多肽及其用途和生产方法技术

本发明专利技术提供在患有炎症的肝脏中生产水平专一性降低的多肽，并因此提供一种新的肝炎诊断方法。发现了在病变肝脏中具有专一性生产水平降低的ＳＥＱＩＤＮＯ：１１或ＳＥＱＩＤＮＯ：１２的多肽。基于这一发现，提供了通过测定所述多肽或编码所述多肽的ｍＲＮＡ在肝脏中的生产水平诊断肝炎的新方法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种在患有炎症的人类肝脏(病变肝脏)中生产水平专一性降低的多肽，以及这种多肽的制备方法和用途(即通过测定所述多肽在肝脏中的生产水平诊断肝炎的方法，以及用于通过测定所述多肽在肝脏中的生产水平诊断肝炎的诊断试剂盒)。
技术介绍
根据肝炎的起因、严重程度和时期，肝炎表现出明显不同的临床特征或组织病理学特征。因此，肝炎的诊断/治疗需要根据临床特征、组织病理学观察和肝脏功能测试等作出综合性判断。用于诊断所述肝炎的一种新的诊断方法，能够有效改善对肝炎的基本了解或实现对肝炎的诊断/治疗。因此，本专利技术的目的是提供一种用于诊断肝炎的新的诊断方法。附图的简要说明附图说明图1是表示用于制备和计数表示mRNA的标记的概括性方法的示意图。图2A是表示用于制备和计数表示mRNA的标记的方法的(部分)示意图。图2B是表示用于制备和计数表示mRNA的标记的方法的(部分)示意图。图2C是表示用于制备和计数表示mRNA的标记的方法的(部分)示意图。图2D是表示用于制备和计数表示mRNA的标记的方法的(部分)示意图。图2E是表示用于制备和计数表示mRNA的标记的方法的(部分)示意图。图3是表示编码本专利技术多肽的cDNA的示意图。
技术实现思路
本专利技术的例子是通过发现在病变肝脏中具有生产水平专一性降低的多肽，并且对这一发现作进一步的研究而实现的。因此，本专利技术的一个方面是具有SEQ ID NO11或SEQ ID NO12所示氨基酸序列，并且在人病变肝脏中具有专一性生产水平降低的多肽。本专利技术的另一方面是一种肝炎诊断方法，包括测定所述多肽在肝脏中的生产水平。该诊断方法的一种具体实施方案包括测定肝脏中编码所述多肽的mRNA(或其cDNA)的生产水平，作为所述多肽在肝脏中的生产水平。该诊断方法的另一种具体实施方案包括使用抗所述多肽的一种抗体。本专利技术的另一方面是用于通过测定所述多肽在肝脏中的生产水平诊断肝炎的诊断试剂盒，该试剂盒分别包括一个容纳所述多肽的容器，一个容纳抗所述多肽的抗体的容器，和一个容纳能与编码所述多肽的mRNA(或其cDNA)专一性杂交的核苷酸序列的容器。本专利技术的一个方面是含有编码所述多肽的基因的DNA。本专利技术的另一方面是一种用于制备所述多肽的方法，包括培养用所述DNA转化过的宿主细胞。通过本专利技术的说明可以理解本专利技术的其他方面。在本文中，“肝炎”表示无论什么原因导致的所有肝炎。即包括由病毒或其他传染剂引起的传染性肝炎，由诸如酒精或其他药物的药物引起的肝炎，以及由自身免疫缺陷所引起的自身免疫肝炎。肝炎病毒是已知的能导致肝炎的病毒，另外，EB病毒或巨噬细胞病毒感染也可以产生肝炎。除了病毒之外的其他感染剂的感染也会产生肝炎，所述其他感染剂如伤寒沙门氏菌、表达载体以及痢疾阿米巴、致病性钩端螺旋体属(Weil’s病)。业已分离了多种肝炎病毒，如甲型、乙型和丙型肝炎病毒，和非甲、非乙、非丙肝炎病毒，并且推测有多种其他病毒的存在。可以根据严重程度或发病阶段将肝炎划分成急性肝炎、爆发性肝炎、亚急性肝炎、持久性肝炎、慢性肝炎等。在本文中，“肝炎”意在包括上述任何类型的肝炎。在本文中，“生产水平”表示在一个时间点上，在肝脏组织中积累的本专利技术多肽的数量或编码本专利技术多肽的mRNA(或其cDNA)的数量。因此，在本文中所使用的“生产水平”的定义中，还包括在两个或两个以上不同时间点上，在肝脏组织中积累的本专利技术多肽的平均数量或编码本专利技术多肽的mRNA(或其cDNA)的数量。正如在下面的实施例中所披露的，本专利技术多肽的生产水平在病变肝脏中有专一性地降低。因此，可以通过测定所述多肽在肝脏中的生产水平诊断肝炎的存在。