用反相高效液相色谱方法，高效液相色谱条件为：色谱柱：C18(5μm，150×4.6mm i.d)，流动相组成的体积比：甲醇：水＝50～80:10～30，流速：1.0mL/min，柱温：30℃，进样量：3～5μL；(4)建立标准曲线，求出甜茶苷样品溶液中甜茶苷的含量。

【技术特征摘要】
1. 一种快速检测甜茶苷的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 配制甜茶苷的标样溶液及样品溶液； (2) 将甜茶苷标样在紫外检测器波长190?400nm进行扫描，得到最佳吸收波长； (3) 采用反相高效液相色谱方法，高效液相色谱条件为： 色谱柱：C18 (5 u m，150 X 4. 6mm i. d)， 流动相组成的体积比：甲醇：水=50?80:10?30, 流速：1. OmL/min, 柱温：30°C， 进样量：3?5iiL; (4) 建立标准曲线，求出甜茶苷样品溶液中甜茶苷的含量。2. 根据权利要求1所述的快速检测甜茶苷的方法，其特征在于，所述流动相组成的体 积比为：甲醇：水=75:25。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨洋，叶琴，赵芬芬，马万良，胡振兴，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45