具有三重突变的二聚体蛋白质制造技术

本发明专利技术涉及二聚体蛋白质，其在3个不同位置包含与在人IgG1中存在的氨基酸不同的氨基酸。6个所述二聚体蛋白质能在溶液中形成六聚体结构。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】具有三重突变的二聚体蛋白质 专利
本专利技术涉及二聚体蛋白质例如抗体，其包含相比于亲本二聚体蛋白质的至少3个 突变。更具体地，本专利技术涉及能在溶液中形成寡聚体例如六聚体结构的这类二聚体蛋白质。 本专利技术还涉及这类二聚体蛋白质和包含这类二聚体蛋白质的组合物的用途。 专利技术背景 由抗体的Fc区介导的效应器功能允许破坏外来实体，如杀死病原体和清除及 降解抗原。抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)和抗体依赖性细胞介导的吞噬作用 (ADCP)由Fc区对携带Fc受体（FcR)的细胞的结合启动，而补体依赖性细胞毒性（CDC)由 Fc区对Clq的结合启动，其启动经典补体激活途径。 每个IgG抗体含有两个针对Clq的结合位点，在每个重链恒定（Fe)区中各一 个。然而，溶液中的单一 IgG分子不激活补体，因为单体IgG对Clq的亲和力相当弱 (Kd~10 -4M) (Sledge 等，1973J. Biol. Chem. 248, 2818-13 ;Hughes-Jones 等，1979皿〇1· Immunol. 16, 697-701)。抗原驱动的IgG的联合可导致紧密得多的对多价Clq分子的结合 (Kd~10 -8M)和补体激活（Burton 等，1990M〇1. Immunol. 22, 161-206)。相比之下，IgM 以 共价结合的五聚体或六聚体天然存在，并在结合细胞表达或固定化的抗原时，IgM五聚体 和六聚体能有效引发CDC。抗原结合是诱导IgM中的构象变化以暴露Clq结合位点的要求 (Feinstein 等，1986,Immunology Today, 169-174)〇 已提出IgG也可通过经由Fe区的CH2/CH3域的相互作用形成六聚体环结构来实 现补体激活（Burton 等，1990Trends in Biochem. Sci. 15, 64-69)。已在二维（Reidler 等，19861 Handbook of Experimental Immunology 4th edit. (Weir, D. M. ed. ),ppl7. 1-17. 5. Blackwell, Edinburgh ;Pinteric 等，1971Immunochem. 8, 1041-5)和三维晶体中，以及对 于溶液中的 IgGl, IgG2a 和 IgG4 和人 Fe (Kuznetsov 等，2000J Struct. Biol. 131，108-115) 发现了支持这类六聚体186结构存在的证据。在针对!11￥-18?120的1312人18611〇抗体的 晶体结构（PDB中的1HZH)中也观察到六聚体环形成（Saphire等，Science 2001 AuglO ; 293 (5532)，1155-9)。在bl2六聚体环中，6个可接近的Clq结合位点呈现在六聚体表面处 (来自6个抗体中每个的1个），而其他6个结合位点面朝下。 Clq类似于具有与六个胶原柄栓系的六个球状头部的郁金香束，所述球状 头部包含抗体结合区?〇1· Biol. 189, 573-81]。发现Clq适合到IHZH晶体结构的bl2六聚体装配物上，从而使得6 个球状头部的每个与6个Clq结合位点之一接触（Parren, FASEB Summer Research Co nference, Snowmass, Co. , 5-10July 2010 ;''Crystal Structure of an intact human IgG:implications for HIV-Ineutralization and effector Function"，Erica Ollmann Saphire 的论文，在 Scripps Research Institute, La Jolla, California. November 2000)。