选择性地活化调节性T细胞用于治疗自身免疫病的分子制造技术

本发明专利技术提供了在IL2αβγ选择性激动剂蛋白(IL2选择性激动剂)与IgG Fc蛋白之间的融合蛋白。IL2选择性激动剂部分通过选择性地活化受体的IL2αβγ形式，从而选择性地刺激Treg，来提供治疗活性。Fc部分提供与IL‑2或IL2SA蛋白的循环半衰期相比延长的循环半衰期。

A molecule that selectively activates regulatory T cells for the treatment of autoimmune diseases

The present invention provides agonists of IL2 protein in alpha beta gamma selective (IL2 selective agonist) and fusion between IgG Fc protein. The IL2 selective agonist partially provides the therapeutic activity by selectively activating the receptor's IL2 alpha beta gamma form, thereby selectively stimulating Treg. Fc and IL provide 2 or IL2SA protein compared with the circulating half-life prolonged circulation half-life.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】选择性地活化调节性T细胞用于治疗自身免疫病的分子专利技术背景免疫系统必须能够区分自身和非自身。当区分自身/非自身失败时，免疫系统破坏身体的细胞和组织并因此导致自身免疫病。调节性T细胞主动地阻遏免疫系统的活化和阻止病理性的自身反应性和作为结果的自身免疫病。开发选择性活化调节性T细胞的药物和方法用于治疗自身免疫病是密集研究的主题，且直到本专利技术的开发之前，主要是不成功的。调节性T细胞(Treg)是一类CD4+CD25+T细胞，其阻遏其他免疫细胞的活性。Treg是免疫系统内稳态的中心，并在维持对自身抗原的耐受性和调节对外来抗原的免疫应答中起主要作用。多种自身免疫病和炎性疾病，包括1型糖尿病(T1D)、系统性红斑狼疮(SLE)、和移植物抗宿主病(GVHD)，已经显示具有Treg细胞数目或Treg功能的缺陷。因此，在开发加强Treg细胞的数目和/或功能的疗法方面存在极大兴趣。正在研究的用于自身免疫病的一种治疗方法是自体的、离体(exvivo)扩增的Treg细胞的移植(Tang,Q.,等人,2013,ColdSpringHarb.Perspect.Med.,3:1-15)。尽管这一方法已经在治疗疾病的动物模型和在数个早期人类临床试验中显示出希望，其要求用患者自身的T细胞的个性化治疗，是有创的，并是技术上复杂的。另一种方法是用低剂量白介素-2(1L-2)治疗。Treg细胞特征性地表达高组成水平的高亲和力IL-2受体IL2Rαβγ，其包括亚基IL2RA(CD25)、IL2RB(CD122)和IL2RG(CD132)，且Treg细胞生长已经显示依赖于IL-2(Malek,T.R.,等人,2010,Immunity,33:153-65)。低剂量IL-2治疗慢性GVHD(Koreth,J.,等人,2011,NEnglJMed.,365:2055-66)和HCV相关的自身免疫血管炎患者的临床试验(Saadoum,D.,等人,2011,NEnglJMed.,365:2067-77)已经表明增加的Treg水平和临床效力的迹象。已经开始了研究IL-2在多种其他自身免疫病和炎性疾病中的效力的新的临床试验。在这些试验中使用的IL-2的重组形式Proleukin(由PrometheusLaboratories,SanDiego,CA销售)，伴有高的毒性。Proleukin被批准用于治疗转移性黑素瘤和转移性肾癌，但其副作用如此严重，以致其使用仅在具有使用重症监护的医院环境中被推荐(http://www.proleukin.com/assets/pd/proleukin.pdf)。直到Treg细胞的最近表征，IL-2被认为是免疫系统刺激物，活化T细胞和其他免疫细胞以消灭癌细胞。由于Treg细胞因其表达IL2Rαβγ而比许多其他免疫细胞类型响应于更低浓度的IL-2，IL-2在自身免疫病中的临床试验已经采用了低剂量的IL-2以靶向Treg细胞(KlatzmannD,2015NatRevImmunol.15:283-94)。然而，即使这些低剂量导致安全性和耐受性问题，且使用的治疗已经采取了每日皮下注射(长期或以间歇5天的治疗过程)。因此，对以下的自身免疫病疗法存在需求：其加强Treg细胞数目和功能，比IL-2更特异性地靶向Treg细胞，更安全和更可耐受，且较不频繁地施用。改进基于IL-2的疗法的治疗指数的一种方法是使用IL-2的变体，其相对于其他免疫细胞对Treg细胞是选择性的。IL-2受体在包括T细胞、NK细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞的多种不同免疫细胞类型上表达，且这一宽的表达谱可能促进其对免疫系统的多效作用和高的系统毒性。IL-2受体以三种形式存在：(1)低亲和力受体IL2RA，其不发信号；(2)中等亲和力受体(IL2Rβγ)，包括IL2RB和IL2RG，在常规T细胞(Tcons)、NK细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞中广泛表达；和(3)高亲和力受体(IL2Rαβγ)，包括IL2RA、IL2RB和IL2RG，在活化的T细胞上瞬时表达和在Treg细胞上组成型表达。已经开发了相对于IL2Rβγ对IL2Rαβγ选择性的IL-2变体(Shanafelt,A.B.,等人,2000,NatBiotechnol.18:1197-202；Cassell,D.J.,等人,2002,CurrPharmDes.,8:2171-83)。这些变体具有减少其对IL2RB的亲和力的氨基酸取代。由于IL-2具有对IL2RG不可检测的亲和力，这些变体因此具有对IL2Rβγ受体复合物减少的亲和力和减少的活化表达IL2Rβγ的细胞的能力，但保留结合IL2RA的能力和结合并活化IL2Rαβγ受体复合物的能力。基于表达IL2Rβγ的NK细胞是对毒性的主要贡献者的假设，这些变体之一IL2/N88R(Bay50-4798)，以作为免疫系统刺激物的低毒性形式的IL-2被临床测试。Bay50-4798显示相对于NK细胞选择性地刺激活化的T细胞的增殖，并在癌症患者(Margolin,K.,等人,2007,ClinCancerRes.,13:3312-9)和HIV患者(Davey,R.T.,等人,2008,JInterferonCytokineRes.,28:89-100)的I/II临床试验中被评价。这些试验显示，Bay50-4798比Proleukin显著地更安全和更可耐受，并显示，其增加了患者中CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞的水平。然而，CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞的增加不指示Treg细胞的增加，因为Treg的鉴定要求除了CD4和CD25以外的另外的标志物，且因为Treg细胞是CD4+CD25+细胞的一小部分。在这些试验之后，本领域中的研究更充分地确立了Treg细胞的身份并表明，Treg细胞选择性地表达IL2Rαβγ(在Malek,T.R.,等人,2010,Immunity,33:153-65中综述)。基于这一新的研究成果，现在可理解，IL2Rαβγ选择性激动剂应对Treg细胞是选择性的。改进基于IL-2的疗法的治疗指数的第二种方法是优化该分子的药代动力学以最大地刺激Treg细胞。IL-2作用的早期研究表明，体外的人类T细胞增殖的IL-2刺激要求暴露于有效浓度的IL-2至少5-6小时(Cantrell,D.A.,等人,1984,Science,224:1312-1316)。当施用于人类患者时，IL-2具有非常短的血浆半衰期：对于静脉施用85分钟和对于皮下施用3.3小时(Kirchner,G.I.,等人,1998,BrJClinPharmacol.46:5-10)。由于其短的半衰期，维持循环中的IL-2处在或高于刺激T细胞增殖持续必要的持续时间必需的水平使高剂量成为必需，这导致峰值IL-2水平显著高于Treg细胞的EC50或将要求频繁施用(图1)。这些高IL-2峰值水平可活化IL2Rβγ受体并具有其他非预定的或不利的作用。具有比IL-2更长的循环半衰期的IL-2类似物可在比IL-2低的浓度和较低峰值水平实现靶药物浓度持续指定的时间段。因此，此类IL-2类似物将要求比IL-2低的剂量或较不频繁施用来有效刺激Treg细胞。事实上，在用具有14小时的循环半衰期的IgG-I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种融合蛋白，包含：a.N‑末端人类IL‑2变体蛋白部分；和b.C‑末端IgG Fc蛋白部分；其中所述IL‑2融合蛋白具有选择性地活化高亲和力IL‑2受体并因此选择性地活化人类调节性T细胞的能力。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.21 US 61/999,2411.一种融合蛋白，包含：a.N-末端人类IL-2变体蛋白部分；和b.C-末端IgGFc蛋白部分；其中所述IL-2融合蛋白具有选择性地活化高亲和力IL-2受体并因此选择性地活化人类调节性T细胞的能力。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中所述IL-2变体蛋白包含相对于人类IL2蛋白(SEQIDNO:1)具有选自由以下组成的组的取代的人类IL-2：N88R、N88I、N88G、D20H、Q126L、Q126F、D84G或D84I。3.如权利要求1所述的融合蛋白，其中所述IL-2变体蛋白包含具有取代C125S的人类IL-2。4.如权利要求1所述的融合蛋白，其中所述IL-2变体蛋白和所述IgGFc蛋白二者具有N-末端和C-末端，且所述人类IL-2变体蛋白在其C-末端融合至所述IgGFc蛋白的N-末端。5.如权利要求1所述的融合蛋白，所述融合蛋白还包含被放置在所述IL-2变体蛋白部分和所述IgGFc蛋白部分之间的接头肽。6.如权利要求1所述的融合蛋白，其中所述IgGFc蛋白包含减少所述融合蛋白的Fc部分的效应物功能的一个或更多个氨基酸取代。7.一种融合蛋白，包含：a.相对于人类IL-2(SEQIDNO:1)具有氨基酸取代N88R和C125S的IL-2变体蛋白；b.SEQIDNO:15中所列的接头肽；和c.SEQIDNO:2中所列的人类IgG1Fc蛋白，其中所述融合蛋白具有选择性地活化高亲和力IL-2受体并因此选择性地活化人类调节性T细胞的能力。8.一种融合蛋白，包含：a.相对于人类IL-2(SEQIDNO:1)具有氨基酸取代N88R和C125S的IL-2变体蛋白；b.SEQIDNO:2中所列的接头肽；和c.SEQIDNO:3中所列的人类IgG2Fc蛋白。9.一种药物组合物，包含如权利要求1所述的融合蛋白和药学上可接受的载体。10.一种选择性地活化人类调节性T细胞的方法，所述方法包括施用包含以下的药物组合物：相对于人类IL-2(SEQIDNO:1)具有氨基酸取代N88R和C125S的IL-2变体蛋白、SEQIDNO:15中所列的接头肽、和SEQIDNO:3中所列的人类IgG1F...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰弗里·格雷夫，
申请(专利权)人：德里尼亚公司，
类型：发明
国别省市：美国,US