多肽变体及其用途制造技术

本文描述了具有Fc区和抗原结合区的多肽和抗体，其中Fc区具有Fc‑Fc增强突变和C1q结合增强突变，所述C1q结合增强突变提供具有增加的CDC活性和/或激动活性的多肽或抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多肽变体及其用途专利
本专利技术涉及包含结合区的含有Fc区的多肽(如抗体)，其与亲本多肽或抗体相比在Fc区中具有至少两个氨基酸取代。专利技术背景单克隆抗体的Fc介导的效应器功能，如补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)有助于由功效和毒性定义的治疗窗。CDC由C1q与抗体Fc区的结合来启动。C1q是一种多聚体蛋白质，其由6个附着到茎的球状结合头组成。已经显示了通过Fc区中的点突变增强细胞表面上靶物结合后的IgG六聚化。六聚化通过分子间非共价Fc-Fc相互作用介导，并且Fc-Fc相互作用可以通过CH3域中的点突变来增强，所述点突变包括E345R和E430G。WO2013/004842公开了包含具有一个或多个氨基酸修饰的变体Fc区的抗体或多肽，所述氨基酸修饰导致经修饰的效应器功能，如补体依赖性细胞毒性(CDC)。WO2014/108198公开了包含具有一个或多个氨基酸修饰的变体Fc区的多肽如抗体，所述氨基酸修饰导致增加的补体依赖性细胞毒性(CDC)。WO2016/164480公开了具有激动活性的抗原结合复合物。可以使用抗体之间增强的Fc-Fc相互作用来放大抗体对其在细胞表面上的靶物的结合的效应。然而，仅增强Fc区之间的Fc-Fc相互作用并不总是足以创建足够强的信号以活化由例如与受体结合引起的信号传导途径。因此，本专利技术的一个目的是提供包含人IgG的Fc区和抗原结合区的多肽或抗体，所述多肽当与亲本多肽比较时具有增加的Fc-Fc相互作用和激动活性，如在结合后增加的靶受体活化，其中亲本多肽是相同同种型的人IgG并且具有相同的抗原结合区，但是在Fc区中没有任何突变，即亲本多肽或亲本抗体。本专利技术的另一个目的是提供与亲本多肽相比当多肽(例如多肽)的抗原结合区域与相应的抗原结合时活化信号传导，任选地诱导增强的信号传导的多肽，其中亲本多肽在Fc区中没有任何突变。本专利技术的另一个目的是提供具有增强的Fc-Fc相互作用性质和增强的效应器功能如CDC的多肽。本专利技术的另一个目的是提供当与Fc区中没有任何突变的亲本多肽相比时具有增强的Fc-Fc相互作用和增强的C1q结合特性的多肽。专利技术概述如本文所述，本专利技术涉及具有Fc区和抗原结合区的多肽或抗体，其中Fc区具有Fc-Fc增强突变和C1q结合突变，所述C1q结合突变提供具有增加的CDC活性和/或激动活性的多肽或抗体。不受理论的限制，认为本专利技术的多肽或抗体在与细胞表面上的靶物结合时能够在两个多肽或抗体分子的Fc区之间发生稳定的结合相互作用，这导致增强的寡聚化，如六聚体形成，从而提供亲合的表面。与Fc区中没有任何突变的亲本多肽或亲本抗体，即相同同种型的亲本多肽或抗体相比，本专利技术的多肽或抗体进一步具有增加的Fc效应器响应。在一个方面，本专利技术提供了包含人免疫球蛋白的Fc区和抗原结合区的多肽或抗体，其中Fc区包含a)在选自E430，E345的位置处的至少一个Fc-Fc增强取代或S440Y或S440W取代，和b)至少一个C1q结合取代，其中位置对应于根据EU编号(Edelmanetal.,ProcNatlAcadSciUSA.1969May；63(1):78-85；Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第五版1991NIHPublicationNo.91-3242)的人IgG1。在本专利技术的一个方面，提供了包含免疫球蛋白的Fc区和抗原结合区的多肽或抗体，其中Fc区包含a)在选自E430，E345的位置处的取代或S440Y或S440W取代，和b)在选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324K326、I332、E333和P396，其中位置对应于根据EU编号的人IgG1。认为在对应于E430，E345的位置处的取代或S440Y或S440W取代是根据本专利技术的Fc-Fc增强取代。认为在选自下组的一个或多个位置处的取代是根据本专利技术的C1q结合取代：G236、S239、S267、H268、S324、K326、I332、E333和P396。也就是说，在本专利技术的第一方面中，本专利技术的专利技术人发现，引入增强Fc-Fc相互作用的第一突变以及增强C1q结合的第二突变提供具有激动活性和/或增强的CDC的多肽或抗体。在一个方面，本专利技术提供了包含人免疫球蛋白的Fc区和抗原结合区的多肽或抗体，其中Fc区包含a)在选自E430，E345的位置处的取代或S440Y或S440W取代，和b)在选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324K326、I332、E333和P396，其中位置对应于根据EU编号的人IgG1。也就是说，专利技术人发现，Fc-Fc增强突变以及选自下组的一个或多个位置处的一个或多个C1q结合取代可以提供激动活性：G236、S239、S267、H268、S324K326、I332、E333和P396。本专利技术人进一步发现Fc-Fc增强突变以及选自下组的一个或多个位置处的一个或多个C1q结合取代可以提供增强的Fc介导的效应器功能，如增强的CDC：G236、S239、S267、H268、S324K326、I332、E333和P396。当与亲本多肽或亲本抗体相比时，多肽或抗体中Fc-Fc增强突变和C1q结合取代的组合进一步具有产生具有激动性质的多肽或抗体的令人惊讶的效果。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体包含至少一个取代基，所述取代基选自：E430G、E345K、E430S、E430F、E430T、E345Q、E345R、E345Y、S440W和S440Y。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体包含至少一个选自下组的取代：E430G、E430S、E430F和E430T。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体包含至少一个选自下组的取代：E345K、E345Q、E345R和E345Y。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体至少包含取代E430G。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体至少包含取代E345K。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体至少包含取代S440Y。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体包含选自下组的一个或多个位置处的取代：K326、E333和P396。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体包含选自下组的一个或多个位置处的取代，如两个或三个位置处的取代：K326A、K326W、E333S、E333A和P396L。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体包含选自下组的一个或多个位置处的取代，例如两个或三个位置处的取代：K326A、K326W、E333S、E333A、E333T和P396L。在本专利技术的一个实施方案中，多肽或抗体包含取代K326W和E333S。在另一方面，本专利技术涉及增加包含人IgG的Fc区和抗原结合区的多肽或抗体的激动活性的方法，该本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多肽，其包含免疫球蛋白的Fc区和抗原结合区，其中所述Fc区包含/na.在选自E430、E345的位置处的取代或S440Y或S440W取代，和/nb.选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324 K326、I332、E333和P396，/n其中所述位置对应于根据EU编号的人IgG1。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170210 DK PA2017000971.多肽，其包含免疫球蛋白的Fc区和抗原结合区，其中所述Fc区包含
a.在选自E430、E345的位置处的取代或S440Y或S440W取代，和
b.选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324K326、I332、E333和P396，
其中所述位置对应于根据EU编号的人IgG1。


