长效多肽及其生产和施用方法技术

本发明专利技术提供包括至少两个与感兴趣的肽连接的绒毛膜促性腺激素的羧基末端肽(CPT)的多肽以及编码所述多肽的多核苷酸。也提供包括本发明专利技术的多肽和多核苷酸的药物组合物及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本专利技术是申请日为2007年2月5日，申请号为200780012026. 6,标题为"长效多 肽及其生产和施用方法"的专利申请的分案申请。
本专利技术提供包括至少两个与感兴趣的肽连接的绒毛膜促性腺激素的羧基末端肽 (CPT)的多肽以及编码所述多肽的多核苷酸。也提供包括本专利技术的多肽和多核苷酸的药物 组合物及其使用方法。
技术介绍
多肽在血液、肝脏或肾脏中都容易被变性或酶降解。因此，多肽一般都具有短的循 环半衰期，通常是数个小时。由于它们的低稳定性，通常需要按持续的频率来转运肽药物， 以便保持活性肽的有效的血浆浓度。此外，因为通常需要通过输注来施用肽药物，因此频繁 的注射肽药物会给对象带来相当多的不适。因此，需要延长药物性多肽的半衰期同时保持 其高药物疗效的技术。这种期待中的肽药物也应当满足增强血清稳定性、高活性以及当被 注射到对象体内时诱导不必要的免疫应答的低可能性的要求。 不利的药物动力学例如短半衰期可以妨碍许多其他有希望的药物候选物的药物 开发。血清半衰期是分子的一种经验特征，必须要通过实验地测定出每种新的潜在药物的 半衰期。例如，对于低分子量多肽药物而言，生理清除机制例如肾脏滤过可以使得保持药物 的治疗水平变为难以实现，主要是因为所需给药方案的价格或频率。相反地，长的血清半衰 期也是不利的，因为这样的药物或其代谢物具有毒性副作用。
技术实现思路
在一个实施方式中，本专利技术提供了包括至少两个与感兴趣的多肽序列相连接的绒 毛膜促性腺激素羧基末端肽（CTP)氨基酸序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接的 第一个绒毛膜促性腺激素 CTP氨基酸（AA)序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接 的第二个CTP氨基酸序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括两个与感兴趣的多肽序列的羧基末端连 接的绒毛膜促性腺激素 CTP序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括与感兴趣的多肽序列的氨基末端连接的 第一个绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第二个 和第三个CTP AA序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括至少三个与感兴趣的多肽序列相连接的 绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码多肽的序列的多核苷酸，所述多肽 包括至少两个与感兴趣的多肽序列相连接的绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码与感兴趣的多肽序列的氨基末端连 接的第一个绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第 二个CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码两个与感兴趣的多肽序列的羧基末 端连接的绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列的序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码与感兴趣的多肽序列的氨基末端连 接的第一个绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第 二个和第三个CTP AA序列的序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码至少三个与感兴趣的多肽序列相连 接的绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列的序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了治疗对象的生长、体重相关性病变或代谢性 病变的方法，所述方法包括给对象施用治疗有效量的CTP-hGH的步骤，据此治疗患有生长 或体重相关性病变的对象。hGH-般是用于治疗生长疾病，特别是生长激素缺乏相关性疾 病。在我们的实施例中，我们证实了垂体切除小鼠（不再分泌生长激素）在注射CTP-hGH 之后重新得到了生长。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了提高感兴趣的多肽序列的生物半衰期的方 法，包括将至少两个绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列连接于感兴趣的多肽序列的步骤。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了给所需治疗的对象施用感兴趣的多肽序列的 方法，包括将至少两个绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列连接于感兴趣的肽系列的步骤。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括至少两个与EPO肽相连接的绒毛膜促性 腺激素 CTP AA序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括与EPO肽的氨基末端连接的第一个绒毛 膜促性腺激素 CTP AA序列以及与EPO肽的羧基末端连接的第二个CTP AA序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括两个与EPO肽的羧基末端相连接的绒毛 膜促性腺激素 CTP AA序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括与EPO肽的氨基末端连接的第一个绒毛 膜促性腺激素 CTP AA序列以及与EPO肽的羧基末端连接的第二个和第三个CTP AA序列的 多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括至少三个与EPO肽相连接的绒毛膜促性 腺激素 CTP AA序列的多肽。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码至少两个与EPO肽相连接的绒毛膜 促性腺激素 CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码与EPO肽的氨基末端连接的第一个 绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列以及与EPO肽的羧基末端连接的第二个CTP AA序列的核苷 酸序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码两个与感兴趣的多肽序列的羧基末 端连接的绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码与感兴趣的多肽序列的氨基末端连 接的第一个绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列以及与感兴趣的多肽序列的羧基末端连接的第 二个和第三个CTP AA序列的核苷酸序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了包括编码至少三个与感兴趣的多肽序列相连 接的绒毛膜促性腺激素 CTP AA序列多肽的核苷酸序列的多核苷酸。 在另一个实施方式中，本专利技术提供了治疗或降低对象的贫血发生率的方法，包括 给对象施用治疗有效量的EPO-CTP的步骤，据此治疗患有贫血的对象。【附图说明】 图1A-1F是显示六个EPO-CTP构建体的图。 图IA是多肽SEQ ID NO: 1的图。 图IB是多肽SEQ ID NO:2的图。 图IC是多肽SEQ ID NO:3的图。 图ID是多肽SEQ ID NO:4的图。 图IE是多肽SEQ ID NO:5的图。 图IF是多肽SEQ ID NO:6的图。 图2是显示经转染的DG44细胞表达EPO-CTP变体的照片。如在"样品制备"中所 述的制备出来自转染细胞的最终测试样品，并在SDS-PAGE上跑胶。用免疫印迹检测蛋白。 图3是显示重组hEPO衍生物和EP0-3 (SEQ ID N0:3)的体内生物学活性的图表。 ICR 小鼠（每组7 只）接受每周单次 IV 注射（15yg/kg)EP0-3、rhEP0-WT(SEQ ID N0:16)、 Recormon (商品化ΕΡ0)或每周3次Recormon (5 μ g/kg)共3周。对照动物IV注射PBS。每周 收集血样3次，检测出红细胞压积水平。每个点都代表红细胞压积的组内平均值（％ ) 土 SE。 图4是显示重组hEPO衍生物和EP0-1(SEQ I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有生物活性的多肽，其中所述多肽由绒毛膜促性腺激素羧基末端肽(CTP)修饰的感兴趣的肽组成，其中第一个CTP与所述感兴趣的肽的氨基末端连接，且第二和第三个CTP与所述感兴趣的肽的羧基末端连接，其中所述CTP包含氨基酸序列SSSSKAPPPS，并且其中所述感兴趣的肽是生长激素(Gh)。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：F·法里斯，U·E·菲马，
申请(专利权)人：奥普科生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL