一种检测样品中肌醇的方法、试剂盒及其用途技术

本发明专利技术属于分析技术领域，涉及一种检测样品中肌醇的方法，包括用乙酸铵水溶液浸润样品的步骤。还涉及一种检测样品中肌醇的试剂盒。本发明专利技术所述方法和试剂盒可用于检测烟草或烟草制品中的肌醇含量，或者用于烟草或烟草制品的质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析
，涉及一种检测样品中肌醇的方法、试剂盒及其用途。
技术介绍
肌醇（Inositol)，又称1，2, 3, 4, 5, 6-环己六醇，最早从心肌和肝脏中分离得到， 分子式为C6H1206，结构如式I所不。肌醇广泛分布在动植物体内，是参与新陈代谢活动的"生物活素"，具有免疫、预防 和治疗某些疾病的作用。高等动物若缺乏肌醇，将会出现生长停滞和毛发脱落等现象，人体 对肌醇的需求量是l_2g/天，许多保健饮料和儿童食品都添加有微量肌醇。肌醇还是肠内 某些微生物的生长因子，在其它维生素缺乏时，它能刺激微生物合成所缺乏的维生素。在发 酵和食品工业中，肌醇可用于多菌种培养、促进酵母增长。此外，烟草中的肌醇含量较高，在 0. 1%~1%之间，不同地区与品种的烟叶其肌醇含量略有差别。 目前，用于肌醇的检测方法主要有重量法、微生物法、高碘酸钾氧化法、示差折光 法、高效液相色谱法和气相色谱法等，但这些方法均存在前处理步骤繁琐，检测时间较长等 问题。其中，重量法易污染环境；微生物法前处理过程复杂；高碘酸钾氧化法不能排除邻二 醇化合物的干扰、专属性较差；示差折光检测法所用仪器不稳定、干扰因素多；高效液相色 谱法对于成分复杂样品分离效果差；采用气相色谱法，由于肌醇的沸点高，需进行柱前衍生 化，将其制备成低沸点的酯类后才能测定，步骤较为繁琐。目前尚需一种快速检测样品尤其是烟草或烟草制品中肌醇的方法。
技术实现思路
本专利技术人得到了一种快速检测样品中肌醇的方法，尤其适用于对肌醇含量较高的 烟草或烟草制品进行检测，该方法快速准确、灵敏度高、选择性好、重现性好。而且，专利技术人 惊奇地发现以乙酸铵水溶液提取样品中的肌醇，前处理步骤简单、快速。此外，专利技术人还首 次采用液相色谱-质谱联用法对样品中的肌醇进行分析检测。 本专利技术第一方面涉及一种检测样品中肌醇的方法，包括如下步骤：用乙酸铵水溶 液浸润样品，得到提取液。 所述浸润指乙酸铵水溶液与样品发生接触时，液体附着在样品表面或渗透到样品 内部的现象。具体地，浸润时，乙酸铵水溶液液面至少为样品高度的1/3或至少为样品高度 的1/2,优选，乙酸铵水溶液完全浸没样品。 本专利技术第一方面任一项的方法中，所述样品为烟草或烟草制品。 专利技术人发现，提取溶剂的选择对肌醇分析有显著影响，乙酸铵水溶液能将 样品中的肌醇快速提取出来，提取率高且方法简单。而采用其他的磷酸钠缓冲溶液 (NaH 2P04-Na2HP04)、磷酸钾缓冲溶液（K2HP04-KH2P0 4)等无法对样品中的肌醇进行有效的提 取分析。 根据本专利技术第一方面的方法，所述检测为定量检测。 本专利技术第一方面任一项的方法中，所述乙酸铵水溶液的浓度为0. 09-0. 15mol/L， 具体为 〇? 1-0. 15mol/L 或 0? 12-0. 15mol/L，优选为 0? lmol/L。 乙酸铵水溶液的浓度为0. 09-0. 15mol/L，可基本完全提取出样品中的肌醇。 本专利技术第一方面任一项的方法中，向每克样品中添加乙酸铵水溶液的量为 250-1000mL，具体为 250mL、500mL、750mL 或 1000mL，优选为 500mL。 专利技术人发现，乙酸铵水溶液添加量过大时，信号微弱，容易受基线噪音的影响；添 加量过小时，对于肌醇含量高的样品，容易出现信号值过饱和、测定不准确的问题。将乙酸 铵水溶液添加量控制在250-1000mL/g，尤其是500mL/g，可以保有正常信号值，使测量准 确，同时合适的乙酸铵水溶液添加量能够使肌醇被均匀提取出来。 本专利技术第一方面任一项的方法中，所述浸润在超声下进行；具体地，超声功率为最 大功率的40%;更具体地，浸润时间彡1〇111；1；1；[11或 多50min，优选为30min。 