自然杀伤T细胞活化剂多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及药物领域，具体涉及具有活化自然杀伤T细胞，抑制基质金属蛋白酶-2、具有减轻急性炎症反应对机体破坏的多肽。其序列为RQQQEATRPRTAAANGLMQT是全新的序列，可以在体外抑制基质金属蛋白酶-2的活力，并在体内试验中增加内毒素休克小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。

【技术实现步骤摘要】
自然杀伤T细胞活化剂多肽及其应用
本专利技术涉及自然杀伤T细胞活化剂及其应用，具体涉及具有活化自然杀伤T细胞，治疗急性淋巴细胞性白血病的多肽。
技术介绍
急性淋巴细胞性白血病(ALL)是一种进行性恶性疾病，其特征为大量的类似于淋巴母细胞的未成熟白细胞。这些细胞可在血液、骨髓、淋巴结、脾脏和其它器官中发现。急性淋巴细胞性白血病占儿童急性白血病的80%，发病率高峰在3岁至7岁之间。ALL也可发生于成年人，占所有成年人白血病的20%。近年来随着医学研究的深入，对急性淋巴细胞性白血病的认识和治疗取得了很大进展。生物靶向治疗肿瘤是非常有前景的，靶向治疗是阻断肿瘤发生的某个过程，达到治疗肿瘤的目的。自然杀伤T (natural killer T cells, NKT)细胞是一种具有特定标志的T细胞亚群，既表达T细胞表面标志，如CD3、TCRaB (人类表达Va24 Vfill，小鼠表达Val4 Jal8)，又表达NK细胞的表面标志。NKT细胞只能识别由⑶Id分子递呈的特异性糖脂类分子，而不是由主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex, MHC)递呈的多肽。NKT细胞活化后可迅速分泌一系列的细胞坏死相关因子，如穿孔素和TNF-α，增强其杀伤肿瘤细胞的作用；还可通过激活其他具有杀伤活性的效应细胞，如NK细胞和CD8 +细胞，发挥抗肿瘤作用。因此，活化自然杀伤T细胞，抑制急性淋巴细胞性白血病发展，是治疗急性淋巴细胞性白血病的新靶点。但是，尚未有开发成熟的自然杀伤T细胞活化剂多肽的治疗急性淋巴细胞性白血病的药物。本专利中的自然杀伤T细胞活化剂多肽已证明在急性淋巴细胞性白血病中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。
技术实现思路
专利技术目的 本专利技术提供全新的序列，该序列自然杀伤T细胞活化剂，对急性淋巴细胞白血病具有很好的疗效。技术方案 自然杀伤T细胞活化剂，其特征在于其序列为RQQQEATRPRTAAANGLMQT。自然杀伤T细胞活化剂在制备治疗急性淋巴细胞白血病药物中的应用。有益效果 利用固相合成法化学合成自然杀伤T细胞活化剂，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外活化自然杀伤T细胞，治疗急性淋巴细胞白血病。可以在体外抑制基质金属蛋白酶-2的活力，并在体内试验中增加内毒素休克小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。同时也对乳腺癌有效。【具体实施方式】本专利技术涉及多肽有吉尔生化(上海)合成。实施例1 多肽的化学合成方法 多肽用Fmoc化学方法合成。合成反应从C端向N端进行，Rink介质(可在AdvancedChemTech公司购得)上有自由氨基，顺序连接氨基酸。每一步连接过程中，氨基酸残基都要活化，活化混合物中有4倍于介质上自由氨基的HBTU，HOBt7DIEA和Fmoc-氨基酸。每次氨基酸的连接反应之后，都用一个吡啶/醋酸/N-甲基咪唑(4:1:0.5)的混合物来封闭未连接的自由氨基，封闭反应10 min0每次氨基酸的连接反应之后，下一个氨基酸连接之前，都要把介质上的Fmoc-基团去掉，去Fmoc-基团使用含20%哌啶的二甲基甲酰胺，需15分钟。最后，当所有氨基酸残基顺序连接之后，多肽用98%三氟乙酸从介质上切割下来，切割在室温下进行2小时。应用上述化学条件可合成并获得多肽，序列为RQQQEATRPRTAAANGLMQT，该序列为全新序列。实施例2 自然杀伤T细胞活化剂体外基质金属蛋白酶-2的IC50值。基质金属蛋白酶-2的活力是通过切割荧光产生底物Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nval-Trp-Arg-Lys (Dnp) -NH2 来检测(激发波长=320 nm,发射波长=405 nm)。反应在37° C下100 μL反应体系中进行。反应开始时向反应体系中加4 μL自然杀伤T细胞活化剂2存储液(I ng/μL)底物的终浓度为10 μΜ。计算IC50值为2.05 μΜ。实施例3 用内毒素休克模型检测自然杀伤T细胞活化剂的体内活力 在建立内毒素休克模型之前，我们首先测定了 LPS(E.coli 0111:B4，sigma公司购买)小白鼠的LD50为50 μg每只小鼠，在实验中我们采用了 100 μg每只小鼠，这样，对照组的小鼠可全部死亡。在我们前面的科研工作中，发现Regas印in2 (另外一条多肽抑制剂，已公开)可提高C57BL/6小鼠在内毒素休克过程中的生存率。为了在我们的小白鼠上建立内毒素休克模型，我们用Regas印in2做了一个阳性对照实验。对照组小鼠注射100 μg LPS，而Regasepin2实验组的小鼠在注射LPS 5分钟之后,每只小鼠再注射0.7 mg的多肽。通过制作Kaplan-Meier生存曲线发现Regasepin2可有效的保护注射了 100 Pg的小鼠,提高了生存率。成功地在小白鼠上建立内毒素休克模型之后，用该模型检测自然杀伤T细胞活化剂2的体内活力。对照组小鼠(12只)注射100 μg LPS，而自然杀伤T细胞活化剂2组小鼠(12只)在注射LPS 5 min后，每只小鼠注射0.7 mg自然杀伤T细胞活化剂2。用Kaplan-Meier生存曲线分析，自然杀伤T细胞活化剂2可有效地保护小白鼠，提高内毒素休克小鼠的生存率。实施例4 自然杀伤T细胞活化剂多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验取对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞株，在无菌条件下制备成5XlOVml细胞悬液，以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径，待肿瘤生长至100-200mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天测I次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水，每天I次；紫杉醇组10mg/kg,每周给药I次；恩度组2.5mg/kg,每天给药I次；多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg,每天给药I次。试验结束后，小鼠处死,手术剥取瘤块称重。表1.多肽对人宫颈癌HeLa裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
自然杀伤T细胞活化剂多肽，其特征在于其序列为RQQQEATRPRTAAANGLMQT。

【技术特征摘要】
1.自然杀伤T细胞活化剂多肽，其特征在于其序列为RQQQEATRPRTAAANGLMQT。2.一种药物组合物，其特征在于其包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗瑞雪，
申请(专利权)人：苏州普罗达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32