一种栉山香内酯提取物的制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种栉山香内酯提取物的制备方法与应用，制备方法包括以下步骤：（1）将栉山香地上部分粉碎，加入乙醇水溶液，进行负压空化混悬固液萃取，得到萃取液，萃取液回收试剂得浸膏；（2）浸膏加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集栉山香内酯提取物流分，浓缩得栉山香内酯提取物粗品；（3）将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化得栉山香内酯提取物。本发明专利技术方法具有所得产品含量高，操作简单，提率高等优点。本发明专利技术方法所制化合物为开发应用新一代天然来源的抗肿瘤药物开拓了新径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体是涉及一种应用高速 逆流色谱技术从栉山香地上部分中分离纯化栉山香内酯提取物的方法，还涉及栉山香内酯 提取物在抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
栉山香内酯为δ -内酯类化合物，主要从唇形科植物栉山香办 pecii/wia (L.) Poit.地上部分分离得到，包括f节山香内醋A、f节山香内醋B和f节山香内醋C， 这三种单体成分均具有一定的抗菌作用，对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的MIC ( μ g/ml)分 别为12. 5和6. 25、100和25、100和12. 5,另外这三种化合物还具有细胞毒活性，对多种肿 瘤细胞的ED5tl均< 4 μ g/ml。 现有提取栉山香内酯提取物的报道并不多见，市场上也尚未有栉山香内酯提取物 对照品的出售，因此提供则很有必要，可以为其 后续研宄提供支持。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，本专利技术方法制得 的栉山香内酯提取物质量好，纯度高。 为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案： 一种栉山香内酯提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 提取：将栉山香地上部分粉碎，加入7-12倍药材重量的70-90%乙醇水溶液，空化 混悬20-40min，进行负压空化混悬固液萃取1-2次，得到萃取液； (2) 大孔树脂富集：萃取液回收乙醇得浸膏，加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶 液洗脱，收集栉山香内酯提取物流分，浓缩得栉山香内酯提取物粗品； (3) 纯化：将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿-甲醇-水为两相溶剂系 统，ELSD检测器监测，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。 步骤（1)所述乙醇水溶液浓度为75%，用量为10倍药材重量。 步骤（1)所述混悬时间为30min，萃取2次。 步骤（2)所述萃取液浓缩至密度1. 1-1. 2g/ml。 步骤（2)所述大孔树脂为DlOl型，醇水溶液为85%的乙醇溶液。 步骤（3 )所述氯仿-甲醇-水体积比为（5-9 ) : (15-17 ) : (6-8 )。 本专利技术制备方法制得的化合物在抗肿瘤药物中的应用。 本专利技术制备方法制得的化合物进行抗肿瘤活性实验表明：该化合物具有较强的抗 肿瘤活性，在天然新药开发中具有良好的应用前景。 本专利技术制备方法制得的栉山香内酯提取物采用MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反 应比色法）进行抗肿瘤活性测试。 试验用细胞株： HeLa :人子宫颈癌细胞株；HEC-I :人子宫内膜癌细胞株；T-98和U251-SP :人脑神经胶 质瘤细胞株；HLE :人肝癌细胞株；MMl-CB和HMV-I :人黑色素瘤细胞株。 方法：（1) 0. 25%胰酶消化对数生长期细胞，10%NBS的RPMI 1640调细胞浓度 50000个/ml。96孔板IOOul/孔。设溶剂对照，每组3平行孔。37°C，5%C0 2、95%空气的 培养箱中预培养24h，弃上清。 (2)加药物5个10倍稀释的浓度(溶剂为有二甲亚砜和水），为KT4 mol/L。 (3)细胞连续培养48h，每孔加入10 μ I 5mg/ml的MTT溶液（以无血清培养基配 制)，继续培养4h。 (4)吸去上清。加入200 μ1 DMS0,轻轻振荡以使甲臜完全溶解。570nm处用酶标 仪测定OD值。 (5)计算抑制率（%)=(对照OD-药物0D) /对照0D*100% 实验结果：本专利技术化合物的抑制率以相对于对照(添加 DMS0)的结果如下表1表示。 表1栉山香内酯提取物的肿瘤细胞增值抑制率％以上试验表明，栉山香内酯提取物具有良好的抑制肿瘤细胞生长的活性，其可在制备 抗肿瘤药物中得到应用。 本专利技术为制备抗肿瘤药物提供了一种新的选择。 本专利技术所述栉山香内酯提取物在制备抗肿瘤药物时，可按照常规的制剂方法以栉 山香内酯提取物为药物活性成分，添加适宜的药物载体，制成各种药物剂型，如片剂、胶囊、 滴丸、注射剂、缓控释剂等等。 在用于治疗肿瘤疾病时，口服制剂的用量一般可控制在每日服用栉山香内酯提取 物200_500mg。其他剂型的用量可参考该用量。本专利技术的药物用法用量，也不完全限于此， 临床医师也可以根据病人的具体情况决定药物的用法用量。 