本专利技术第一方面任一项的方法中，浸润温度为30-60°C，具体为30°C、40°C、50°C 或 60。。。 本专利技术第一方面任一项的方法中，还包括将提取液进行过滤的步骤；具体地，以水 相滤膜过滤提取液；更具体地，所述水相滤膜的孔径为0. 22 y m。 本专利技术第一方面任一项的方法中，还包括采用液相色谱-质谱分析提取液的步 骤。 根据本专利技术任一的方法，液相色谱条件为如下（1)-(6)中的任意一项或者多项： (1)色谱柱为菲罗门（V液相色谱柱； (2)进样量为 5 y L; (3)流动相为0? 1%醋酸水溶液； (4)流速为 0? 8mL/min; (5)柱温为 40°C ;(6)采用等度洗脱程序，洗脱时间3min。 专利技术人发现采用菲罗门C18液相色谱柱分析提取液，得到的色谱峰型较好、响应值 较高；色谱峰响应值随着进样量增加而增加，但专利技术人发现进样量过高时，肌醇色谱峰出现 裂缝，影响了检测的准确性；以〇. 1 %醋酸水溶液作流动相，色谱峰值较好、响应值较高。 根据本专利技术任一的方法，质谱条件为如下（1)_(7)中的任意一项或者多项： (1)扫描方式为负离子扫描； (2)定量离子对179/87,定性离子对179/59;(3)碰撞能为-25V; (4)离子源为电喷雾电离源； (5)检测方式为多反应检测； (6)电喷雾电压为-4500V; (7)离子源温度为550°C。 以负离子方式扫描，碰撞能为-25V，选择定量离子对179/87,定性离子对179/59 进行检测，准确度高、灵敏度高、回收率高、重复性好。选择其他碰撞能和定量离子对检测时 准确度较低。 本专利技术第二方面涉及一种检测样品中肌醇的试剂盒，包括乙酸铵水溶液和水相滤 膜。 本专利技术第二方面任一项的实施方式中，包括如下（1)_(5)中的任意一项或者多 项： (1)所述乙酸铵水溶液的浓度为0? 09-0. 15mol/L，优选为0? lmol/L; (2)乙酸铵水溶液的量至少为250mL，具体为250-1000mL，优选为500mL; (3)所述水相滤膜的孔径为0? 22 y m; (4)所述试剂盒为定量分析试剂盒； (5)所述样品为烟草或烟草制品。 本专利技术第三方面涉及所述试剂盒在检测样品中肌醇，或者在控制样品质量中的用 途；具体地，所述样品为烟草或烟草制品。 专利技术的有益效果 (1)本专利技术以乙酸铵水溶液浸润样品，即能从样品特别是烟草或烟草制品中提取 肌醇，方法简单，无需使用有毒性的有机溶剂。 (2)本专利技术首次采用液相色谱-质谱联用法检测样品中的肌醇，快速准确、灵敏度 高、操作简单。 (3)使用本专利技术方法分析样品中肌醇的回收率高、重复性好。在烟草或烟草制品 的样品分析中几乎不存在杂峰，目标物线性相关性较好，将标准溶液稀释一定倍数，以信噪 比S/N = 3计算出肌醇的检出限为0. 07mg/g，以信噪比S/N = 10计算出肌醇的定量限为 0. 22mg/g，平均回收率为93. 4 %~94. 9 %，相对标准偏差RSD〈5 % (n = 6)。【附图说明】 图1 :本专利技术实施例1中分析方法的流程图。 图2 :本专利技术实施例1中标准溶液的色谱图。 图3 :本专利技术实施例1中提取液的色谱图。 图4:本专利技术实施例1中肌醇的质谱图。 图5:本专利技术实施例1中肌醇的标准曲线图。 图6 :本专利技术实施例2中不同提取溶剂与色谱峰面积的关系图。 图7:本专利技术实施例3中添加量为25mL乙酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测样品中肌醇的方法，包括如下步骤：用乙酸铵水溶液浸润样品，得到提取液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓其馨，刘泽春，黄朝章，谢卫，张廷贵，黄延俊，张鼎方，
申请(专利权)人：福建中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：福建;35