提供了用于提高红细胞水平或治疗贫血的组合物，其包括促红细胞生成素受体激活剂和变体激活素RIIB(ActRIIB)多肽，所述多肽具有被酸性氨基酸残基替换的亮氨酸残基，其中所述变体ActRIIB多肽对激活素B具有降低的亲和力并且可称为GDF捕获物。提供了应用这些组合物的方法。
【技术实现步骤摘要】
GDF捕获物和促红细胞生成素受体激活剂联合应用以增加红细胞水平本申请是申请日为2010年8月13日，申请号为201080045618.X的、专利技术名称和本专利技术相同的专利技术专利申请的分案申请。专利技术背景成熟的红细胞或红血球负责脊椎动物循环系统中的氧运输。红细胞包含高浓度的血红蛋白，血红蛋白是一种蛋白，其在相对高的氧分压(pO2)下在肺中与氧结合，并将氧送递至具有相对低pO2的身体区域。成熟的红细胞在称为红细胞生成的过程中由多能造血干细胞产生。出生后红细胞生成主要在骨髓和脾的红髓中进行。各种信号转导途径的协同作用控制细胞增殖、分化、存活和死亡的平衡。在正常条件下，红细胞以维持体内恒定的红细胞量的速率生成，且响应于各种刺激(包括上升或下降的氧张力或组织需求)可增加或减少其生成。红细胞生成的过程开始于谱系定向的前体细胞的形成，并通过一系列的不同前体细胞类型进行。红细胞生成的最终阶段出现为网织红细胞，其释放进入血流，并失去它们的线粒体和核糖体，同时呈现成熟红细胞的形态。在血液中网织红细胞的上升水平或者网织红细胞：红细胞的上升比例提示红细胞产生速率上升。促红细胞生成素(EPO)被广泛认为是脊椎动物中出生后红细胞生成的最重要的正调节剂。EPO调节对减少的组织氧张力(低氧)和低红细胞水平或低血红蛋白水平的代偿性红细胞生成反应。在人体内，上升的EPO水平通过刺激骨髓和脾中红细胞祖先的生成而促进红细胞形成。在小鼠中，EPO主要增加脾中的红细胞生成。EPO的效果由属于细胞因子受体超家族的细胞表面受体介导。人EPO受体基因编码483个氨基酸的跨膜蛋白质，而活性EPO受体被认为作为多聚复合物存在，即使在不存在配体下(参见美国专利号6,319,499)。哺乳动物细胞中表达的克隆的全长EPO受体以与天然受体在红细胞祖细胞上的亲和力类似的亲和力与EPO结合。EPO与其受体的结合引起构象变化，导致受体激活和生物学效果，包括不成熟成红细胞的增加的增殖、不成熟成红细胞的增加的分化和红细胞祖细胞中降低的凋亡(Liboi等人,1993,ProcNatlAcadSciUSA90:11351-11355;Koury等人,1990,Science248:378-381)。医生们在各种临床情况下采用各种形式的重组EPO来增加红细胞水平，特别用于贫血的治疗。贫血是一种宽泛限定的状况，其特征在于血液中的血红蛋白或红细胞低于正常水平。在一些情况下中，贫血是由红细胞的生成或存活中的原发性病症所引起的。更通常地，贫血继发于其它系统的疾病(Weatherall&Provan(2000)Lancet355，1169-1175)。贫血可由红细胞生成速率下降或破坏速率上升导致，或者由因出血引起的红细胞丢失导致。贫血可由多种病症引起，所述病症包括，例如，慢性肾功能衰竭、化学疗法治疗、骨髓异常增生综合征、类风湿关节炎以及骨髓移植。以EPO治疗通常导致健康人在一周中血红蛋白上升约1-3g/dL。当施用至贫血个体时，该治疗方案通常提供血红蛋白和红细胞水平的实质上升，并使得生活质量改善和存活延长。EPO并非一律有效，许多个体甚至在高剂量下是难治的(Horl等人(2000)NephrolDialTransplant15，43-50)。50%以上的癌症患者对EPO的反应不足，大约10%的末期肾疾病患者具有低反应性(Glaspy等人(1997)JClinOncol15，1218-1234；Demetri等人(1998)JClinOncol16，3412-3425)，以及不到10%的骨髓异常增生综合征患者有利地反应(Estey(2003)CurrOpinHematol10，60-67)。一些因素，包括炎症、铁和维生素缺乏、透析不充分、铝毒性以及甲状旁腺功能亢进可预测较差的治疗反应。对EPO抵抗的分子机制仍然不清楚。近来的证据提出，较高剂量的EPO可与心血管发病率的增加风险、肿瘤生长和某些患者群中的死亡率有关(Krapf等人,2009,ClinJAmSocNephrol4:470-480;Glaspy,2009,AnnuRevMed60:181-192)。因此已建议，基于EPO的治疗化合物(促红细胞生成素-刺激剂，ESAs)以足以避免对红细胞输注的需求的最低剂量施用(Jelkmann等人,2008,CritRevOncol.Hematol67:39-61)。因此，本公开内容的一个目的是提供提高患者红细胞水平的替代性方法，其将允许应用降低剂量的促红细胞生成素受体激活剂。