耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）疫苗重组蛋白抗原HI2的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）疫苗重组蛋白抗原HI2的纯化方法。HI2蛋白为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌Hla和IsdB两个抗原分子的活性功能片段重组融合、大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、盐析、GST亲和层析、PP酶切、MMC层析、凝胶过滤层析等技术，获得高纯度的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）重组双亚单位基因工程蛋白HI2。该发明专利技术纯化工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制药领域，特别涉及一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)疫苗重组蛋白抗原HI2的纯化方法。
技术介绍
耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA)是能够感染人体任何一个部位的革兰阳性球菌，局部感染经久不愈，全身感染死亡率高达20%，已成为全球ICU病房、烧伤、战创伤等感染率最高的病原菌之一。万古霉素是治疗MRSA的最后一道防线，但1997以来年耐万古霉素的MRSA相继被分离出来，使MRSA即将面临无抗生素可治的严峻挑战。因此，加强对MRSA感染的防治研究，已迫在眉睫。因此，研发一种有效的疫苗可能是预防和控制MRSA感染及其耐药性发展有效途径。细菌外膜蛋白具有良好的抗原活性，这些外膜蛋白作为抗体和免疫细胞攻击的主要靶标，可以介导对细菌最直接·有效的杀灭作用，是决定免疫反应是否对人体具有保护性的关键因素。IsdB不仅是MRSA —个重要外膜铆钉蛋白，在MRSA定植粘附中期重要作用，同时它也是MRSA从宿主获得铁的一个主要工具。以IsdB为组分的基因工程疫苗正在进行II期临床试验。此外，金黃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）疫苗重组蛋白抗原HI2的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：A）收集自构建表达抗原HI2的大肠杆菌工程菌高密度发酵的菌体；B）采用高压破菌、离心，硫酸铵分步沉淀，GST亲和层析、PP酶切，MMC层析、凝胶过滤层析技术的顺序组合对制备的HI2进行纯化。

【技术特征摘要】
1.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)疫苗重组蛋白抗原HI2的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤A)收集自构建表达抗原HI2的大肠杆菌工程菌高密度发酵的菌体；B)采用高压破菌、离心，硫酸铵分步沉淀，GST亲和层析、PP酶切，MMC层析、凝胶过滤层析技术的顺序组合对制备的HI2进行纯化。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤B如下1)高压破菌将收集的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组双亚单位基因工程蛋白HI2的大肠杆菌菌体以PH7. 0-7. 5的10-20mM PBS缓冲液混匀悬浮，预冷后采用高压匀浆破菌，高速离心，收集上清；2)硫酸铵分步沉淀4°C搅拌条件下，上清中缓慢加入终浓度为30%的硫酸铵，搅拌半小时，10000-15000g高速离心20分钟，收集上清；上清中继续缓慢加入终浓度为40%的硫酸铵，搅拌半小时，10000-15000g高速离心20分钟，收集沉淀；3)沉淀复溶称量沉淀湿重，按重量体积比1:10比例加入pH7. 0-7. 5的10_20mM PBS 缓冲液，搅拌混匀10-15分钟，10000-15000g高速离心20分钟，收集上清；4)GST亲和纯化选择GST亲和层析填料进行初步纯化，使用PBS-Tween80pH7. 0-7. 5 条件下对目标蛋白进行纯化，Prescission Protease酶进行酶切洗脱5)MMC层析纯化步骤4)收集的样品，pH调至3-5，使用pH3_5的NaAC缓冲液平衡层析系统及MMC层析柱，采用ρΗΙΟ. 5-11为Na2CO3缓冲液梯度洗脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭鹰，邹全明，曾浩，董衍东，樊绍文，卢陆，鲁东水，章金勇，敬海明，
申请(专利权)人：重庆原伦生物科技有限公司，中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：