2.根据权利要求1的多肽，其中所述多肽包含在选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324、K326、I332、E333和P396。


3.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所述多肽包含：
i)在选自下组的两个或三个位置处的取代：K326、E333和P396，或
ii)在三个位置S267、H268和S324处的取代。


4.根据权利要求1至2的多肽，条件是G236位的取代不是G236F、G236R、G236Y。


5.根据权利要求1至2的多肽，条件是S267位的取代不是S267H、S267I、S267K、S267G。


6.根据权利要求1至2的多肽，条件是H268位的取代不是H268K、H268D、H268E。


7.根据权利要求1的多肽，其包含至少一个选自下组的取代：E430G、E345K、E430S、E430F、E430T、E345Q、E345R、E345Y、S440Y和S440W。


8.根据权利要求1和7的多肽，其包含至少一个选自下组的取代：E430G、E430S、E430F、E430T。


9.根据权利要求1和7的多肽，其包含至少一个选自下组的取代：E345K、E345Q、E345R、E345Y。


10.根据权利要求1、7-8的多肽，其至少包含E430G取代。


11.根据权利要求1、7、9的多肽，其至少包含E345K取代。


12.根据权利要求1、7的多肽，其至少包含S440Y取代。


13.根据权利要求1-7、8、10的多肽，其中至少一个取代选自：E430G、E430S、E430F、E430T，并且所述多肽包含选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324、K326、I332、E333和P396。


14.根据权利要求1-7、9、11的多肽，其中至少一个取代选自：E345K、E345Q、E345R、E345Y，并且所述多肽包含选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324、K326、I332、E333和P396。


15.根据权利要求1-7、12的多肽，其中至少一个取代选自：S440Y或S440W，并且所述多肽包含选自下组的一个或多个位置处的取代：G236、S239、S267、H268、S324、K326、I332、E333和P396。