专利技术概述本公开内容部分地说明，GDF捕获物(GDFTraps)可与EPO受体激活剂联合施用(例如，在相同时间或不同时间施用，但通常以实现重叠药物效果的方式)以在需要的患者中增加红细胞水平(红细胞生成)或治疗贫血。本公开内容部分地说明，GDF捕获物可与EPO受体激活剂联合施用，以协同增加患者中的红细胞形成。因此，该联合治疗的效果可以显著高于GDF捕获物和EPO受体激活剂以其各自量单独施用时的效果总和。在某些实施方案中，该协同作用可为有利的，因为其能够以较低剂量的EPO受体激活剂获得红细胞靶水平，由此避免潜在的副作用或与较高水平的EPO受体激活相关的其它问题。EPO受体激活剂可通过直接接触和激活EPO受体刺激红细胞生成。在某些实施方案中，EPO受体激活剂是基于天然EPO的165个氨基酸序列的一类化合物中的一个，并且通常称为红细胞生成-刺激剂(ESAs)，其例子是依伯汀α、依伯汀β、依伯汀δ和依伯汀ω。在其它实施方案中，ESAs包括合成EPO蛋白质(SEPs)和EPO衍生物，其具有赋予期望的药动学特性(延长的循环半衰期)的非肽修饰，其例子是达贝泊汀α(darbepoetinalfa)和甲氧基-聚乙二醇依伯汀β。在某些实施方案中，EPO受体激活剂可为不结合EPO多肽骨架或通常不归类为ESA的EPO受体激动剂。这种EPO受体激动剂可包括但不限于EPO的肽和非肽模拟物、靶向EPO受体的激动抗体、包含EPO模拟结构域的融合蛋白质、和促红细胞生成素受体延长期限制激动剂(erythropoietinreceptorextended-durationlimitedagonists，EREDLA)。在某些实施方案中，EPO受体激活剂可通过增强内源性EPO产生间接刺激红细胞生成，不接触EPO受体本身。例如，低氧诱导的转录因子(HIFs)是EPO基因表达的内源性刺激剂，所述表达在常氧条件下通过细胞调节机制而抑制(去稳定)。本公开内容通过应用GDF捕获物和具有HIF稳定特性的间接EPO受体激活剂如脯氨酰羟化酶抑制剂联合治疗部分地提供患者中增加的红细胞生成。相对于其它ActRIIB配体如GDF11和/或筒箭毒碱具有对激活素(例如，激活素A和/或激活素B)显著降低的亲和力的变体ActRIIB多肽被称为GDF捕获物。本文描述的ActRIIB变体是GDF捕获物，除非另外指定。特别地，本公开内容说明为在SEQIDNO:1的位置79具有酸性残基的可溶形式ActRIIB多肽的GDF捕获物在体内施用时增加血中红细胞水平。因此本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于在患者中增加红细胞水平或治疗贫血的方法，所述方法包含对需要其的患者施用：(a) 促红细胞生成素受体激活剂；和(b) 包含与SEQ ID NO: 1的氨基酸29‑109的序列具有至少90%同一性的氨基酸序列的多肽，并且其中所述多肽在相应于SEQ ID NO: 1的位置79的位置包含酸性氨基酸；其中所述促红细胞生成素受体激活剂和所述多肽以有效量施用。
【技术特征摘要】
2009.08.13 US PCT/US2009/004659;2009.08.13 US 12/51.一种分离的多肽，其用于在有需要的受试者中拮抗GDF8和/或GDF11信号转导，其中所述多肽包含SEQIDNO：28的氨基酸序列。
2.权利要求1的分离的多肽，其中所述多肽由SEQIDNO：28的氨基酸序列组成。
3.一种分离的核酸，其编码权利要求1或2的多肽。
4.权利要求3的分离的核酸，其中所述核酸包含SEQIDNO：30的核苷酸76-1083。
5.权利要求4的分离的核酸，其中所述核酸包含SEQIDNO：30的核苷酸序列。
6.权利要求3的分离的核酸，其中所述核酸包含SEQIDNO：27的核苷酸76-1083。
7.权利要求6的分离的核酸，其中所述核酸包含SEQIDNO：27的核苷酸序列。
8.权利要求3-7中的任一项分离的核酸，其中所述核酸可操作地连接到一个或多个调节序列。
9.包含权利要求3-8中任一项的分离的核酸的载体。
10.一种培养的细胞，其包含权利要求9的载体。
11.权利要求10的培养的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
12.权利要求11的培养的细胞，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。
13.一种用于生产权利要求1或2的多肽的方法，包括：
a）适于所...
【专利技术属性】
技术研发人员：J西拉，RS皮尔萨尔，R库马，
申请(专利权)人：阿塞勒隆制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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