免疫调节蛋白制造技术

本申请涉及免疫调节蛋白。公开了一种用于治疗哺乳动物受试者的自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，所述方法包括：向哺乳动物受试者施用有效量的多聚蛋白，所述多聚蛋白包含5个、6个或7个多肽单体单元；其中每个多肽单体单元包含Fc受体结合部分，所述Fc受体结合部分包含2个免疫球蛋白G重链恒定区；其中每个免疫球蛋白G重链恒定区包含半胱氨酸残基，所述半胱氨酸残基通过二硫键连接到毗邻多肽单体单元的免疫球蛋白G重链恒定区的半胱氨酸残基；其中所述多聚蛋白不包含另外的免疫调节部分，或当施用到哺乳动物受试者时引起抗原特异性免疫抑制的抗原部分。

Immunoregulatory protein

【技术实现步骤摘要】
免疫调节蛋白本申请是申请日为2012年10月17日，申请号为201280077785.1，专利技术名称为“免疫调节蛋白”的申请的分案申请。专利
本专利技术涉及具有免疫调节功能的工程化蛋白，及其用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病的医疗用途。特别地，所述工程化蛋白可用作静脉内免疫球蛋白(IVIG)的替代物。专利技术背景自身免疫性疾病和炎性疾病是高发病率和死亡率的原因。在2003年，自身免疫性疾病是75岁以下的全部年龄组中第6位最常见死亡的根本原因。一种重要的治疗方式为静脉内免疫球蛋白(IVIG)或IgG。最初，开发了来自人血浆的免疫球蛋白产品以治疗免疫缺陷。然而，目前使用了70％处方IVIG用于治疗自身免疫状况或炎性状况。全世界消耗的IVIG从1980年的每年300kg增加到2010年的每年100公吨。根据漫长和昂贵的制造工艺，从约3,000匿名捐赠者汇集的血浆中衍生得到IVIG。对于捐赠者和捐赠血浆的病毒的广泛筛选的需求产生了高成本。考虑到增加的需求，以及IVIG生产的严格调控，可能发生IVIG的短缺。IVIG制品可受制于不充分无菌度、杂质的存在和批次间的变化。它们在其免疫球蛋白A含量方面可极大地变化，并且IgA可在IgA缺陷的接受者中引起变态反应或过敏反应。使它们不适合某些患者。不得不向患者给予非常大剂量的IVIG，典型地2克每公斤体重，且这可在一些患者中引起不良反应。鉴于这些限制，需要用于IVIG的界定的替代物。尽管IVIG作用的机制还不清楚，源自IVIG的Fc片段可治愈罹患特发性血栓性紫癜(ITP)的儿童(DebreM等，1993)。尽管所涉及的确切受体被激烈争论(SamuelssonA等,2001；BazinR等,2006；Crow.A.R等,2003；LeontyevD等,2012；Siragam.V等,2006)且可因为疾病(对该疾病使用了IVIG)而变化(AraujoL.M等,2011；AnthonyR.M.等,2011)，认为IgG的Fc部分与在单核细胞和巨噬细胞上发现的抑制性和活化型FcγR两者之间的相互作用是重要的。已证明抑制性Fc受体FcγRIIb对于IVIG在ITP小鼠模型中的保护性作用是必需的(Samuelsson等,2001)。还已经证明在多种疾病中活化型Fc受体FcγRIIIa的作用(Mekhaiel等,2011b综述)。尽管近期工作已证明在小鼠模型中FcRn不参与改善ITP(Crow等,2011)，还已经假设FcRn负责维持Fc在血浆中的长半衰期(Roopenian和Akilesh,2007)。Fc部分不仅与Fc受体相互作用，而且与某些凝集素相互作用。已知IVIG通过Fc-聚糖的末端唾液酸与B淋巴细胞上的CD22凝集素结合(Siglec-2)(SeiteJ.F等，2010)，且最近研究证明，由于唾液酸化Fc与DC上的人凝集素受体DC-SIGN相互作用，唾液酸化Fc是小鼠关节炎模型中IVIG抗炎作用的原因(AnthonyR.M等，2011)。IVIG还可通过在其中注射的IVIG首先在患者中形成一类免疫复合物的多步模型起作用(Clynes等,2005；Siragam等,2005,2006；Machino等,2012)。形成了这些免疫复合物之后，它们与这些受体相互作用以介导有助于减少自身免疫性疾病或炎性状态严重性的抗炎性作用(Siragam等,2006)。通过抗独特型相互作用(Machino等,2010；Machino等,2012；Roux和Tankersley,1990；Teeling等,2001)或通过Fc的共价相互作用(Yoo等,2003)在IVIG中形成了Fc的多聚体。假定IgG多聚体显示了与以上受体结合的更高的亲合力(avidity)并通过交联所述受体的性质诱导了不能被Fc单体所诱导的保护性信号。这通过免疫复合物(IC)在小鼠中逆转ITP(Bazin等,2006)并通过观察IC通过FcγRIIb增强不成熟树突细胞的致耐受性来促进狼疮的减轻(Zhang等,2011)所支持。可市购获得的IVIG中多聚体IgG和/或唾液酸化IgG的比例极其低(分别<1％和5％)，其可以是需要施用很大量的原因(Nimmerjahn和Ravetch,2007)。