16.根据权利要求1-3、13-15的多肽，其包含选自下组的一个或多个位置处的取代：K326、E333和P396。


17.根据权利要求1-3、13-16的多肽，其包含选自下组的一个或多个位置，如两个或三个位置处的取代：K326、E333和P396。


18.根据权利要求1-3、13-17的多肽，其包含K326和E333位处的取代。


19.根据权利要求1-3、13-18的多肽，其包含K326、E333和P396位处的取代。


20.根据权利要求1-3、13-19的多肽，其包含选自下组的一个或多个取代，如两个或三个取代：K326W、K326A、E333S、E333T、E333A和P396L。


21.根据权利要求1-3、13-20的多肽，其包含取代K326W和E333S。


22.根据权利要求1-3、13-20的多肽，其包含取代K326W和E333T。


23.根据权利要求1-3、13-20的多肽，其包含取代K326A和E333A。


24.根据权利要求1-3、13-20的多肽，其包含取代K326A、E333A和P396L。


25.根据权利要求1-3、13-20的多肽，其包含取代K326W、E333S和P396L。


26.根据权利要求1-3、13-20的多肽，其包含取代K326W、E333T和P396L。


27.根据权利要求1-3、5-6、13-15的多肽，其包含在选自下组的一个或多个位置处的取代：S267、H268和S324。


28.根据权利要求1-3、5-6、13-15、27的多肽，其包含选自下组的一个或多个取代，如两个或三个取代：S267E、H268F和S324T。


29.根据权利要求1-3、5-6、13-1、27-28的多肽，其包含取代：S267E、H268F和S324T。


30.根据前述权利要求中任一项的多肽，其包含人免疫球蛋白的Fc区和抗原结合区，其中所述Fc区包含
a.在选自E430、E345的位置处的取代或S440Y或S440W取代，和
b.选自由以下组成的下列组之一的取代：
i.K326W，
ii.K326A，
iii.E333S，
iv.E333T，
v.E333A，
vi.P396L，
vii.K326W、E333S，
viii.K326W、E333T，
ix.K326W、E333S、P396L，
x.K326A、E333A，
xi.K326A、K333A、P396L，
xii.K326A、K333T、P396L，
xiii.S267E、H268F，
xiv.S267E、S324T，
xv.H268F、S324T，
xvi.S267E、H268F、S324T，
xvii.G236A、S267E、H268F、S324T，
xviii.S324、I332。


31.根据权利要求30的多肽，其还包含选自下组的一个或多个取代：G236A、S239D和I332E。


32.根据权利要求30至31的多肽，其还包含选自下组的至少两个取代：
a.G236A、I332E，
b.S239D、I332E。


33.根据前述权利要求中任一项的多肽，其包含所述Fc区中的一个或多个另外的取代。


34.根据权利要求33的多肽，其包含所述Fc区中对应于K439或S440位的另外的取代，条件是S440的突变不是S440Y或S440W。


35.根据权利要求33-34的多肽，其中所述另外的取代选自K439E或S440K。


36.根据权利要求33-34的多肽，其包含所述Fc区中对应于位置F405或K409的另外的取代。


37.根据权利要求33、3531-34的多肽，其中所述另外的取代选自F405L或K409R。


38.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所述多肽是抗体、单特异性抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。


39.根据权利要求38的多肽，其中所述多肽是包含Fc区的双特异性抗体，其包含第一重链和第一抗原结合区、第二重链和第二抗原结合区，其中
a.所述第一重链包含在选自下组的位置处的另外的取代：K409、F405、T366、L368、K370、D399、Y407；
b.所述第二Fc重链包含在选自下组的位置处的另外的取代：K409、F405、T366、L368、K370、D399、Y407。
c.其中所述第一重链和所述第二重链中的所述另外的取代不在相同位置中。


40.根据权利要求39的多肽，其中第一重链包含在选自K409和F405的位置处的取代，并且第二重链包含在选自K409和F405的位置处的取代，其中所述第一重链和所述第二重链中的取代不在相同位置中。


41.根据权利要求38-40的多肽，其中第一重链包含K409R或F405L取代，第二重链包含K409R或F405L取代，其中所述第一Fc区和所述第二Fc区中的取代不相同。


42.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所述Fc区是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgD、IgM、IgA同种型或混合同种型的。


43.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所述Fc区是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4同种型或混合同种型的。


44.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所述Fc区是人IgG1同种型的。


45.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所述多肽是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。


46.根据前述权利要求中任一项的多肽，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：F贝乌尔肯斯，M欧沃迪克，AM迪克斯，R德容，K斯特鲁梅恩，J舒尔曼，P帕伦，
申请(专利权)人：根马布私人有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL