一种新型木脂素苷类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种木脂素苷的制备方法和应用，所述的新型木脂素苷结构式为：所述的新型木脂素苷分子式为C27H34O13，分子量为566。该化合物命名为分药花木脂素苷A(1)。所述的制备方法是以干燥分药花属植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离。所述的应用为分药花木脂素苷A在制备乙型肝炎病毒(HBV)药物中的应用。经体外抗HBV活性实验，分药花木脂素苷A能显著抑制HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg和HBeAg，还能显著降低细胞内HBV DNA。本发明专利技术化合物分药花木脂素苷A为结构新颖的木脂素单糖苷，活性好，可作为抗HBV药物先导性化合物，有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种新型木脂素苷类化合物及其制备方法和应用
本专利技术属于植物有效成分提取
，具体涉及一种木脂素苷类化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
分药花属(Perovskia)植物全球约7种，主要分布在伊朗、巴基斯坦、印度以及我国的西藏和新疆。我国西藏有2种。研究表明，分药花属植物富含松香烷型二萜和Icetexane型二萜。这类二萜类成分结构新颖多样，且具有广泛的药理活性，其中的丹参醌类结构具有广谱强效的抗肿瘤活性。我们在前期抗HBV活性筛选过程中，发现滨藜叶分药花的90％乙醇提取物具有显著的抗HBV活性。乙型肝炎病毒(HBV)是目前严重危害人类健康的病毒之一。当前对于HBV主要是采用乙肝疫苗预防，但是这些疫苗对于后期乙型肝炎患者则没有作用。当前临床一线用药均为核苷及其类似物，如拉米夫定(3-TC)、阿德福韦酯、替诺夫韦、替比夫定等，这些核苷类似物均存在毒副作用大、长期服用导致病毒产生耐药性和变异，且停药后病毒反弹大的缺点。为了寻找天然抗病毒活性成分，我们对前期筛选具有显著抗HBV活性的分药花属植物滨藜叶分药花进行了较系统的活性成分研究工作。本专利技术从分药花属植物滨藜叶分药花中分离得到一个结构新型木脂素苷类化合物，该化合物具有显著的抑制表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的活性，并能使HBVDNA显著下降。
技术实现思路
本专利技术的第一目的是提供一种新型木脂素苷类化合物；第二目的在于提供所述新型木脂素苷类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述新型木脂素苷类化合物在制备抗乙肝病毒药物中的应用。本专利技术的第一目的是这样实现的，所述的新型木脂素苷类化合物是以干燥的分药花属植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的。所述的新型木脂素苷类化合物的分子式为C27H34O13，该化合物命名为分药花木脂素苷A(1)。本专利技术的第二目的是这样实现的，所述的新型木脂素苷类化合物的制备方法，是以干燥的分药花属植物为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：A、粉碎提取：将干燥的分药花属植物全株粗粉碎到20～40目，用有机溶剂超声提取2～4次，每次30～60min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至1/4～1/2体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏a；B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比1～2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3～5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b；C、硅胶柱层析：将浸膏b用重量比1.5～3倍量的甲醇溶解，然后用浸膏重0.8～1.2倍的80～100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160～200目，用量为浸膏b重量6～8倍量；用体积比为1:0～0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；D、反相柱层析：将以8:2～1:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料C-18装柱；用体积含量为20～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；E、高效液相色谱分离：将以体积含量70～80％的甲醇/水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)；F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以25～35％的乙腈为流动相，流速2～3ml/min，10.0×250mm，5μm的ZorbaxPrepHTGF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样45～60μL，收集28～30min的色谱峰，多次累加后蒸干。即得所述的新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)。本专利技术的第三目的是这样实现的，所述的新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)在制备抗乙肝病毒药物中的应用。本专利技术新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)是首次被分离出来的，通过核磁共振和质谱测定方法确定其结构。以分药花木脂素苷A(1)为原料，3-TC为阳性对照，经HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg抑制活性筛选实验，结果显示分药花木脂素苷A(1)抑制HBsAg及HBeAg的选择指数分(SelectivityIndex,SI)别为12.78及6.05。而抑制HBVDNA增值的IC50值为10.3μM。本专利技术化合物为一新的木脂素苷，活性好，可作为抗乙型肝炎病毒药物的先导性化合物，有良好的应用前景。附图说明图1为化合物分药花木脂素苷A(1)的核磁共振氢谱(1HNMR)；图2为化合物分药花木脂素苷A(1)的核磁共振碳谱(13CNMR)；图3为化合物分药花木脂素苷A(1)的化学结构式。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或改进，均落入本专利技术的保护范围。本专利技术所述的新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)是以干燥的分药花属植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，其结构式请参见图3。所述的新型木脂素苷类化合物的分子式为C27H34O13，该化合物命名为分药花木脂素苷A(1)。本专利技术所述的新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)的制备方法，是以干燥的分药花属植物全株为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：A、粉碎提取：将干燥的分药花属植物全株粗粉碎到20～40目，用有机溶剂超声提取2～4次，每次30～60min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至1/4～1/2体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏a；B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比1～2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3～5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b；C、硅胶柱层析：将浸膏b用重量比1.5～3倍量的甲醇溶解，然后用浸膏重0.8～1.2倍的80～100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160～200目，用量为浸膏b重量6～8倍量；用体积比为1:0～0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；D、反相柱层析：将以8:2～1:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料C-18装柱；用体积含量为20～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；E、高效液相色谱分离：将以体积含量70～80％的甲醇/水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)；F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以25～35％的乙腈为流动相，流速2～3ml/min，10.0×250mm，5μm的ZorbaxPrepHTGF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样45～60μL，收集28～30min的色谱峰，多次累加后蒸干。即得所述的新型木脂素苷类化合物分药花木脂素苷A(1)。A步骤所述的有机溶剂为80～100％的乙醇或甲醇。B步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯或正丁醇。C步骤所述的混合有机溶剂为氯仿-甲醇、氯仿-丙酮。D步骤所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、1:1、1:2、0:1。本专利技术所述的新型木脂素苷类化合物分药花木本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型木脂素苷类化合物，其特征是：所述的新型木脂素苷类化合物是以干燥的分药花属植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤得到的，其结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种木脂素苷类化合物的制备方法，其特征在于是以干燥的分药花属植物全株为原料，经粉碎提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、反相柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：A、粉碎提取：将干燥的分药花属植物全株粗粉碎到20～40目，用80～100％的乙醇或甲醇超声提取2～4次，每次30～60min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至1/4～1/2体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏a；B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比1～2倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3～5次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏b；C、硅胶柱层析：将浸膏b用重量比1.5～3倍量的甲醇溶解，然后用浸膏重0.8～1.2倍的80～100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为160～200目，用量为浸膏b重量6～8倍量；用体积比为1:0～0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；D、反相柱层析：将以8:2～1:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料C-18装柱；用体积含量为20～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收...

【专利技术属性】
技术研发人员：江志勇，周俊，朱乐钰，高雪梅，胡秋芬，高路，黄相中，李干鹏，
申请(专利权)人：云南民族大学，
类型：发明
国别省市：云南;53