【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种含有虫草素的哺乳动物精子培养基及其应用。
技术介绍
1、精子获能是受精的前提条件，排出体外的雄性精子没有受精能力，只有在雌性生殖道中经历生理生化变化，才能获得使卵子受精的能力，这个过程称为精子获能。完成获能的精子表现出超激活运动，鞭打频率加快，头侧摆幅加大，帮助精子穿透卵子；另一方面，获能后的精子可以发生顶体反应，精子头部胞吐顶体酶，帮助穿透卵子周围的卵丘细胞和透明带，完成精卵融合过程。
2、目前我国育龄夫妇不孕不育发病率逐年攀升，辅助生殖技术(如人工授精、体外受精胚胎移植等)已成为治疗不孕不育的常规技术。而在动物育种领域，也会用到人工授精等技术。这些技术均涉及成熟精子体外培养过程，即在体外模拟雌性生殖道环境，在体外进行精子获能培养，提高精子获能成功率对最终受精过程至关重要。
3、现有技术中，精子体外培养通常使用传统的输卵管液培养基、bww培养基、ham’sf-10培养基等，这些培养基安全无毒，对于精子具有一定的营养支持和保护作用，但使用这些培养基培养后，精子获能成功率以及相关功能指标因人而异，有时获能后精子的顶体反应率和超激活运动率并不高，可能影响最终受精率和受孕率。
4、公开号为cn117247896a的中国专利文献公开了一种提高大鼠体外受精效率的培养液组合，培养液组合由精子获能培养液和精卵结合培养液组成，其中精子获能培养液组成为：基础培养基，甲基-β-环糊精0.5～1.2mmol/l，聚乙烯醇0.8～1.5g/l，抗生素适量，其中聚乙烯醇可减少大鼠胚胎在体
5、公开号为cn104046590a的中国专利文献公开了一种稀少精子体外培养液，含有以下组分：氯化钠、氯化钾、硫酸镁、磷酸钾、乳酸钙、碳酸氢钠、葡萄糖、丙酮酸钠、谷氨酰胺、牛磺酸、己酮可可碱、l-天冬酰酸、l-天冬氨酸、甘氨酸、l-脯氨酸、l-丝氨酸、依地酸、庆大霉素、酚红。该培养液特别适用于临床严重少、弱精子症、睾丸及附睾获取的精子样本体外处理和培养，以提高少、弱精子和睾丸精子的运动能力。
6、虫草素，是中药蛹虫草中提取的生物活性物质，化学式为c10h13n5o3，能溶于水、乙醇，其分子量为251.24g/mol，作为一种嘌呤类生物碱，虫草素具有一定的抗肿瘤、抗菌、消炎、抗病毒等作用，在美国已进入相关疾病治疗的临床研究；公开号为cn110432258a的中国专利文献公开了虫草素用于制备山羊精子冷冻保存用稀释液的应用，该专利技术通过对比实验结果表明，虫草素的添加能够在精液降温、冷冻保存和解冻过程中对精子起到保护作用，减少损伤。但是目前还没有虫草素用于体外精子获能培养、改善受精的研究。
技术实现思路
1、针对现有成熟精子培养的缺陷和不足，本专利技术提供了一种含有虫草素的哺乳动物精子培养基，利用该含有虫草素的哺乳动物精子培养基对哺乳动物精子进行获能培养，能够提高精子运动能力，尤其是提高精子获能后的超激活运动，增加顶体反应率，有助于后续受精过程。
2、具体采用的技术方案如下：
3、一种含有虫草素的哺乳动物精子培养基，由基本培养基和虫草素组成，虫草素的浓度为5μm-500μm；
4、所述的基本培养基包括人输卵管液htf培养基、精子细胞bww培养基或含牛血清白蛋白的ham’s f-10培养基等。
5、优选的，虫草素的浓度为20μm-500μm。
6、进一步优选的，虫草素的浓度为100μm-500μm。上述浓度范围内的虫草素能够显著改善精子运动，提高精子摆动性，帮助穿透卵子。
7、优选的，所述的基本培养基为人输卵管液htf培养基，所述的人输卵管液htf培养基的组成包括：nacl 5.260g/l、kcl 0.377g/l、nahco32.125g/l、cacl2 0.265g/l、kh2po40.159g/l、mgso4 0.249g/l、hepes 4.766g/l、丙酮酸钠0.030g/l、乳酸钠2.422g/l、葡萄糖1.102g/l、牛血清白蛋白4.000g/l和酚红0.005g/l，ph 7.4。
8、本专利技术还提供了所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基在哺乳动物精子获能培养中的应用。
9、本专利技术还提供了一种非疾病治疗目的的哺乳动物精子培养方法，利用所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基，包括以下步骤：
10、(1)采集精液样品，将精液样品液化后密度梯度离心，得到纯化后的精子样本；
11、(2)将纯化后的精子样本加入到所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基中获能培养。
12、实验结果表明，在基本培养基(如人输卵管液htf培养基等)中添加虫草素，使精子与虫草素接触，进行一段时间的体外获能培养，能够显著增加精子超激活运动率和顶体反应比例。
13、优选的，所述的密度梯度离心方法为：将液化后的精液样品加入到不连续密度梯度percoll液面上，离心收集下层沉淀，洗涤，再次离心收集下层沉淀，得到纯化后的精子样本。
