A蛋白晶体和交联晶体及其使用方法技术

本发明专利技术描述了A蛋白晶体和A蛋白交联蛋白晶体(CLPC)。本文还公开了制备方法及使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉参考 该申请要求于2009年9月15号提交的美国临时申请第61/242，537号的权益，其公开内容通过引用以其整体结合于本文中。背景 A蛋白是最初在细菌金黄色葡萄球菌{Staphylococcus aureus)的细胞壁中发现的40-60 kDa表面蛋白。由于其结合免疫球蛋白的能力，所以其可用于生化研究。A蛋白结合来自许多哺乳动物物种的蛋白，最著名的是IgG。其通过与重链相互作用，与免疫球蛋白的Fe区结合。重组的葡萄球菌A蛋白往往在大肠肝菌(JL coif)中生产用于免疫学及其它的生物研究。A蛋白常与其它分子例如荧光染料、酶、生物素、胶体金或放射性碘偶联而不影响抗体结合位点。其还广泛用于与磁珠、胶乳珠粒和琼脂糖珠粒偶联。A蛋白常固定化于固相 支持体上并用作用于从粗制蛋白混合物例如血清或腹水液中纯化总IgG的可靠方法，或与以上标记物中的一种偶联以检测抗体的存在情况。利用与珠粒缀合的A蛋白的免疫沉淀研究也常用于通过针对目的蛋白或蛋白复合体的抗体间接地纯化蛋白或蛋白复合体。此外，其广泛用于来自多种来源的单克隆抗体的纯化。专利技术简述 本专利技术部分涉及A蛋白交联蛋白晶体(CLPC)的制备，例如生产以便开发用于抗体的纯 化的革新A蛋白系统(例如色谱系统)。A蛋白CLPC提供了高度浓缩的A蛋白活性联合高稳定性和耐化学性的优点。浓缩的A蛋白的浓度减小了柱的大小(若使用的话)、缓冲液体积和处理时间。此外，A蛋白晶体的交联可防止或减少例如免疫球蛋白(例如抗体)的纯化(例如，使用色谱)期间A蛋白的浸出(leaching)。总之,这可减少抗体生产时间和成本。本专利技术涉及A蛋白的晶体及其交联形式(“A蛋白-CLPC或CLPC”)或其衍生物及其在纯化免疫球蛋白/抗体或相应的Fab片段或Fe片段(例如来自细胞培养物的多克隆抗体、单克隆抗体；治疗性抗体；来自细菌培养物、血清、血浆的抗体)中的用途，A蛋白的此类晶体用于免疫沉淀和体外装置的用途。本文公开了包含A蛋白的结晶形式的组合物。该实施方案为包含A蛋白的交联晶体(CLPC)形式的组合物。在另一个实施方案中，A蛋白晶体用戊二醛交联。在一些实施方案中，A蛋白晶体用约0. 02%-约4% (重量体积比)的戊二醛交联。在又另外的实施方案中，A蛋白晶体用约1.00% (重量体积比)的戊二醛交联。本文公开的组合物比A蛋白的非结晶形式更有活性，因为其具有更高的结合容量。在该实施方案中，A蛋白的结晶形式的结合容量在pH 7下比可溶的固定化形式的结合容量闻至少约100%。在又一个实施方案中，交联的A蛋白晶体具有A蛋白的非晶体固定化形式的结合容量的至少约150%。在本专利技术的实施方案中，本专利技术的A蛋白晶体在约pH 2-约pH 12是稳定的(保持其结合容量)。在另一个实施方案中，本文公开的A蛋白晶体与固定化的非晶体A蛋白相比具有0. 0%蛋白浸出。本文还公开了晶体A蛋白组合物在预填充柱中作为柱材料或在膜(浸溃的)中或在体外装置中的用途。在本专利技术的又一个实施方案中，本文公开了包含在此公开的晶体A蛋白组合物的试剂盒。此类试剂盒可包含其它试剂、纯化装置以及使用本文所述的晶体A蛋白组合物的说明书。在一个实施方案中，晶体A蛋白可预填充于柱中用作抗体和抗体片段的纯化材料，例如从哺乳动物细胞培养物中纯化单克隆抗体、纯化表达于转基因奶中的单克隆抗体或纯化血清中产生的多克隆抗体。本文还公开了从重组的可溶性A蛋白中产生蛋白晶体的方法。本文还公开了包含A蛋白晶体及其交联形式("CLPC")的组合物，例如药物组合物。 在一个方面，本专利技术提供了交联A蛋白晶体。交联剂可为多功能的，并且在某些实施方案中，该试剂为双功能试剂，例如戊二醛。在某些实施方案中，A蛋白晶体用基本不改变结合容量的浓度的戊二醛交联，例如以至少约0.02%(重量体积比)的浓度。在一些实施方案中，A蛋白晶体的交联水平等于通过用0. 02%(重量体积比)戊二醛进行的处理产生的交联水平。交联水平可通过本领域已知或本文公开的方法例如确定蛋白浸出的水平来确定。本专利技术还提供了 A蛋白晶体，例如与可溶性A蛋白相比具有较高结合容量例如高至少约100%、200%、300%、400%、500%或更多的A蛋白晶体。本专利技术还提供稳定化例如交联的A蛋白晶体，其中所述稳定化晶体在酸性条件下保留的结合容量和/或稳定性为相似的酸性条件(例如在约2-3的酸性pH)下由可溶性A蛋白保留的结合容量和/或稳定性的至少2倍、3倍。在一些实施方案中，在酸性条件下稳定化A蛋白晶体具有比可溶性A蛋白多至少约200%、300%、400%的结合容量和/或稳定性。本专利技术还提供稳定化例如交联的A蛋白晶体，其中在蛋白酶存在下所述稳定化晶体保留的结合容量和/或稳定性为相似条件下由可溶性A蛋白保留的结合容量和/或稳定性的至少2倍、3倍。在一些实施方案中，稳定化A蛋白晶体在蛋白酶存在下具有比可溶性A蛋白多至少约200%、300%、400%的结合容量和/或稳定性。所述蛋白酶可选自例如胃蛋白酶、糜蛋白酶或胰酶中的一种或多种。在其它的实施方案中，稳定化或可溶性A蛋白的结合容量在将稳定化晶体或可溶性A蛋白暴露至酸性条件和/或蛋白酶达预定时间长度(例如至少一、二、三、四或五小时)后检测。在相关方面，本专利技术表征了一种交联的A蛋白晶体，其在可变的pH条件(例如约pH 2.0或3至约pH 7. 5或约pH 8. 5至约pH 10-14)下和/或蛋白酶(例如蛋白酶可选自以下的一种或多种胃蛋白酶、糜蛋白酶或胰酶)存在下基本稳定。在又另外的实施方案中，交联晶体在酸性条件(例如约2-3的酸性pH)下和存在如本文所述的蛋白酶下保留其结合容量为由可溶性A蛋白保留的结合容量的至少约2倍、3倍。在另外的实施方案中，稳定化A蛋白晶体在酸性条件(例如约2-3的酸性pH)下和存在如本文所述的蛋白酶下比可溶性A蛋白更稳定至少200%、300%、400%。本文还公开了包含所述晶体和/或交联的A蛋白晶体的组合物例如药物组合物。在一些实施方案中，所述晶体包含具有与天然来源例如金黄色葡萄球菌或相关菌株中存在的A蛋白序列相同或基本相同的序列的A蛋白。在其它的实施方案中，A蛋白通过重组的方式产生。在另一个方面，本专利技术提供浸溃有交联蛋白晶体的膜、生产及使用所述膜的装置、系统和方法用于各种合适的应用，包括，例如抗体和抗体片段的纯化以及透析治疗期间免疫球蛋白的去除。在这点上，本专利技术的A蛋白浸溃膜可结合抗体和抗体片段。这可有效使纯化所需的缓冲液的量最小化，从而最大限度降低成本。在另一个实施方案中，本专利技术提供了包含浸溃有约3. 25mg/cm2或更少交联蛋白晶体的膜的材料。优选地，膜用交联A蛋白晶体(“A蛋白CLPC”)浸溃。用A蛋白-CLPC浸溃的膜可用于分离和纯化免疫球蛋白并可类似于固定化A蛋白重复使用。 在又一个实施方案中，本专利技术提供了生产浸溃有交联蛋白晶体(优选A蛋白-CLPC)的膜的方法。该方法包括制备制膜液。所述制膜液包含含聚合物基质材料(例如聚氨酯)的溶剂例如I-甲基-2-吡咯烷酮(“NMP”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)等或其组合。所述制膜液还可包含填充剂例如氧化锆和试剂例如聚乙烯吡咯烷酮(“PVP)以使膜更亲水。接着将制膜液与适量的A蛋白-C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：巴米·谢诺伊，里纳·帕特尔，西比尔·巴拉迪，玛格丽特·麦格拉思，纳泽尔·卡拉夫，钱査尔·兰德哈瓦，
申请(专利权)人：阿尔泰亚科技公司，
类型：发明
国别省市：