提供了包括连接到白细胞介素－９（ＩＬ－９）突变蛋白上的白细胞介素－４（ＩＬ－４）突变蛋白的嵌合多肽拮抗剂，也提供了编码ＩＬ－４和ＩＬ９嵌合突变蛋白拮抗剂的多核苷酸。也提供了使用所述嵌合突变蛋白拮抗剂和编码多肽来减少或抑制细胞对细胞因子如ＩＬ－４、ＩＬ－９和／或白细胞介素－１３的反应性的方法。也提供了使用组合物来治疗紊乱如肺紊乱（例如哮喘）的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般地涉及用于治疗调节免疫应答的组合物，更具体地涉及作为白 细胞介素-4、白细胞介素-9和白细胞介素-13活性的拮抗剂起作用的嵌合白细胞介 素—4(IL-4)和白细胞介素-9(IL-9)突变蛋白，并涉及使用这样的IL-4和IL-9嵌合拮 抗剂突变蛋白来调节细胞的细胞因子-介导的应答以及改善与细胞因子-介导的反 应性相关的紊乱的方法。背景信息白细胞介素-9 (白介素-9 (interleutin-9 (IL墨9)))、白细胞介素-4 (白介素 -4(interleutin-4(IL-4)))和白细胞介素-13(白介素-13 (interleutin-13 (IL-13)))是在受到 抗原刺激时由活化的T-细胞产生的细胞因子。哮喘的特征是可逆性气流阻塞和气 道高反应性(airway hyper-responsiveness (AHR))，与活化的T-淋巴细胞(T-细胞) 和嗜酸性粒细胞浸润支气管粘膜相关。这些细胞和居留的气道肥大细胞一起分泌 多种细胞因子和介质(mediator)，它们在疾病发病机理中起到基础性的作用(1,2)。 许多研究表明，作为Th2-依赖性免疫应答的介质，IL-9在哮喘中具有作用。 人连锁分析显示了在IL-9基因和增加的IgE产生血清水平和气道高反应性之间的 相关性(3,4)。 IL-9转基因小鼠展示出人哮喘的许多特征，并在过敏原攻击之后具 有十分强盛的支气管周和血管周嗜曙红细胞增多。嗜曙红细胞增多与肺上皮细胞 中的噬酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、 MIP-1和MCP-1、 MCP-3、和MCP-5的增 量调节一致，噬酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、 MIP-I和MCP-I、 MCP-3和MCP-5 对嗜酸性粒细胞具有趋化性(5)。 IL-9在哮喘中的作用的其他证据包括对IL-9通过 气道上皮细胞刺激黏蛋白分泌的能力的研究(6)。汇总在一起，这些研究阐明并支 持IL-9在调节哮喘和过敏性炎症的许多临床特点中的作用。据认为，IL-4和IL-13对过敏性炎症和哮喘的发展是至关重要的。用任一 细胞因子缺陷的动物进行的研究，或利用抑制IL-4或IL-13功能的试剂进行的研 究已经阐明了，这些细胞因子在调节初次免疫应答和二次免疫应答中发挥重要作 用，所述免疫应答导致气道炎症和气道高-反应性(7,8)。经日积月累，这些数据表 明，IL-4和IL-13在过敏性气道应答中具有重叠以及独立的作用。 减少的IL-9、 IL-4和IL-13活性能够减少T-细胞应答的Th2极化，减少嗜 酸性粒细胞的存活和嗜中性粒细胞的活性，并削弱气道上皮细胞的粘液产生。这 些效应转而能够降低气道高反应性和重塑(remodeling)，同时增加气体交换和清除， 并因此能够提供对若干肺部疾病的有效治疗药征(therapeutic modality),肺部疾病包 括例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(肺气肿和慢性支气管炎)和相关的肺部症状。这样， 与单独靶向这些细胞因子中的任何细胞因子相比，靶向IL-9、 IL-4和IL-13能够提 供重大的治疗益处。因此，对能够调节IL-9、 IL-4和IL-13对细胞的效应的组合物 存在需求。专利技术概述本专利技术涉及嵌合多肽，该嵌合多肽包括可操纵性地连接到白细胞介素 -9(1乙-9)突变蛋白受体拮抗剂的白细胞介素-4(化-4)突变蛋白受体拮抗剂。该嵌合多 肽的特征部分地在于它能够特异地破坏IL-4受体、IL-9受体、白细胞介素-13(IL-13) 受体或其组合的形成，例如，这是通过结合至IL-4或IL-9的a多肽并减少或阻止 a多肽与IL-2受体Y多肽缔合形成功能IL-4、 IL-9和/或IL-13受体而实现。