观察到晶体结构中的对称相关b 12抗体之间观察到的Fe界面中的选定氨基酸中的 突变降低Clq的结合亲合力，指示这些氨基酸对分子间Fc:Fc相互作用的贡献。 Mekhaiel DNA 等，Nature Scientific R 印 orts, 1:124, 2011 年 10 月 19 日披露了 具有改良的效应器功能的聚合人Fc-融合蛋白。 W00042072披露了具有改变的效应器功能的多肽变体。 US20080089892 披露了 Fc 区变体。 W02006105062披露了改变的抗体Fc区及其用途。 本专利技术涉及包含特定氨基酸残基的二聚体蛋白质，其中6个所述二聚体蛋白质能 在溶液中形成非共价六聚体形式。 专利技术概述 在一个方面，本专利技术涉及包含第一和第二多肽的二聚体蛋白质，每个多肽至少包 含免疫球蛋白重链的C H2和CH3区，其中在所述第一和/或第二多肽中： 在对应于人IgGl重链中E345和E430的位置处的氨基酸不是E ;且 在选自由 S440, Y436, D/E356, T359, E382, N434, Q438, 1253 和 S254 组成的组的 至少一个位置处的氨基酸对于每个位置分别为：是Y，K，R或w ;不是γ ;不是D或E ;不是T ; 不是E ;不是N ;不是Q ;不是I ;和不是S。 在另一方面，本专利技术涉及一种寡聚体，其包含至少两个非共价联合的本专利技术的二 聚体蛋白质。 在另一方面，本专利技术涉及一种六聚体，其包含6个非共价联合的本专利技术的二聚体 蛋白质。 在另一方面，本专利技术涉及一种组合物，其包含本专利技术的二聚体蛋白质、一种或多种 抗体、和药学可接受的载体。 在另一方面，本专利技术涉及一种组合物，其包含依照本专利技术的第一个二聚体蛋白质、 依照本专利技术的第二个二聚体蛋白质、和任选地药学可接受的载体。 在另一方面，本专利技术涉及一种增加包含第一和第二多肽的二聚体蛋白质在溶液中 的寡聚化和/或效应器功能的方法，所述多肽各自至少包含免疫球蛋白重链的CH2和CH3 区，该方法包括在所述第一和/或第二多肽中在至少对应于人IgGl重链中的E345、E430 的位置和选自下组的位置中引入氨基酸取代：S440, Y436, D/E356, T359, E382, N434, Q438， 1253 和 S254。 在另一方面，本专利技术涉及通过本专利技术方法制备的变体二聚体蛋白质。 在另一方面，本专利技术涉及一种组件试剂盒（kit-of-parts)，其包含依照本专利技术的 第一个二聚体蛋白质和依照本专利技术的第二个二聚体蛋白质，用于成像、诊断学或治疗中的 同时、分开或序贯使用。 在另一方面，本专利技术涉及一种用于将人或其他哺乳动物身体的至少一部分成像的 方法，包括施用依照本专利技术的二聚体蛋白质、寡聚体、六聚体、组合物或组件试剂盒。 在另一方面，本专利技术涉及一种用于治疗细菌性、病毒性或寄生性感染，用于将人或 其他哺乳动物身体的至少一部分成像，或用于调控从人或其他哺乳动物的身体清除靶分子 的方法，包括施用依照本专利技术的二聚体蛋白质、寡聚体、六聚体、组合物或组件试剂盒。 在另一方面，本专利技术涉及一种用于预防或治疗疾病如癌症、自身免疫性疾病、器官 移植排斥、和体液系统中的Clq消耗（depletion)的方法，包括施用依照本专利技术的二聚体蛋 白质、寡聚体、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种二聚体蛋白质，其包含第一和第二多肽，每个多肽至少包含免疫球蛋白重链的CH2和CH3区，其中在所述第一和/或第二多肽中：在对应于人IgG1重链中E345和E430的位置处的氨基酸不是E；且在选自由S440，Y436，D/E356，T359，E382，N434，Q438，I253和S254组成的组的至少一个位置处的氨基酸对于每个位置分别为：是Y，K，R或W；不是Y；不是D或E；不是T；不是E；不是N；不是Q；不是I；和不是S。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：RN德琼，F伯斯肯斯，P帕伦，AF拉布里杰，J舒尔曼，A弗卢格，S韦普洛根，
申请(专利权)人：根马布私人有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL