一种紫菜多肽原液的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种紫菜多肽原液的制备方法，以坛紫菜为原料，经过烘干、粉碎、加水浸泡、研磨等处理，得到颗粒细小的紫菜颗粒匀浆，加入一定量的蛋白酶二次酶解，得到酶解液，酶解液经灭酶、离心处理后即得紫菜多肽原液。本发明专利技术由于采用了二次酶解，使得紫菜得以充分酶解，在缩短酶解时间的同时，大大提高了紫菜多肽原液的提取率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程领域的
，尤其涉及。
技术介绍
紫菜含有高达30%左右的蛋白质以及碘、多种维生素和无机盐类，味道鲜美，除食用外还可用以治疗甲状腺肿大和降低胆固醇，是一种重要的经济海藻，广泛分布于世界各地，但以温带为主。目前紫菜的加工方式比较单一，主要是做成紫菜干制品，食用时需要泡发、烹调等处理，或是将紫菜烤熟之后经调味处理而成海苔。因此，一些研究者进一步探究了紫菜深加工的方式，通过提取出紫菜中的营养成分，用以制备天然产物，或是以此为基础开发饮料。研究证明，紫菜含有丰富的紫菜多肽，它具有降血压的功效，为此，提取制备紫菜多肽也成为研究的热点。在现有技术中，通常采用蛋白酶降解法来制备紫菜多肽，蛋白酶的酶解时间在5小时以上，且降解后的沉淀物被直接丢弃。本专利技术人经过大量的研发和实践，在一次对紫菜进行蛋白酶降解实验中，对沉淀物进行分析，发现还存在大量未被蛋白酶降解的紫菜底物，本专利技术人再试图增加蛋白酶量及延长酶解时间，但最终沉淀物仍然还有大量未被降解的紫菜底物，也就是说，在一次蛋白酶解过程中，不管是增加蛋白酶量还是延长酶解时间，对于紫菜多肽的提取率来说，增加的幅度都是非常有限。因此沉淀物酶解后被大量丢弃也得到了 “合乎情理”的解释。有鉴于此，本专利技术研究和设计了，本案由此产生。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，通过蛋白酶二次降解法，以进一步提闻紫菜多妝的提取率。为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题的技术方案是: ，包括以下步骤: 步骤一、制备紫菜颗粒匀浆: 以坛紫菜为原料，烘干后用高速粉碎机粉碎，形成干紫菜粉，所述干紫菜粉加水过夜浸泡使之充分溶胀，再用砂磨机进一步研磨，成颗粒细小的紫菜颗粒匀浆； 步骤二、采用二次酶法酶解: 第一次酶解时，将所述紫菜颗粒匀浆作为底物，将蛋白酶按质量百分比1.5%，以所述干紫菜粉重量计，加入所述底物中，调PH至2-9，在35~60°C下酶解3h，得到酶解液LI，将所述酶解液LI在15000Xg、4°C条件下离心30min，得到上清液SI和沉淀物S2 ； 第二次酶解时，按质量体积比1:10，以所述干紫菜粉重量计，将沉淀物S2加入水中使之重悬，得到紫菜悬浮液，将蛋白酶按质量百分比1.0%，以所述干紫菜粉重量计，加入所述紫菜悬浮液中，调PH至2-9，在35~60°C下酶解2h，得到酶解液L2，将所述酶解液L2在8000 X g、4°C条件下离心15min，得到上清液S3和沉淀物S4，弃去所述沉淀物S4，收集、合并所述上清液SI和所述上清液S3，得到上清液S5 ； 步骤三、分离纯化: 将所述上清液S5在沸水浴中煮1min灭酶，之后在8000 X g、4°C条件下离心15min，得到上清液S6和沉淀物S7,弃去所述沉淀物S7,收集所述上清液S6，即为紫菜多肽原液。作为实施例的优选方式，所述步骤一中，将所述干紫菜粉按照质量体积比1:15加入水中，在4°C下过夜浸泡。作为实施例的优选方式，所述步骤一中，所述砂磨机的转速为2000r/min，研磨时间为80min。作为实施例的优选方式，所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶或风味酶以及上述酶的组合。本专利技术的有益效果是:采用多重破碎、酶解工艺，将紫菜烘干后进行粉粹、研磨，使紫菜细胞充分破碎，有利于内容物充分释放出来，利用复合酶进行二次酶解，进一步将离心后紫菜渣中残留的蛋白质转化成多肽，提高了多肽提取率，充分利用了紫菜原料，节约成本，且操作简单。【具体实施方式】下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。本专利技术以坛紫菜为原料，经过烘干、粉碎、加水浸泡、研磨等处理，得到颗粒细小的紫菜颗粒匀浆，加入一定量的蛋白酶二次酶解，得到酶解液，酶解液经灭酶、离心处理后即得紫菜多肽原液。通过GB 50095-2010中的第一法凯氏定氮法测定紫菜原液中蛋白质含量，以评估紫菜多肽的提取率。通过血管紧张素转移酶(ACE)的体外抑制实验来反应紫菜多肽的降血压活性。紫菜多肽降血压活性的测定(1)10 μ I 的 5mM 反应底物 Hip-His-Leu，10 μ I 的 0.lU/ml ACE 和 10 μ I 的 0.2Μ 硼酸缓冲液(ΡΗ8.3，含有0.3 M NaCl)组成了体外ACE催化反应体系。在37°C下反应30min之后，加入25 μ I的IM盐酸终止反应。向反应体系中再加入150 μ I的乙酸乙酯，振荡5分钟使其充分混合，在1000 r/min下离心5min后，取出100 μ I酯层移入另一支PCR管中，用吹风机吹干，加入100 μ I的去离子水重新溶解，在228nm下测定吸光值。用10 μ I的紫菜多肽原液替换10 μ I的缓冲液，步骤同上，测定吸光值。(2)ACE抑制率(％)= (A-B+D)/ (A-C) X100%o其中，A为无抑制剂管的吸光值，B为含抑制剂管的吸光值，C为空白对照管的吸光值，D为抑制剂空白管的吸光值。实施例1紫菜的预处理 称取Ikg坛紫菜在50°C下烘2h，得到的干紫菜放入高速粉碎机中粉碎，然后按照质量体积比1:15 (以干紫菜粉重量计)将干紫菜粉加入水中，在4°C下过夜浸泡。再用砂磨机在转速为2000r/min条件下研磨80min,得到紫菜颗粒勻衆。实施例2 二次酶解 称取64g紫菜颗粒勻衆(内含4g干紫菜粉和60g水，即1:15研磨),加入60mg胰蛋白酶，混合均勻，用lmol/1和0.lmol/1的碳酸钠溶液调pH至8,在37°C下酶解3h,得到酶解液LI，将酶解液LI在15000Xg、4°C条件下离心30min，得到上清液SI和沉淀物S2。将沉淀物S2加入40ml水中使之重悬，在重悬液中加入40mg碱性蛋白酶(碱性蛋白酶由地衣芽孢杆菌常规发酵而得)，混合均匀，用lmol/1和0.lmol/1的碳酸钠溶液调pH至8，在50°C下酶解2h，得到得到酶解液L2，将酶解液L2在8000 X g、4°C条件下离心15min，得到上清液S3和沉淀物S4。弃去沉淀物S4，收集、合并上清液SI和S3，得到上清液S5。实施例3分离纯化 将S5在沸水浴中煮1min灭酶，之后在8000 X g、4°C条件下离心15min，得到上清液S6和沉淀物S7,弃去沉淀物S7,收集上清液S6，即为紫菜多肽原液。经测定，紫菜多肽原液中蛋白质含量为1.16%，提取率为71.6%，ACE活性抑制率为 93.3%。本专利技术第一次酶解时间为3小时，第二次酶解时间为2小时，第一次酶解3小时后，本专利技术人发现生成的紫菜多肽会抑制蛋白酶的水解，即紫菜多肽的产量达到了平稳期，即使再延长酶解时间，紫菜多肽的量也不会再增加，因此，本专利技术人对第一次酶解的沉淀物进行了第二次酶解，由于该沉淀物基本不含紫菜多肽，因而在第二次酶解中，解除了产物抑制的作用，使得沉淀物中含有的紫菜底物被进一步得以分解利用。综上，本专利技术人采用二次酶解法，克服产物抑制效应，在相对现有技术缩短反应时间的同时，大大提高了紫菜多肽的提取率。本领域的普通技术人员能从本专利技术公开内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本专利技术的保护范围。【主权项】1.，其特征在于:包括以下步骤: 步骤一、制备紫菜颗粒匀浆: 以坛紫菜为原料，烘干后用高速粉碎机粉本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种紫菜多肽原液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、制备紫菜颗粒匀浆：以坛紫菜为原料，烘干后用高速粉碎机粉碎，形成干紫菜粉，所述干紫菜粉加水过夜浸泡使之充分溶胀，再用砂磨机进一步研磨，成颗粒细小的紫菜颗粒匀浆；步骤二、采用二次酶法酶解：第一次酶解时，将所述紫菜颗粒匀浆作为底物，将蛋白酶按质量百分比1.5％，以所述干紫菜粉重量计，加入所述底物中，调pH至2‑9，在35~60℃下酶解3h，得到酶解液L1，将所述酶解液L1在15000×g、4℃条件下离心30min，得到上清液S1和沉淀物S2；第二次酶解时，按质量体积比1:10，以所述干紫菜粉重量计，将沉淀物S2加入水中使之重悬，得到紫菜悬浮液，将蛋白酶按质量百分比1.0％，以所述干紫菜粉重量计，加入所述紫菜悬浮液中，调pH至2‑9，在35~60℃下酶解2h，得到酶解液L2，将所述酶解液L2在8000×g、4℃条件下离心15min，得到上清液S3和沉淀物S4，弃去所述沉淀物S4，收集、合并所述上清液S1和所述上清液S3，得到上清液S5；步骤三、分离纯化：将所述上清液S5在沸水浴中煮10min灭酶，之后在8000×g、4℃条件下离心15min，得到上清液S6和沉淀物S7，弃去所述沉淀物S7，收集所述上清液S6，即为紫菜多肽原液。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李健，苏文金，苏国成，雷桂洁，周常义，刘静雯，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35