多肽制造技术

本发明专利技术涉及结合EGFR家族受体的多肽并涉及这些多肽在医药、兽医、诊断剂和成像中的应用。

【技术实现步骤摘要】
多肽本申请是申请日为2006年12月5日，申请号为“200680052351.0”，专利技术名称为“多肽”的申请的分案申请。专利
本专利技术涉及结合表皮生长因子受体(EGFR)的多肽。该多肽在医药学、兽医学、成像、分离技术和诊断学中具有工业应用。背景在表皮生长因子受体家族中(EGFR-家族，也称为ErbB受体家族)，受体异常表达通常与肺、胸、前列腺、结肠、卵巢、头和颈的各种恶性肿瘤相关。研究该受体家族以获得对受体与病人预后和治疗之间联系的更好理解，这是令人感兴趣的。该家族由四个跨膜受体组成，表皮生长因子受体EGFR(ErbB1/HER1)、HER2(ErbB2/neu)、HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4)(GullickWJ.EndocrReICanc2001；8：75-82；WittonCJ.etalJPathol2003；200：290-297)。每个受体包含细胞外配体结合结构域，跨膜结构域和细胞内酪氨酸激酶结构域(除了HER3，其缺少功能性酪氨酸激酶结构域)(CitriA，etal.ExpCellRes2003；284(1)：54-65；HarariDandYardenY.Oncogene2002；19：6102-6114)。存在一个几乎没有ECD-EGFRvIII的EGFR变体，WikstrandCJetalCancerRes.55：3140-3148，1995；HuangHSetalJBiol.Chem.272：2927-2935，1997；KuanCT，etalEndocr.Relat.Cancer8：83-96，2001。当配体与EGFR家族的受体结合，受体被刺激形成二聚体，或者与另一个同样受体结合(同二聚化)或者与家族内的另一个受体结合(异二聚化)(OlayioyeMA，etal.EmboJ.2000；19：3159-67；YardenY，SliwkowskiMX.CellBiol2001；2：127-37)。受体二聚化激活细胞内酪氨酸激酶结构域，导致增殖、迁移、凋亡、分化或其他细胞过程(YardenY，SliwkowskiMX.CellBiol2001；2：127-37；WellsA.IntJBiochemCellBiol1999；31：637-643；VermeerPDetal.Nature2003；422：322-6)。EGFR和HER2是家族4个受体中研究最多的受体并且在许多恶性肿瘤中过表达。(NordbergEetal.EurJNuclMedMolImaging.2005Jul；32(7)：771-7)。这些特定受体的高表达通常与预后不良相关。(HendriksBSetal.JBiolChem2003；278：23343-23351；ArteagaCL.Oncologist2002；7Suppl4：31-9；EarpHSetal.BreastCancerResTreat1995；35：115-32；WesterK，etal.ActaOncol2002；41：282-8.LorenzoGDetal.ClinProstateCancer2003；2(1)：50-7)。几个配体与EGFR受体家族成员相结合。没有任何已知天然配体的唯一受体是HER2。(CitriA，etal.ExpCellRes2003；284(1)：54-65；YardenY，SliwkowskiMX.CellBiol2001；2：127-37；LenferinkAEG，etal.EMBOJ1998；17：3385-3397)。与细胞外结构域结合的抗体trastuzumab(Herceptin)可被用于靶定HER2受体，特别是在乳腺癌的HER2表达肿瘤中。trastuzumab的结合可阻断生长刺激性胞内信号传导，减少化疗和放疗后细胞修复能力和也可能改良凋亡能力。BookmanMAetal.JClinOncol2003；21：283-290；PegramMDetal.CancerTreatRes2000；103：747-75；McKeageK，PerryCM.Drugs2002；62：209-43)。在W02005/003156中揭示的affibody分子也可用于靶定HER2。使用抗体例如cetuximab(Erbitux，ImClone/BristolMyersSquibb)(BaselgaJ.EurJCancer37：Suppl4，S16-22，2001，ABX-EGFRansonM，CurrOpinMolTher5：541-546，2003或mab425/EMD55900(Merck)或抗体片段(BoskovitzAetal：ExpertOpinBiolTher4：1453-1471，2004)，通过阻断配体结合受体胞外部分可以抑制EGFR功能。在一些但不是所有病人中，使用低分子量酪氨酸激酶抑制剂如结合受体的胞内部分的Iressa(Gefitinib，AstraZeneca)(SundbergALetal：EurJNuclMedMoIImaging30：1348-1356，2003；HerbstRSetal：NatRevCancer4：956-965，2004)或Tarceva(Erlotinib，OSI-774)(KrozelyP.ClinJOncolNurs8：163-168，2004)也可阻断受体功能。在两种情况中，目的是阻断生长刺激信号传导，并因此抑制肿瘤细胞增殖(RichJN，BignerDD：NatRevDrugDiscov3：430-446，2004)。但是，仍存在改良的空间。例如，由于在一小部分过表达EGFR的病人中起作用，已证实Iressa令人失望。对于cetuximab，其仍然是可增加治疗效果的最佳化疗联合治疗药征。这些治疗结合基于放疗的方法可杀死肿瘤细胞(CarlssonJ，etal：RadiotherapyandOncology，66(2)，107-117，2003)，一个有趣的实例是近来应用Gefitinib可修饰放射标记的(砹标记的)EGF的吸收和治疗效果(SundbergALetal：EurJNuclMedMolImaging30：1348-1356，2003)。为诊断(成像)和治疗目的输送放射性核素，多肽抗EGFR靶向物质的发展为天然激动性(肿瘤刺激性)生物学EGF配体提供了令人感兴趣的选择，如先前关于HER-2所述(WikmanMetal.ProteinEngineering，Design&Selection(PEDS)，17(5)，455-462，2004；SteffenACetal.CancerBiotherapyandRadiopharmaceuticals，20，239-248，2005；SteffenACetal.EurJNuclearMedicine，Inpress，2005)。这样的多肽也具有生物学作用，甚至没有放射性，对于治疗也是令人感兴趣的。如WO2005/0003156所揭示，Z变体，也称为“分子”是分子量(6-15kDa)中间产物，因此在肿瘤组织中比抗体(150kDa)具有更好的穿透性，同时比通过肾排泄被快速清除的低分子量物质本文档来自技高网...

【技术保护点】
表皮生长因子受体(EGFR)结合多肽，其包含表皮生长因子受体结合基序EBM，该基序由选自如下的氨基酸序列组成：i)EX2X3X4AX6X7EIRX11LPNLNGWQX20TAFIX25SLX28D，其中，彼此相互独立地，X2选自M，V，L和I；X3选自W，D和E；X4选自I，V，G，S，M，L，A，T，N和D；X6选自W，?V和I；X7选自D，E，N和K；X11选自D，N，E，Y和S；X20选自M，L和F；X25选自A，S和G；和X28选自L，V和F；和ii)与i)中定义序列具有至少85％相同性的氨基酸序列；所述EGFR结合多肽与EGFR结合，因此相互作用的KD值至多是10μM。

【技术特征摘要】
2005.12.05 GB 0524788.71.表皮生长因子受体(EGFR)结合多肽，由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQIDNO:196、211、220、250和251。2.根据权利要求1的EGFR结合多肽，其氨基酸序列是SEQIDNO:250。3.根据权利要求1或2的EGFR结合多肽，其通过C末端和/或N末端处的半胱氨酸残基而被延伸。4.根据权利要求3的EGFR结合多肽，包含与所述半胱氨酸残基偶联的螯合剂。5.根据权利要求4的EGFR结合多肽，其中所述螯合剂掺入了用于诊断的选自以下的放射性核素：68Ga、76Br、111In、99Tc和125I。6.根据权利要求1的EGFR结合多肽，其与EGFR结合，因此相互作用的KD值至多是1×10-6M。7.根据权利要求1的EGFR结合多肽，其与EGFR胞外结构域结合。8.根据权利要求7的EGFR结合多肽，其与相应于SEQIDNO:329的EGFR的胞外结构域的一部分结合。9.多聚体形式的EGFR结合多肽，包含至少2个根据权利要求1的EGFR结合多肽作为单体单位，所述单体单位的氨基酸序列是相同或不同的。10.根据权利要求9的EGFR结合多肽，其中所述单体单位共价偶联在一起。11.根据权利要求10的EGFR结合多肽，其中所述单体单位表达为融合蛋白。12.根据权利要求9-11任一项的EGFR结合多肽，其为二聚体形式。13....

【专利技术属性】
技术研发人员：F·尼尔森，T·埃里克松，A·荣森，S·斯托尔，M·弗里德曼，
申请(专利权)人：阿菲博迪公司，
类型：发明
国别省市：