一种人结肠癌蛋白质标志物Spondin-2的检测方法及其检测试剂盒技术

本发明专利技术属于基因工程和医学检测领域。具体而言，本发明专利技术提供一种人结肠癌标志物Spondin-2的检测方法，包括：分离提取样本中的基因组DNA或者蛋白；和/或，检测所得的基因组DNA或者蛋白中Spondin-2的含量。本发明专利技术还提供了一种人结肠癌蛋白质标志物Spondin-2的应用方法，用于制备诊断、预测、检测或筛查结肠癌的制剂；还可以用于制备诊断、预测、检测或筛查结肠癌细胞的增殖、转移、结肠癌临床分期、结肠癌病人预后的制剂。本发明专利技术为有效判断结肠癌癌变进程提供科学依据。本发明专利技术的检测试剂盒高效、灵敏、特异性强，相关的检测方法快速、简便，成本较低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和医学检测领域，涉及一种用作人结肠癌标志物的分泌蛋白Spondin-2的检测方法、检测试剂盒及其应用方法。
技术介绍
结肠癌在世界范围内是第三大男性肿瘤和第二大女性肿瘤。根据世界卫生组织GLOBOCAN2012的统计，在2012年预计有74.6万男性和61.4万女性病人，整体致死率是50.1％(男性)和52.1％(女性)，表明预后生存很差。肿瘤发生不但影响个人家庭，也带来严重的社会影响、增加公共卫生支出和财政负担。因此，争取早发现、早确证、早治疗，对于提高结肠癌的治愈率和延长预后生存时间具有非常重要的意义。结肠癌的初发阶段一般症状不明显，容易被忽略，而一旦确证后则往往处于中晚期而使治疗效果不佳，更影响手术后的生存。所以，治疗结肠癌或其他癌症的一个关键在于尽可能早地发现结肠癌。一般结肠癌的诊断，包括观察排便习惯的改变、便血、腹痛等，直肠指症，实验室检查包括血常规、尿常规和大便常规、大便潜血试验，影像检查、B超、CT扫描、结肠镜检查等等。而血清血液检查则是最为通行、常规的检查，常用标志物为癌胚抗原(CEA)、结直肠癌抗原(CCA)、CA19-9，但是这些抗原检测的临床效果差异比较大，且检测的灵敏度和特异性有待提高。从这个意义上说，发现新的同时具有高灵敏度、高特异性的血液标志物是一件非常紧迫的任务。利用这样的新型标志物，就可以在常规体检筛查中尽早地发现早期结肠癌的存在。其次，对于手术后或放化疗后病人的预后效果、生存情况的预测，常规方法有赖于病理参数、TNM分期、Dukes分期等方法，但在病理判断上有时有人为因素干扰，非常需要有差异显著、灵敏度高、特异性好、操作方便的分子标志物来作为辅助判断手段，因此，寻找结肠癌的有效标志物，准确判断肺腺癌的临床分期和预后成为广大医学研究者的迫切任务。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种人结肠癌蛋白质标志物Spondin-2的应用方法。本专利技术的另一个目的是提供人结肠癌蛋白质标志物Spondin-2的检测方法及其检测试剂盒。本专利技术中，SPON2即Spondin-2。根据本专利技术的研究结果，定量PCR、酶联免疫分析和组织免疫杂交进一步证明，Spondin-2在结肠癌组织中的表达量显著高于在正常结肠组织的表达量。并且，Spondin-2的高表达将缩短结肠癌患者手术后的生存期。因此，Spondin-2可以作为一种新的人结肠癌标志物和筛选检测、治疗抗结肠癌药物的靶标为有效判断结肠癌癌变进程提供科学依据。本专利技术在此基础上完成。本专利技术提供了一种人结肠癌标志物Spondin-2的检测方法，包括步骤:分离提取样本中的基因组DNA或者蛋白；和/或，检测所得的基因组DNA或者蛋白中Spondin-2的含量。所述的样本为离体的人源的组织或者体液。利用Spondin-2的特异性引物扩增样本中的基因组DNA，检测Spondin-2的DNA含量。在本专利技术的一个优选实施例中，利用序列如SEQIDNO1和SEQIDNO2所示的特异性引物扩增样本DNA，以便确定样本DNA中Spondin-2的存在和含量。利用Spondin-2的抗体与样本中的蛋白进行反应，检测Spondin-2的蛋白表达量。例如，在本专利技术的一个优选实施例中，采用westernblot技术确定样本中Spondin-2蛋白的存在和含量。相应的，本专利技术还提供了人结肠癌标志物Spondin-2的检测试剂盒，它包括特异性扩增Spondin-2的引物，或者针对Spondin-2蛋白的抗体。例如，所述的特异性扩增Spondin-2的引物的序列如SEQIDNO1和SEQIDNO2所示。较好的，该试剂盒中还包括Spondin-2的标准品、缓冲试剂、说明书等。本专利技术的人结肠癌蛋白质标志物检测试剂盒可以用于制备诊断、预测、检测或筛查人结肠癌癌细胞扩散、结肠癌淋巳结转移、结肠癌临床分期和结肠癌患者预后,等等。另一方面，本专利技术提供了人结肠癌标志物Spondin-2的应用方法，即Spondin-2在制备诊断或预测结肠癌转移、结肠癌临床分期、结肠癌患者预后的制剂中的应用。例如，所述的标志物Spondin-2在制备诊断或预测结肠癌转移、结肠癌临床分期、结肠癌患者预后的试剂盒中的应用。所述的标志物Spondin-2在制备诊断、缓解或治疗结肠癌药剂中的应用。Spondin-2可以作为筛选制备诊断、缓解或治疗结肠癌药剂的靶标。本专利技术提供了一个用于区分人结肠癌组织以及癌旁正常结肠组织、无淋巴结转移结肠癌组织和有淋巴结转移结肠癌组织的质膜蛋白标志物Spondin-2，以及利用该标志物制备判断人结肠癌、结肠癌扩散，结肠癌淋巴结转移、临床分期、结肠癌患者预后和预后的制剂和试剂盒。本专利技术为有效判断人结肠癌癌变进程提供科学依据。本专利技术的检测试剂盒高效、灵敏、特异性强，相关的检测方法快速、简便，成本较低。附图说明图1是利用Oncomine公共数据库中的基因表达芯片数据分析Spondin-2基因在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达。图1-A是利用GaedckeColorectal数据分析Spondin-2在65对直肠和直肠癌组织中的表达的散点图，散点下的数字表示病例或正常样本的个数，p值为用Studentttest(T检验)分析得到的显著性值，星号代表该T检验用的是配对T检验。图1-B是利用GraudensColon数据分析Spondin-2在12例结肠和48例结肠癌组织中的表达的散点图。图1-C是利用HongColorectal数据分析Spondin-2在12例结肠和48例结肠癌组织中的表达的散点图。图1-D是利用SkrzypczakColorectal数据分析Spondin-2在24例结肠和81例结肠癌组织中的表达的散点图。图1-E是利用KiColon数据分析Spondin-2在28例结肠和82例结肠癌组织中的表达的散点图。图1-F是利用SkrzypczakColorectal2数据分析Spondin-2在20例结肠、10例结肠腺瘤和10例结肠癌组织中的表达的散点图。图1-G是利用TCGAColorectal数据分析Spondin-2在22例结直肠组织和101例结肠腺癌、60例结肠癌、22例结肠粘液腺癌和22例盲肠腺癌组织中的表达的散点图。图1-H是利用KaiserColon数据分析Spondin-2在12例结肠和41例结肠腺癌、13例结肠粘液腺癌、17例盲肠腺癌、8例乙状直肠腺癌和4例直肠粘液腺癌组织中表达的散点图。图2是分析Spondin-2的mRNA和蛋白质在结直肠癌细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人结肠癌标志物Spondin‑2的检测方法，其特征在于，所述的方法包括步骤:(a)分离提取样本中的基因组DNA或者蛋白；和/或(b)检测(a)所得的基因组DNA或者蛋白中Spondin‑2的含量。

【技术特征摘要】
1.一种人结肠癌标志物Spondin-2的检测方法，其特征在于，所述的方法包括步骤:
(a)分离提取样本中的基因组DNA或者蛋白；
和/或
(b)检测(a)所得的基因组DNA或者蛋白中Spondin-2的含量。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的样本为离体的人源的组织或
者体液。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，利用Spondin-2的特异性引物扩增
样本中的基因组DNA，检测Spondin-2DNA的含量。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，利用Spondin-2的抗体与样本中的蛋
白反应，检测Spondin-2的蛋白表达量。
5.一种检测试剂盒，其特征在于，它包括特异性扩增Spondin-2的引物，或者针对
Spondin-2蛋白的抗体。...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘锋，杨芃原，张倩，王晓庆，姜英华，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31