所述多肽在肝脏中的生产水平与肝炎密切地和专一性地相关，这表明与所述多肽活性的加强或减弱相关的疾病，可以通过控制所述多肽在肝脏中的活性而进行治疗(即增加或减少所述多肽的数量或增强或抑制所述多肽的活性)。为了增加所述多肽的数量，可以从外部输送所述多肽或者采用增强编码所述多肽的基因表达的方式。为了减少所述多肽的数量，可以采用抑制编码所述多肽的基因表达的方式。可以通过提供一种能抑制所述多肽活性的化合物来抑制所述多肽的活性。加强/抑制编码所述多肽的基因表达的一种可行的方式是服用一种正义基因或反义基因。还可以服用抗所述多肽的抗体，例如人源化抗体。所述多肽在肝脏中的生产水平和病理学之间的关系，可以通过让编码所述多肽的基因在肝脏中专一性表达而加以澄清(例如，通过使用Pinkert，C.A.，et al.所披露的白蛋白启动子/增强子，Genes Dev.，1，268-276，1987)。本专利技术的多肽具有SEQ ID NO11或SEQ ID NO12所示的氨基酸序列。分析SEQ ID NO11或SEQ ID NO12的氨基酸序列发现，有一个C2H2类型的锌指基序(具有2个半胱氨酸分子和2个组氨酸分子)在C-末端重复出现了5次。所述锌指基序是DNA结合蛋白的DNA结合结构域的立体结构特征，并且，已知具有锌指结构域的蛋白具有RNA聚合酶III的转录因子活性(TFIIIA)。因此，本专利技术的多肽被认为具有转录因子活性。通过设计一种能表达在多肽的N-末端具有血凝素标记(HA-标记)的融合肽的表达载体，并且在荧光显微镜下观察用所述载体转染过的细胞，证实具有SEQ ID NO11所示氨基酸序列的多肽的细胞内定位。结果发现，所述多肽定位于细胞核中，特别是定位于核体样结构上。核体是将DNA非常活跃地转录成RNA的场所，这表明具有锌指基序的SEQ ID NO1所示的多肽，是一种在活跃转录条件下与DNA结合的转录因子，以便调控转录作用。利用购自PE生物系统的TaqMan试剂盒，检查了编码SEQ ID NO11和SEQ ID NO12的基因在多位肝炎患者肝脏内的表达水平，以便证实所述基因在肝炎的重症阶段表达微弱，而在恢复之后表达水平提高。如上文所述，本专利技术多肽在肝脏中的生产水平只有在患有肝炎之后才降低(与其他因素无关，即“专一性地”)。因此，根据本专利技术的肝炎诊断，可以通过测定所述多肽在肝脏中的生产水平并且将测定的水平与所述多肽在没有患肝炎的肝脏中的生产水平加以比较而实现。根据所述多肽在肝脏中的生产水平的测定结果是低于或者是相当于所述多肽在没有患肝炎的肝脏中的生产水平，将肝脏诊断为患有肝炎或者是没有肝炎。为了测定本专利技术多肽在肝脏中的生产水平，将肝脏的活组织检查样品用作样品。用于采集活组织检查样品的方法是众所周知的。在分析之前，对采集的生物活组织样品进行的预处理，取决于随后对所述多肽进行分析的方法，这些方法也是本领域技术人员所公知的。可以利用所述多肽的结构特征测定本专利技术多肽在肝脏中的生产水平，不过优选通过以下两种方法进行测定。第一种方法使用抗体。合适的抗体可以是多克隆抗体，不过，特别优选的是单克隆抗体。在一种诊断方法(或一种诊断试剂盒)中，可以同时使用单克隆抗体和多克隆抗体。本专利技术的抗体包括人源化抗体和保留了专一性结合抗原能力的抗体片段。抗本专利技术多肽的抗体可以通过用于获得抗蛋白抗体的一般方法获得。就是说，可以用本专利技术的多肽对山羊、兔子或小鼠等进行免疫接种，以便提供用于获得单克隆抗体的抗血清或脾B细胞。制备人源化抗体或抗体片段的方法同样是众所周知的。用于获得所述抗体的抗原(即本专利技术的多肽)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２所示氨基酸序列的多肽。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：前川誉实，福田尚夫，横屋史彦，奥津伦久，高原义之，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]