这样， 本专利技术的嵌合多肽或编码该嵌合多肽的多核苷酸，例如，可用于减少或抑制IL-4、 IL-9禾P/或IL-13与细胞上的IL-4、 IL-9和/或IL-13受体特异性结合。因为此类白 细胞介素与它们的特异性受体的结合可能与病理状态如哮喘和其他肺紊乱相关以 及跟特定的癌症如白血病相关，本专利技术的组合物可以用于改善这些病理状态。 本专利技术的嵌合多肽可以含有位于IL-9突变蛋白受体拮抗剂的N-端的IL-4 突变蛋白受体拮抗剂成分，或可以含有位于IL-4突变蛋白受体拮抗剂的N-端的 IL-9突变蛋白受体拮抗剂成分。这样的嵌合多肽的例子是分别显示在SEQ IDNO:2 和SEQ ID NO:4中的多肽，其包括IL-4突变蛋白(IL-4RA)和IL-9突变蛋白 (IL-9RA)成分，并且还包括位于IL-4和IL-9成分的N-端的信号肽序列、多聚组氨 酸标签和烟草蚀斑病毒(TEV)蛋白酶识别位点。嵌合多肽的IL-4和IL-9成分可以 被直接连接(即， 一个成分的C-端直接连接到第二个成分的N-端)，或可以通过 间隔分子连接，所述间隔分子可操纵性地连接两个成分，使得每一个维持它各自 的IL-4、 IL-9和/或IL-13拮抗剂活性。在一个实施方案中，该间隔分子是肽，其 中，包括间隔肽的嵌合多肽包括由多核苷酸编码的融合蛋白。在另一个实施方案 中，间隔分子允许通过化学反应进行IL-4和IL-9成分的可操纵性连接。7本专利技术的嵌合多肽可以包括一个或多个附加的可操纵性连接的部分 (moiety),该可操纵性连接的部分可以定位于嵌合多肽的N-端和/或C-端，可以 定位于IL-4成分和IL-9成分之间，和/或可以结合到IL-4和IL-9成分之一或两者 的氨基酸侧链上。该部分可以是能够连接到多肽的任何类型的分子，包括例如， 肽、多核苷酸、有机或无机小分子、碳水化合物、脂类或此类分子的组合。例如， 所述部分可以是肽标签(tag)(例如，多聚组氨酸标签、myc标签、FLAG标签或 V5标签)或其他标志诸如生物素(或抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白)。这样的 标志可以提供检测嵌合多肽的存在情况和/或从含有嵌合多肽的组合物中纯化嵌合 多肽的手段。肽部分还可以提供蛋白酶的识别位点(例如TEV蛋白酶识别位点)。 所述部分还可以是可检测标记，其能够允许方便地检测嵌合多肽，例如在样品中 进行，在这种情况下，它还能够提供测定样品中嵌合多肽的量的手段；或者在细 胞中进行，在这种情况下，它能够提供检测嵌合多肽与所述细胞表达的IL-4、 IL-9 禾口/或IL-13受体或与IL-4和/或IL-9受体的a多肽结合的手段；或者在体内进行， 在这种情况下，它能够提供在给予嵌合多肽的对象中监测分布和/或定位的手段。 可检测标记(label)可以包括放射性核素、荧光部分、发光部分、化学发光部分、 顺磁部分、酶(或同源底物)、受体(或同源配体)、或当结合到嵌合多肽时能 够被方便地检测的任何其他分子。本专利技术的嵌合多肽可以以基本上纯化的(分离的)形式存在，或可以作为 包括一种或多种载体的组合物配制。载体可以是任何物质，在其中期望它组合嵌 合多肽，包括例如含水或不含水载体(例如，缓冲液、生理盐水或乙醇)，或可 以是稳定性材料(例如碳水化合物)，利用该稳定性材料所述嵌合多肽可以维持 在干燥(例如冻干)状态。在一个实施方案中，所述组合物包括生理上可接受的 载体、药学上可接受的载体或其组合，其中，当期望将嵌合多肽与细胞接触和/或 期望将嵌本文档来自技高网...
【技术保护点】
嵌合多肽，包括可操纵性地连接到白细胞介素－９（ＩＬ－９）突变蛋白受体拮抗剂上的白细胞介素－４（ＩＬ－４）突变蛋白受体拮抗剂，其中所述嵌合多肽可以减少或抑制白细胞介素与ＩＬ－４受体、ＩＬ－９受体、白细胞介素－１３（ＩＬ－１３）受体或其组合的缔合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：DC布瓦维尔，M朗菲勒，TM翁，SM扎连芭，
申请(专利权)人：艾罗文斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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