14、优选的，精子在所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基中的浓度为10×106-30×106个/ml。
15、进一步优选的，精子在所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基中的浓度为20×106个/ml。
16、精子体外获能培养时间根据不同物种而有所不同，具体的，所述的获能培养时间为1-7h。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
18、(1)虫草素能溶于水，生物安全性好，本专利技术提供的含有虫草素的哺乳动物精子培养基中，虫草素可直接溶于培养基，避免使用dmso或乙醇等有机溶剂的影响，排除有机溶剂对精子的毒害作用。
19、(2)利用本专利技术提供的含有虫草素的哺乳动物精子培养基对哺乳动物精子进行获能培养，能显著增加精子超激活运动率和顶体反应比例，有助于后续受精过程，改善辅助生殖，在动物育种研究中具有较好的应用前景。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，由基本培养基和虫草素组成，虫草素的浓度为5μM-500μM；
2.根据权利要求1所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，虫草素的浓度为20μM-500μM。
3.根据权利要求1所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，虫草素的浓度为100μM-500μM。
4.根据权利要求1所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，所述的基本培养基为人输卵管液HTF培养基，所述的人输卵管液HTF培养基的组成包括：NaCl 5.260g/L、KCl 0.377g/L、NaHCO3 2.125g/L、CaCl2 0.265g/L、KH2PO4 0.159g/L、MgSO4 0.249g/L、HEPES 4.766g/L、丙酮酸钠0.030g/L、乳酸钠2.422g/L、葡萄糖1.102g/L、牛血清白蛋白4.000g/L和酚红0.005g/L。
5.根据权利要求1-4任一所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基在哺乳动物精子获能培养中的应用。
6.一种非疾病治疗目的的
7.根据权利要求6所述的非疾病治疗目的的哺乳动物精子培养方法，其特征在于，所述的密度梯度离心方法为：将液化后的精液样品加入到不连续密度梯度Percoll液面上，离心收集下层沉淀，洗涤，再次离心收集下层沉淀，得到纯化后的精子样本。
8.根据权利要求6所述的非疾病治疗目的的哺乳动物精子培养方法，其特征在于，精子在所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基中的浓度为10×106-30×106个/mL。
9.根据权利要求6所述的非疾病治疗目的的哺乳动物精子培养方法，其特征在于，精子在所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基中的浓度为20×106个/mL。
10.根据权利要求6所述的非疾病治疗目的的哺乳动物精子培养方法，其特征在于，所述的获能培养时间为1-7h。
...【技术特征摘要】
1.一种含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，由基本培养基和虫草素组成，虫草素的浓度为5μm-500μm；
2.根据权利要求1所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，虫草素的浓度为20μm-500μm。
3.根据权利要求1所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，虫草素的浓度为100μm-500μm。
4.根据权利要求1所述的含有虫草素的哺乳动物精子培养基，其特征在于，所述的基本培养基为人输卵管液htf培养基，所述的人输卵管液htf培养基的组成包括：nacl 5.260g/l、kcl 0.377g/l、nahco3 2.125g/l、cacl2 0.265g/l、kh2po4 0.159g/l、mgso4 0.249g/l、hepes 4.766g/l、丙酮酸钠0.030g/l、乳酸钠2.422g/l、葡萄糖1.102g/l、牛血清白蛋白4.000g/l和酚红0.005g/l。
5.根据权利要求1-4任一所述的含有虫草...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙培蓓，单丽君，倪崖，李坤，柴宇豪，高临玫，
申请(专利权)人：杭州医学院，
类型：发明
国别省市：
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