用于生产重组纤溶酶原和纤溶酶多肽的方法技术

本发明专利技术提供生产正确折叠的重组纤溶酶原和纤溶酶多肽的方法。变性的重组纤溶酶原多肽通过下述进行重折叠：首先在高ｐＨ用离液剂以及还原剂和氧化剂使多肽溶解，随后在减少浓度的离液剂以及还原剂和氧化剂的存在下以及在精氨酸的存在下重折叠。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】 与相关申请的交叉参照本申请要求于2006年9月29日提交的临时专利申请美国序列号60/848， 456的优先权利益，所述专利申请整体引入作为参考。 关于联邦赞助的研究或开发的声明 不适用。专利
本专利技术涉及用于生产重组纤溶酶原多肽的方法。 专利技术背景 纤溶酶(Plm)是具有几种重要的生理学作用的丝氨酸蛋白酶，所述生理学作用包括溶解血块。纤溶酶通常以其酶原形式——纤溶酶原(Pig)在血液中惰性地循环，Plg为具有与新形成的血块结合的能力的791个氨基酸的单链糖蛋白(Mr 87KDa)。它的活化通过经由血块中捕获的组织纤溶酶原激活物(tPA)或尿激酶(uPA)消化精氨酸561和缬氨酸562之间的肽键(R5"^V562 )来实现。在这个肽键处的切割使单链蛋白质转化成通过2个必需二硫桥互联的2个分开的亚基。纤溶酶分子的A链由5个三环二硫化物kringle (Kr)结构域(各自约78-809氨基酸)组成，而B链包含20个氨基酸的"接头"区域和丝氨酸蛋白酶结构域(约228个氨基酸)。新近形成的纤溶酶活跃消化凝块中的纤维蛋白(fibrin)，从而使其溶解。 通过实验室操作，纤溶酶原的具本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于使重组纤溶酶原多肽重折叠的方法，其包括：　　（ａ）使纤溶酶原多肽溶解于溶解缓冲液中，所述溶解缓冲液包含高浓度的离液剂、还原剂、氧化还原剂，并具有约９．０－约１１．０的ｐＨ，从而产生溶解的纤溶酶原多肽溶液；和　　（ｂ）通过将所述溶解的纤溶酶原多肽溶液加入重折叠缓冲液中，用重折叠缓冲液快速稀释所述溶解的纤溶酶原多肽溶液，从而产生稀释的溶解的纤溶酶原多肽溶液，其中所述重折叠缓冲液包含精氨酸并具有约８．０－约１０．０的ｐＨ；和　　（ｃ）温育所述稀释的溶解的纤溶酶原多肽溶液，从而产生重折叠的纤溶酶原多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔺新力，D麦迪恩斯基，
申请(专利权)人：蛋白质组技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]