活化的NK细胞的经保存的组合物及其使用方法技术

本申请公开了在不存在活化剂时显示出持久且延长的活性的活化的NK细胞，并且所述细胞在保存后保持其活化的状态。向患者施用所述NK细胞的方法不需要共施用活化剂，并且因此，包含所述NK细胞的药物组合物可保持基本上不含活化剂，例如CD15+LAK_抗性肿瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般性地涉及显示出持久活化状态的经保存的天然杀伤细胞群、包含此类经活化的NK细胞的药物组合物，及它们的使用方法。
技术介绍
癌症的过继免疫疗法考虑的是通过用特定的肿瘤细胞进行疫苗接种和/或施用更为一般性的免疫刺激物而直接刺激宿主对肿瘤的免疫应答。然而，数种因素可妨碍充分的抗肿瘤免疫应答，这包括缺乏合适的肿瘤相关抗原，有缺陷的抗原加工，由肿瘤产生免疫抑制性因子等。过继免疫疗法通过直接向携带肿瘤的宿主施用有免疫活性的细胞或抗体而试图克服肿瘤介导的宿主免疫抑制。在过继性细胞疗法中，从携带肿瘤的宿主中分离免疫效应子细胞并且在再输注之前离体使其活化和/或扩增。例如，用重组的白介素_2(IL-2)离体活化了自体NK细胞以提高CD56+天然杀伤(NK)细胞的细胞毒性(Lanier et al. (1985) Journal of Immunology 134,794-801)并且产生经淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞，其能够在体外杀伤新鲜的自体和同种异基因性人肿瘤细胞(Rayner，et al. (1985)Cancer 55， 1327-1333)。施用LAK细胞(通常与全身性IL-2输注相组合)已经作为用于人类癌症的过继免疫疗法经过了反复地研究。然而，遗憾的是这些LAK细胞疗法在临床中仅遇到了有限的成功。首先必须从患者中获得自体细胞并且使其成功地离体扩增至足以用于治疗的细胞计数。此外，必须使 LAK细胞持续地暴露于IL-2，以维持其活化的状态并且因此，有效的临床方案通常要求全身性施用高剂量的IL-2与细胞疗法相联合。虽然在一些患者中获得了一些抗肿瘤效果， 由共施用IL-2引起的毒性是显著的问题(Vieweg et al. (1995)Cancer Investigation 13 :193-201),这包括发烧、发冷、全身乏力、关节痛、肌痛、和来自液潴的增重(Lotze，et al. (1985)J. Immunology 135 :2865-2875)。LAK细胞疗法的成功实施还被不能在实时个体化方案之外采用活化的LAK细胞所妨碍。特别地，需要特殊的设备和专门的实验室来分离、扩增和重输注每个患者的细胞。此外，LAK细胞的活性在去除IL-2后12小时内被显著损害，因此，一旦被活化，LAK细胞必须在丧失活化状态之前被迅速输注。重要地，LAK细胞的保存使得需要通过以IL-2进行再刺激而制备用于施用的LAK细胞，来重建活化的状态(Kawai et al. (1988)Transfusion 28: 531-5 ；Schiltz et al. (1998) J. Immunother. 20 :377-86)。因此，施用 LAK细胞用于癌症的免疫疗法具有有限的临床影响和认可，需要昂贵的、个体化的和劳动密集性的分离及扩增方法，以及实时施用来避免丧失活化。因此，所需的是具有更可靠且持久的活性的经活化的免疫效应子细胞群，其可更好地促进细胞疗法与供体护理的协调。理想地，尽管保存，这些细胞仍可维持其活化状态而不持续暴露于活化剂和/或共施用不希望的和/或临床毒性试剂，从而使得更为一般性的临床应用可以是可能的。专利技术概述本专利技术提供经保存的、具有显著的抗肿瘤活性的活化的NK细胞群，尽管有之前的保存，其仍显示出令人惊讶地持久的活化状态，并且甚至在不存在活化剂时(例如，在结束与活化剂的接触后和/或不持续暴露于活化剂或以其再活化)亦如此。