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。【具体实施方式】： 实施例1 : 取栉山香地上部分lkg，粉碎成粗粉，与10kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min， 进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度I. 2g/ml，得浸膏，向浸膏中加 DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用6倍柱体积的85%的乙醇溶液洗 脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。 取氯仿-甲醇-水按（5:15:6)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作 为固定相，下层作为流动相，将粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相 泵入色谱柱中，再以4ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为850r/ min，ELSD检测器监测，收集流出液，浓缩，干燥得栉山香内酯提取物，检测含量96. 4%。 实施例2 : 取栉山香地上部分2kg，粉碎成粗粉，与20kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min， 进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度I. 2g/ml，得浸膏，向浸膏中加 DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用5倍柱体积的85%的乙醇溶液洗 脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。 取氯仿-甲醇-水按（9:17:8)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层 作为固定相，下层作为流动相，将粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固 定相泵入色谱柱中，再以3. 5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速 为900r/min，ELSD检测器监测，收集流出液，浓缩，干燥得栉山香内酯提取物，检测含量 97. 2%〇 实施例3 : 取栉山香地上部分2kg，粉碎成粗粉，与20kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min， 进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度I. lg/ml，得浸膏，向浸膏中加 DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用6倍柱体积的85%的乙醇溶液洗 脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。 取氯仿-甲醇-水按（7:16:7)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作 为固定相，下层作为流动相，将粗品用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相 泵入色谱柱中，再以4ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为1000 r/ min，ELSD检测器监测，收集流出液，浓缩，干燥得栉山香内酯提取物，检测含量97. 0%。 实施例4: 取栉山香地上部分2kg，粉碎成粗粉，与20kg75%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min， 进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩至密度I. 2g/ml，得浸膏，向浸膏中加 DlOl型大孔树脂拌匀、干燥后装柱，先用水洗至色浅，再用5倍柱体积的85%的乙醇溶液洗 脱，薄层检测，收集目标流分，浓缩得粗品。 取氯仿-甲醇-水按（8:15:7)体积比置于分液漏斗中，混匀后，静本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种栉山香内酯提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取：将栉山香地上部分粉碎，加入7‑12倍药材重量的70‑90%乙醇水溶液，空化混悬20‑40min，进行负压空化混悬固液萃取1‑2次，得到萃取液；（2）大孔树脂富集：萃取液回收乙醇得浸膏，加入大孔树脂，拌匀、干燥后装柱，醇水溶液洗脱，收集栉山香内酯提取物流分，浓缩得栉山香内酯提取物粗品；（3）纯化：将上述粗品采用高速逆流色谱法分离纯化，以氯仿‑甲醇‑水为两相溶剂系统，ELSD检测器监测，收集目标流分，回收试剂，真空干燥得产品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘东锋，杨成东，
申请(专利权)人：南京泽朗医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32