本发明专利技术涉及医药合成领域，公开了一种合成替度鲁肽的方法。本发明专利技术所述方法按照替度鲁肽主链N端至C端的氨基酸顺序，先合成第1至第2氨基酸、第3至第4氨基酸以及第5至第33氨基酸的3个多肽片段，然后按C端至N端顺序偶联3个多肽片段合成替度鲁肽。本发明专利技术所述方法调整替度鲁肽的合成工艺，以较简便的工艺步骤实现了同时在粗肽纯度、控制杂质含量和总收率方面具有较高水平，相比现有技术更加具有实用价值和应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药合成领域，具体涉及。
技术介绍
短肠综合征（SBS)是指由于严重小肠疾病或外科手术切除大部分小肠导致机体 无法正常吸收营养而引发一系列综合征。SBS降低了患者摄取液体和营养物质的能力，导致 他们脱水和营养不良。而肠外营养支持治疗又将增加全身感染和其他长期并发症的风险， 迄今为止尚无药物可以治疗短肠综合征。 替度鲁肽（teduglutide)是一种胰高血糖素样肽2 (GLP-2)类似物，一种天然生成 的激素，可减少胃排空和分泌，并调节小肠内膜细胞的生长、增殖和修复。临床试验表明，该 药能够降低短肠综合征患者对胃肠外营养的需求，其氨基酸肽序如下： H-His1-Gly2-Asp3-Gly4-Ser5-Phe6-Ser7-Asp8-Glu9-Met10-Asn11-Thr12-Ile13-Leu14-Asp15-Asn16-Leu17-Ala18-Ala19-Arg20-Asp21-Phe22-Ile23-Asn24-Trp25-Leu26-Ile27-Gln28-Thr29 -Lys30-Ile31-Thr32-Asp33-〇H 在替度鲁肽的氨基酸序列中N端存在特殊序列，如His在缩合过程中产生会产生 -替度鲁肽杂质，而Asp-Gly结构在缩合过程也会产生的杂质-替度鲁肽， 为此需要较为合适的合成策略来最大程度上的降低这些杂质的产生。 在替度鲁肽现有合成方法中，专利CN104072603A公开了一种替度鲁肽的合成方 法，其先合成替度鲁肽2-33位氨基酸片段，而后采用特殊保护基保护的His偶联获得，在该 专利记载的数据中，其获得的替度鲁肽纯品中-替度鲁肽杂质含量在0.2%左右， 而对于-替度鲁肽杂质含量并未有针对性的进行控制以及检测； 专利CN104418949A也公开了一种替度鲁肽的制备方法，其合成方式是先合成1-3 位和4-33位氨基酸片段，而后再偶联而成，在该专利记载的数据中，其合成的替度鲁肽粗 品纯度最高为63. 8%，最低为59. 78%，同时替度鲁肽纯品中 -替度鲁肽杂质含量 < 0. 2%，但是对于-替度鲁肽杂质含量并未有针对性的进行控制以及检测，而且 其粗肽纯度也不够理想； 专利CN104072605A公开了另一种替度鲁肽的制备方法，其同时包含了三种合成 方式，一是先合成1_9位、10-18位、19-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得；二是先合 成1 -4位、5_12位、13-20位、21-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得；二是先合成1_4 位、5-9位、10-18位、19-26位、27-33位氨基酸片段，而后偶联各片段获得。在该专利记载 的数据中，其获得替度鲁肽粗肽纯度最高为63. 4%，最低为60. 8 %，同时替度鲁肽纯品中 -替度鲁肽杂质含量为0. 15%，但是对于-替度鲁肽杂质含量同样未有针对 性的进行控制以及检测，而且其粗肽纯度也不够理想。 无论上述三种现有技术的哪一种技术方案，其都没有同时控制替度鲁肽粗肽纯度 以及-替度鲁肽杂质含量和-替度鲁肽杂质含量，并达到较好地水平，同时 对于三者的替度鲁肽总收率也未记载，仅是在专利CN104072605A
技术介绍
中公开了现有 替度鲁肽合成的收率为20%左右。在多肽药物合成领域，同时实现多个质量标准是研宄难 题，也是研宄人员不断追求的目标，这和合成方案中的各方面因素都存在很大关系，尤其是 合成策略。不同的合成策略对最终产品的纯度、杂质含量和收率有很大影响，如何在保证纯 度和收率的前提下，尽可能的降低合成工艺的复杂程度、杂质以及缩短合成周期，是当下技 术人员的研宄重点。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供，使得本专利技术所述方 法能够同时保证所获得的替度鲁肽粗肽纯度以及总收率具有较高水平，同时进一步降低替 度鲁肽合成中常见的-替度鲁肽杂质含量和-替度鲁肽杂质含量。 为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案： -种合成替度鲁肽的方法，包括以下步骤： 步骤1、合成在SEQIDNO: 1所示氨基酸序列N端、His侧链上偶联有保护基的多 肽片段1 ; 合成在SEQIDNO: 2所示氨基酸序列N端、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段 2 ； 合成在SEQIDNO: 3所示氨基酸序列C端偶联有树脂载体、在Ser侧链上、Asp侧 链上、Glu侧链上、Asn侧链上、Thr侧链上、Arg侧链上、Trp侧链上、Gin侧链上、Lys侧链 上偶联有保护基的多肽片段3; 步骤2、将多肽片段3的N端和多肽片段2的C端偶联，偶联后脱除多肽片段2的 N端保护基，得到多肽树脂I; 步骤3、将多肽片段1的C端和多肽树脂I的N端偶联，偶联后脱除多肽片段1的 N端保护基，得到替度鲁肽树脂； 步骤4、替度鲁肽树脂酸解脱除C端树脂和所有保护基得到替度鲁肽粗品，粗品纯 化转醋酸盐，获得替度鲁肽成品。 替度鲁肽主链氨基酸有33个，采用片段方法进行合成存在很多种形式，但只有合 适的片段方法才能保证较高的替度鲁肽的总收率以及纯度，同时又能降低杂质的产生。为 此，申请人根据长期的试验研宄以及氨基酸消旋情况，提出了本专利技术所述方法来制备替度 鲁肽，在保证其总收率和纯度的前提下，进一步降低合成方法的杂质的产生。 在本专利技术所述方法中，首先按照替度鲁肽主链肽序分成3个部分，即分成3个片段 的合成，以替度鲁肽主链N端到C端的氨基酸顺序编号，如下式： H-His1-Gly2-Asp3-Gly4-Ser5-Phe6-Ser7-Asp8-Glu9-Met10-Asn11-Thr12-Ile13-Leu14-Asp15-Asn16-Leu17-Ala18-Ala19-Arg20-Asp21-Phe22-Ile23-Asn24-Trp25-Leu26-Ile27-Gln28-Thr29 -Lys30-Ile31-Thr32-Asp33-〇H SEQIDNO: 1所示氨基酸序列即为上式中编号1-2的多肽序列，SEQIDNO: 2所示 氨基酸序列即为上式中编号3-4的多肽序列，SEQIDN0:3所示氨基酸序列即为上式中编 号5-33的多肽序列。 本专利技术在步骤1中合成的多肽片段1是在SEQIDNO: 1所示氨基酸序列基础上，在 其N端、His侧链上分别偶联有保护基；合成的多肽片段2是在SEQIDNO: 2所示氨基酸序 列基础上，在其N端、Asp侧链上分别偶联保护基；合成的多肽片段3是在SEQIDN0:3所示 氨基酸序列基础上，在其C端偶联有树脂载体、在Ser侧链上、Asp侧链上、Glu侧链上、Asn 侧链上、Thr侧链上、Arg侧链上、Trp侧链上、Gin侧链上、Lys侧链上偶联有保护基。三个 片段分别合成后再逐一偶联起来获得替度鲁肽。 本专利技术所述保护基是在氨基酸合成领域常用的保护氨基酸主链以及侧链上氨基、 羧基等干扰合成的基团的保护基团，防止氨基、羧基等在制备目标产物过程中发生反应，生 成杂质，对于本专利技术中需要保护侧链的氨基酸来说，本领域技术人员公知其侧链结构以及 知晓采用常用保护基来保护氨基酸侧链上的氨基、羧基等基团，作为优选，本专利技术按照表1 中的保护基保护对应氨基酸的侧链 表 1【主权项】1. ，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1、合成在SEQID本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种合成替度鲁肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His侧链上偶联有保护基的多肽片段1；合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2；合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列C端偶联有树脂载体、在Ser侧链上、Asp侧链上、Glu侧链上、Asn侧链上、Thr侧链上、Arg侧链上、Trp侧链上、Gln侧链上、Lys侧链上偶联有保护基的多肽片段3；步骤2、将多肽片段3的N端和多肽片段2的C端偶联，偶联后脱除多肽片段2的N端保护基，得到多肽树脂Ⅰ；步骤3、将多肽片段1的C端和多肽树脂Ⅰ的N端偶联，偶联后脱除多肽片段1的N端保护基，得到替度鲁肽树脂；步骤4、替度鲁肽树脂酸解脱除C端树脂和所有保护基得到替度鲁肽粗品，粗品纯化转醋酸盐，获得替度鲁肽成品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：文永均，郭德文，曾德志，童光彬，
申请(专利权)人：成都圣诺生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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