其他提出的IVIG作用机制为独特型-抗独特型网络的修复；由IVIG中的特异性抗体抑制或中和细胞因子；阻断在白细胞上的粘附分子与血管内皮的结合；抑制补体在靶组织中的摄入；中和微生物毒素；由IVIG中的抗Fas抗体阻断Fas配体介导的细胞凋亡；在高浓度IVIG下抗Fas抗体诱导细胞凋亡；由IVIG中的抗Siglec-9抗体的嗜中性粒细胞的细胞凋亡；使FcRn受体饱和以增强自身抗体的消除；在效应物巨噬细胞上诱导抑制性FcγRIIb受体；中和B细胞的生长因子，诸如B细胞活化因子；抑制T细胞增殖反应；Treg细胞群的扩增、活化或两者；抑制树突细胞的分化和成熟；增强“致敏”树突细胞的分化和成熟(在Ballow,2011；Mekhaiel等,2011b中综述)。已经提出了用于在治疗自身免疫性疾病中使用和/或作为IVIG替代化合物的重组蛋白。US2011/0081345(Moore)公开了在治疗自身免疫性疾病中可以是有用的单链Fc(scFc)蛋白，所述单链Fc蛋白的每分子具有一个Fc单元，包含两个连接的Fc结构域氨基酸链。US2004/0062763(TempleUniversity；Mosser)公开了使用多价Ab或其部分以连接FcγRI来上调IL-10的产生，以治疗自身免疫紊乱。剂可以是偶联在一起的或提供于单个重组肽中的两种或更多种Fc片段。US2008/0206246(TheRockefellerUniversity；Ravetch)公开了包含至少一个唾液酸化的IgGFc区域的多肽，和其用作IVIG替代化合物的用途。尽管在这些文献中公开的化合物可靶向Fc受体，包含Fc单体或二聚体的化合物可不以有效地或完全有效地作为IVIG替代化合物的足够的亲合力来结合Fc受体。因此，它们不是IVIG的多聚体级分的适合仿生物。在这些文献中没有公开更高等级多聚体。也没有公开工程化作为IVIG替代化合物是有活性的更高等级多聚体的任何方式。US2010/0239633(UniversityofMaryland,Baltimore；Strome)公开了包含多个连接的Fc部分的IVIG替代化合物。设想使用了IgM的Cμ4结构域和J链的星形排列以实现聚合。然而，没有描述工作实例，且在此处报道的计算机模拟表明，示例性分子将不会有效地聚合和/或Fc部分将不会被排列用于有效结合Fc或其他受体。此外，包含多于一个的不同多肽链的生物复合物可更难以均匀地制造，因为不是所有的多肽亚单位可以以稳定地并可预测的方式相互作用。例如，产生包含正确比例的轻链和重链的活性完整抗体的表达抗体重链和轻链的细胞系，还可产生不含轻链连接物的治疗上无活性重链二聚体或半聚体(halfmer)分子。US2010/0239633中还提出了线性结构，其中通过相同的Fc结构域氨基酸链之间的配对使单个氨基酸链二聚化，因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗哺乳动物受试者的自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，所述方法包括：/n向所述哺乳动物受试者施用有效量的多聚蛋白，所述多聚蛋白包含5个、6个或7个多肽单体单元；/n其中每个多肽单体单元包含Fc受体结合部分，所述Fc受体结合部分包含两个免疫球蛋白G重链恒定区；/n其中每个免疫球蛋白G重链恒定区包含半胱氨酸残基，所述半胱氨酸残基通过二硫键连接到毗邻多肽单体单元的免疫球蛋白G重链恒定区的半胱氨酸残基；/n其中所述多聚蛋白不包含另外的免疫调节部分，或当施用到哺乳动物受试者时引起抗原特异性免疫抑制的抗原部分。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗哺乳动物受试者的自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，所述方法包括：
向所述哺乳动物受试者施用有效量的多聚蛋白，所述多聚蛋白包含5个、6个或7个多肽单体单元；
其中每个多肽单体单元包含Fc受体结合部分，所述Fc受体结合部分包含两个免疫球蛋白G重链恒定区；
其中每个免疫球蛋白G重链恒定区包含半胱氨酸残基，所述半胱氨酸残基通过二硫键连接到毗邻多肽单体单元的免疫球蛋白G重链恒定区的半胱氨酸残基；
其中所述多聚蛋白不包含另外的免疫调节部分，或当施用到哺乳动物受试者时引起抗原特异性免疫抑制的抗原部分。


2.根据权利要求1所述的方法，其中每个多肽单体单元包含融合到所述两个免疫球蛋白G重链恒定区的每个的尾片段区；其中所述每个多肽单体单元的尾片段区促进所述5个、6个或7个多肽单体单元组装成聚合体。


3.根据权利要求2所述的方法，其中所述尾片段区是IgM或IgA尾片段、或其片段或变体。


4.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个免疫球蛋白G重链恒定区的每个包含与天然人免疫球蛋白G1重链恒定区具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。


5.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个免疫球蛋白G重链恒定区的每个包含根据EU编号系统在位置309处包含半胱氨酸残基，且优选地在位置310处还包含亮氨酸残基的氨基酸序列。


6.根据权利要求1所述的方法，其中所述两个免疫球蛋白G重链恒定区的每个包含与天然免疫球蛋白G重链恒...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德·约翰·普利斯，
申请(专利权)人：康诺贝林伦瑙有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH