本发明专利技术一般涉及展现出降低的对IL-2受体α亚基的亲和力的突变体白介素-2多肽，用作免疫治疗剂。另外，本发明专利技术涉及包含所述突变体IL-2多肽的免疫缀合物、编码突变体IL-2多肽或免疫缀合物的多核苷酸分子、以及包含这类多核苷酸分子的载体和宿主细胞。本发明专利技术进一步涉及用于生成所述突变体IL-2多肽或免疫缀合物的方法、包含所述突变体IL-2多肽或免疫缀合物的药物组合物、及其用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】突变体白介素-2多肽专利
本专利技术一般涉及突变体白介素-2多肽。更具体地，本专利技术关注展现出改善的用作免疫治疗剂的特性的突变体白介素-2多肽。另外，本专利技术涉及包含所述突变体IL-2多肽的免疫缀合物、编码突变体IL-2多肽或免疫缀合物的多核苷酸分子、以及包含这类多核苷酸分子的载体和宿主细胞。本专利技术还涉及用于生成所述突变体IL-2多肽或免疫缀合物的方法、包含其的药物组合物及其用途。专利技术背景白介素-2(IL-2)，也称为T细胞生长因子(TCGF)，是一种在淋巴细胞生成、存活或稳态中起着重要作用的15.5kDa球状糖蛋白。它具有的133个氨基酸的长度，并由4个反平行的、两亲性α螺旋组成，所述4个α螺旋形成其功能必不可少的四级结构(Smith,Science240,1169-76(1988);Bazan,Science257,410-413(1992))。来自不同物种的IL-2的序列可见于NCBIRefSeqNo.NP000577(人)、NP032392(小鼠)、NP446288(大鼠)或NP517425(黑猩猩)。IL-2通过结合IL-2受体(IL-2R)来介导其作用，所述IL-2受体由多至3个个别亚基组成，其不同的联合能产生其对IL-2亲和力不同的受体形式。α(CD25)、β(CD122)和γ(γc,CD132)亚基的联合产生对IL-2的三聚体高亲和力受体。由β和γ亚基组成的二聚体IL-2受体称为中等亲和力IL-2R。α亚基形成单体低亲和力IL-2受体。尽管二聚体中等亲和力IL-2受体以比三聚体高亲和力受体低约100倍的亲和力结合IL-2，但二聚体和三聚体IL-2受体变体均能在结合IL-2后传递信号(Minami等,AnnuRevImmunol11,245-268(1993))。因此，α-亚基CD25不是IL-2信号传导必需的。它赋予其受体高亲和力结合，而β亚基CD122和γ亚基对于信号转导是至关重要的(Krieg等,ProcNatlAcadSci107,11906-11(2010))。包含CD25的三聚体IL-2受体由(静息的)CD4+叉头框(forkheadbox)P3(FoxP3)+调节性T(T调节)细胞表达。它们在常规的活化T细胞上也被瞬时诱导，而在静息状态中，这些细胞仅表达二聚体IL-2受体。T调节细胞在体内一贯表达最高水平的CD25(Fontenot等,NatureImmunol6,1142-51(2005))。IL-2主要由活化的T细胞，尤其是CD4+辅助T细胞合成。它刺激T细胞的增殖和分化，诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的生成以及外周血淋巴细胞分化成细胞毒性细胞和淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞，促进T细胞表达细胞因子和细胞溶解分子，促进B细胞的增殖和分化以及通过B细胞的免疫球蛋白合成，并刺激天然杀伤(NK)细胞的生成、增殖和活化(例如综述于Waldmann,NatRevImmunol6,595-601(2009);Olejniczak和Kasprzak,MedSciMonit14,RA179-89(2008);Malek,AnnuRevImmunol26,453-79(2008))。其在体内扩充淋巴细胞群体和提高这些细胞的效应器功能的能力赋予IL-2以抗肿瘤效果，使得IL-2免疫疗法对于某些转移性癌症是一种有吸引力的治疗选择。因此，高剂量IL-2治疗已被批准用于患有转移性肾细胞癌和恶性黑素瘤的患者。然而，IL-2在免疫应答中具有双重功能，这在于它不仅介导效应细胞的扩充和活性，而且还至关重要地涉及维持外周免疫耐受。外周自体耐受下的主要机制是T细胞中IL-2诱导的活化诱导的细胞死亡(AICD)。AICD是一种完全活化的T细胞经由衔接细胞表面表达的死亡受体如CD95(也称为Fas)或TNF受体而经历程序性细胞死亡的过程。当经由T细胞受体(TCR)/CD3复合物用抗原再刺激在增殖期间表达高亲和力IL-2受体(在先前暴露于IL-2后)的抗原活化的T细胞时，诱导Fas配体(FasL)和/或肿瘤坏死因子(TNF)的表达，从而使细胞对Fas介导的凋亡易感。此过程是IL-2依赖性的(Lenardo,Nature353,858-61(1991))并且经由STAT5介导。通过T淋巴细胞中的AICD过程，不仅能对自体抗原建立耐受性，而且能对明显不是宿主构成的一部分的持续抗原如肿瘤抗原建立耐受。