重要地且与LAK细胞不同地，本专利技术的经活化的NK细胞可在保存后直接被施用于患者而无需再活化并且也无需共施用活化剂本身，从而为医师提供了可持续的且即用的细胞治疗产品，其还避免了伴随着共施用活化剂的潜在毒性。此外，可跨越同种异基因性障碍而有效地采用本专利技术的细胞群，并且重要地，过继性转移后，本专利技术的细胞群能够将杀肿瘤能力转移至内源性宿主NK细胞，从而在体内产生 NK细胞活化级联。因此，本申请所提供的经活化的NK细胞群可被更一般性和更实际地用于主动和被动免疫疗法设置中，而无需个体化的治疗方案和/或实时施用方案。因此，一方面，本专利技术提供了经活化的NK细胞的药物组合物。所述组合物可适于直接施用于患者。所述组合物可基本上不含活化剂。经活化的NK细胞可以是之前经保存的。在使用中，经活化的NK细胞可在任意保存后继而被制备用于施用而不经再活化或与活化剂相接触。在实施方式中，所述组合物包含之前经保存的活化的NK细胞、适于直接施用并且不含活化剂。所述组合物可以是(并且通常是)用于施用而不共施用(无论同时、 分别还是顺次)活化剂。在其它方面，提供了⑴经活化的NK细胞群用于治疗性应用(例如用于治疗癌症)，和(ii)经活化的NK细胞群用于制备药物的用途，所述药物例如用于治疗癌症。所述细胞群可以是经保存的。所述细胞群可以不含活化剂。所述细胞群可包括药学上可接受的介质或载体。所述细胞群可以被重构为药物组合物，但是由保存状态移除后， 其按照希望准备好用于施用(例如准备好用于输注)。因此，本申请中对于本专利技术的药物组合物的描述同样适用于本专利技术的细胞群，例如可通过用CD15+LAK-抗性肿瘤细胞进行活化而获得NK细胞。优选地，与静止的NK细胞相比，所述NK细胞过表达⑶69和/或⑶25， 并且尽管不存在活化剂其仍显示出持久和延长的抗肿瘤活性。因此，在一个实施方式中，之前经活化的NK细胞是CD69+和/或CD25+。在其它实施方式中，预期用于本申请中的经活化的NK细胞在活化后也获得⑶15的表达并丧失⑶16的表达。因此，本专利技术的NK细胞更优选地也是⑶15+和⑶16 的。这些⑶69+⑶25+⑶16 ⑶15+NK细胞将通常包含至少约 50%的所述细胞群，更优选地至少约60、70或80%的所述细胞群，且最优选地至少约90、95 或98%的所述细胞群。在一个实施方式中，所公开的药物组合物包含对于患者为自体的、经活化的NK细胞。在另一个实施方式中，药物组合物包含对于患者是自体的和对于患者是同种异基因性的经活化的NK细胞。在另一个实施方式中，药物组合物包含对于患者是同种异基因性的经活化的NK细胞。在另一个实施方式中，药物组合物包含对于彼此是同种异基因性的经活化的NK细胞。可有利地与本专利技术联合使用的合适的保存技术包括细胞培养、冷藏和冷冻保存。在优选的实施方式中，经活化的NK细胞经冷冻保存(例如，在氮气中)至少约1天、例如至少1周、例如至少约4周、例如至少约3个月，例如约6个月，例如至少约一年，例如至少约五年等。在一个实施方式中，经活化的NK细胞在包含DMSO和HAS的培养基中以如下的细胞密度被保存在冷冻细胞袋中约IxlO6至切107细胞/mL，更优选地约IxlO7至hlO7细胞/mL。在一个实施方式中，通过融化而制备将经冷冻保存的NK细胞用于施用。在一个实施方式中，不存在活化剂而融化经活化的NK细胞，并在融化后将其立即施用。因此，本专利技术包括用于制造可输注制剂形式的即用药物的方法，所述制剂不含或基本上不含用于活化NK 细胞的试剂，所述方法包括下述或由下述组成融化不含或基本上不含活化剂的、冷冻保存的活化NK细胞，所述制剂用于治疗癌症而不共施用(无论同时、分别还是顺次)活化剂。此实施方式中的可输注制剂准备好立即使用而不用任何进一步的加工。在一个实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：马克·洛戴尔，
申请(专利权)人：马克·洛戴尔，
类型：发明
国别省市：