多重实时荧光定量PCR技术快速检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌制造技术

多重实时荧光定量PCR技术快速检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌，属于生物技术领域。设计基于TaqMan探针的qPCR引物，如序列表SEQ ID NO.1～12所示。提供基于Taqman探针的双重(act+ast,alt+hly)和三重实时荧光定量PCR(act+ast+alt)检测技术体系，可快速定性和定量检测肠毒性和溶血性致病性气单胞菌，实现全封闭检测无污染、扩增实时可定量、同一个反应体系里同时扩增多个靶标等目标，为致病性气单胞菌的快速检测和风险评估提供一种无污染、可定量、灵敏度高、特异性好的多重实时荧光定量方法体系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，尤其是涉及一种基于taqman探针法的多重实时荧光定量pcr技术快速检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌。

技术介绍

1、鳗鲡(anguilla spp)是我国重要的名贵经济鱼类，目前已形成集养殖、饲料生产、产品加工与出口等较为成熟的产业链。然而，在高密度集约化的鳗鲡养殖过程中，由气单胞菌引起的鳗鲡出血性败血症、肠炎、赤皮、溃疡等疾病时有发生，对鳗鲡产业危害严重，并造成巨大经济损失。研究表明，鳗鲡致病性气单胞菌的种类繁多，主要有嗜水气单胞(aeromonas hydrophila)、维氏气单胞菌(a.veroni)、豚鼠气单胞菌(a.caviae)、温和气单胞菌(a.sobria)等。在养殖过程中发现，同种气单胞菌的不同菌株感染鳗鲡后，鳗鲡病症表现不同；相反，不同种气单胞菌感染鳗鲡后，有时却表现出相似的症状。这主要是因为不同气单胞菌所携带的毒力因子的种类和数量不同，导致其致病力强弱、临床症状以及其所造成的经济损失等也明显不同。携带毒力因子的气单胞菌还可通过水产动物和水产品的介导，引起人畜腹泻和食物中毒。为此，建立快速、便捷、高效的致病性气单胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.同时检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌的引物和探针组合，其特征在于所述引物和探针组合包括由细胞毒性肠毒素act、耐热细胞肠毒素ast、不耐热细胞肠毒素alt和溶血素hly的正向引物F、反向引物R及探针引物P共12条组成，如序列表SEQ ID NO.1～12所示，相应序列具体如下：

2.同时检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌相关毒力基因的多重实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于包括如权利要求1所述引物和探针组合。

3.如权利要求2所述同时检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌相关毒力基因的多重实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于其用于检测致病性气单胞菌溶血相关的肠毒素基因act...

【技术特征摘要】

1.同时检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌的引物和探针组合，其特征在于所述引物和探针组合包括由细胞毒性肠毒素act、耐热细胞肠毒素ast、不耐热细胞肠毒素alt和溶血素hly的正向引物f、反向引物r及探针引物p共12条组成，如序列表seq id no.1～12所示，相应序列具体如下：

2.同时检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌相关毒力基因的多重实时荧光定量pcr试剂盒，其特征在于包括如权利要求1所述引物和探针组合。

3.如权利要求2所述同时检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌相关毒力基因的多重实时荧光定量pcr试剂盒，其特征在于其用于检测致病性气单胞菌溶血相关的肠毒素基因act、ast、alt及溶血素基因hly四种毒力基因的检测；包括双重pcr检测试剂盒和三重pcr检测试剂盒；

4.基于taqman探针的双重和三重实时荧光定量pcr检测方法，其特征在于包括以下步骤：

5.如权利要求4所述基于taqman探针的双重和三重实时荧光定量pcr检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述设计基于taqman探针的qpcr引物探针组合，具体步骤为：

6.如权利要求4所述基于taqman探针的双重和三重实时荧光定量pcr检测方法，其特征在于在步骤2)中，所述双重act+ast、alt+hly和三重act+ast+alt实时荧光定量pcr的反应体系：体积15～50μl，引物与探针浓度比为1︰1～5︰1；引物浓度为10μmol/l，体积为0.1～0.8μl；探针浓度为10μmol/l，...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊静，黄文树，黄艺馨，邓睿，李林益，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：