此外，IL-2还涉及外周CD4+CD25+调节性T(T调节)细胞的维持(Fontenot等,NatureImmunol6,1142-51(2005);D’Cruz和Klein,NatureImmunol6,1152-59(2005);Maloy和Powrie,NatureImmunol6,1171-72(2005))，该细胞也称为抑制性T细胞。它们抑制效应T细胞破坏其(自体)靶物，其经由细胞-细胞接触通过抑制T细胞辅助和活化，或经由释放免疫抑制性细胞因子如IL-10或TGF-β实现。显示T调节细胞的消减增强IL-2诱导的抗肿瘤免疫(Imai等,CancerSci98,416-23(2007))。因此，IL-2不是抑制肿瘤生长最优的，因为在存在IL-2的情况下，生成的CTL可以将肿瘤识别为自体并经历AICD或者免疫应答可以受到IL-2依赖性T调节细胞的抑制。与IL-2免疫疗法相关的别的关注是由重组人IL-2治疗产生的副作用。接受高剂量IL-2治疗的患者经常经历严重的心血管、肺、肾、肝、胃肠、神经学、皮肤、血液和系统性不利事件，这需要密切监测和住院患者管理。大多数的这些副作用可由所谓的血管(或毛细管)渗漏综合征(VLS)的形成解释，该综合征是血管通透性的病理学增加，导致多个器官中流体溢出(导致例如肺部和皮肤水肿以及肝细胞损伤)和血管内流体消减(导致血压降低和心率的补偿性升高)。在消除IL-2外，没有VLS的治疗。已在患者中测试低剂量IL-2方案以避免VLS，然而，这是以亚最佳的治疗结果为代价的。据信VLS是通过促炎性细胞因子如来自IL-2活化的NK细胞的肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放导致的，然而已经显示IL-2诱导的肺水肿起因于IL-2对表达低至中等水平的功能性αβγIL-2受体的肺内皮细胞的直接结合(Krieg等,ProcNatAcadSciUSA107,11906-11(2010))。已经采用数种办法来克服与IL-2免疫处理相关这些问题。例如，已发现IL-2与某些抗IL-2单克隆抗体的组合增强体内的IL-2治疗效果(Kamimura等,JImmunol177,306-14(2006);Boyman等,Science311,1924-27(2006))。在一种备选办法中，以各种方式突变体IL-2来降低其毒性和/或提高其功效。Hu等(Blood101,4853-4861(2003),美国专利公开文本No.2003/0124678)用色氨酸取代IL-2位置38的精氨酸残基以消除IL-2的血管通透性活性。Shanafelt等(NatureBiotechnol18,1197-1202(2000))已经将天冬酰胺88突变为精氨酸以比对NK细胞增强对T细胞的选择性。Heaton等(CancerRes53,2597-602本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.02.10 EP 11153964.9;2011.04.29 EP 11164237.71.一种突变体白介素-2(IL-2)多肽，其包含三处氨基酸突变，其中所述三处氨基酸突变在与SEQIDNO:1所示人IL-2的残基42、45和72对应的位置处，且其中所述在与人IL-2的残基72对应的位置处的氨基酸突变是氨基酸替代L72G，所述在与人IL-2的残基42对应的位置处的氨基酸突变是氨基酸替代F42A，且所述在与人IL-2的残基45对应的位置处的氨基酸突变是氨基酸替代Y45A。2.权利要求1的突变体白介素-2多肽，其进一步包含在对应于人IL-2残基3的位置处消除IL-2的O-糖基化位点的氨基酸突变。3.权利要求2的突变体白介素-2多肽，其中所述在对应于人IL-2残基3的位置处消除IL-2的O-糖基化位点的氨基酸突变是选自下组的氨基酸替代：T3A、T3G、T3Q、T3E、T3N、T3D、T3R、T3K和T3P。4.权利要求3的突变体白介素-2多肽，其中所述在对应于人IL-2残基3的位置处消除IL-2的O-糖基化位点的氨基酸突变是氨基酸替代T3A。5.权利要求4的突变体白介素-2多肽，其中所述突变体IL-2多肽包含SEQIDNO:19的序列。6.权利要求1至5中任一项的突变体白介素-2多肽，其中所述突变体IL-2多肽与非IL-2模块连接。7.权利要求1至5中任一项的突变体白介素-2多肽，其中所述突变体IL-2多肽与第一和第二非IL-2模块连接。8.权利要求7的突变体白介素-2多肽，其中所述突变体IL-2多肽与所述第一非IL-2模块共享羧基端肽键，且与所述第二非IL-2模块共享氨基端肽键。9.权利要求6的突变体白介素-2多肽，其中所述非IL-2模块是抗原结合模块。10.权...
【专利技术属性】
技术研发人员：O阿斯特，P布鲁恩克，A弗雷莫瑟格伦德肖伯，S赫托，TU霍佛，R霍斯，C克莱因，E莫伊斯纳，VG尼科里尼，P尤马纳，
申请(专利权)人：罗切格利卡特公司，
类型：
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