本发明专利技术公开了一种分离昆虫内生细菌的专用培养基及其制备方法，该其配方具体为：黄粉虫干粉2g，酵母粉1g，吉兰糖胶3g，海藻糖0.5g，NaCl9g，胡萝卜浸汁100ml，琼脂粉18g，蒸馏水定容至1000ml，自然pH。本发明专利技术培养基整体上选料精当，制备过程通俗易懂，便于操作，制得的培养基品相好，既适合细菌的分离培养，也可用于划线纯化培养。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程
，涉及一种分离昆虫内生细菌的专用培养基及其制 备方法。
技术介绍
生物资源是指对人类具有实际或潜在用途或价值的遗传资源、生物体或其部分、 生物群体或生态系统中任何其他生物组成部分。不断的拓展和开发生物资源是当今社会发 展的必然趋势和选择，对微生物来源的生物资源开发一直是研宄的热门领域，其中昆虫内 生源来源的微生物资源日益得到人们的重视，因为自然界不存在无菌动物，作为动物界群 体的重要组成部分，昆虫种类多、分布广、生态型丰富，具有巨大的内生菌资源有待开发。微 生物蛋白酶资源的开发利用在整个微生物资源中占有关键的地位，无论在数量上和多样性 组成上，蛋白酶资源都占有主导地位，是主要的工业酶，占世界市场的65%以上，而昆虫内 生菌是昆虫和各类微生物经过长期的协同进化形成的一种稳定的共生或寄生关系，所以内 生菌产生的各类生物活性物质对动物往往无毒或毒性极低，与其他微生物来源的活性物质 相比较，这是非常重要的优势，但昆虫内生菌资源开发利用的关键前提之一仍然是资源菌 株的有效分离和培养，昆虫内生环境的多样性，决定了分离和培养内生菌的培养基也不能 千篇一律，所以不断创新和开发昆虫内生菌资源的培养基，具有重要的现实意义和实践价 值，是开展相关研宄的关键性基础工作之一。 目前，各类文献报道的昆虫内生细菌固体平板分离培养基基本上都是借用了现有 的通用细菌培养基，即牛肉膏蛋白胨培养基，其配方如下： 牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂粉15-20g/L，蒸馏水定容至1 000ml， 自然pH7. 0-7. 2,121°C高压蒸汽灭菌20min。 上述技术方案中，采用牛肉膏蛋白胨培养基虽然可以分离出昆虫内生细菌，但存 在的问题也较为突出，这些不足集中体现在两个方面（1)作为最传统和常用的细菌培养基 配方，经过长时间的反复使用，已经很难再分离出稀有菌或非常见菌资源，很多时候无法达 到实验初衷；(2)牛肉膏蛋白胨培养基适用于一般细菌的分离培养，尤其是土壤样品、活性 污泥和水样等实验样品，对昆虫内生细菌则并没有很好的针对性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种分离昆虫内生细菌的专用 培养基及其制备方法，解决以下两个技术问题： (1)创新昆虫内生细菌分离的培养基配方，拓展资源微生物筛选途径；（2)提高筛 出菌株资源的多样性，减少和降低不必要的重复筛选，为稀有种类的筛出提供更多可能，丰 富昆虫内生菌开发利用理论。 其具体技术方案为： 一种分离昆虫内生细菌的专用培养基，其配方具体为：黄粉虫干粉2g，酵母粉lg， 吉兰糖胶3g，海藻糖0.5g，NaCl 9g，胡萝卜浸汁100ml，琼脂粉18g，蒸馏水定容至1 000ml， 自然pH。 进一步，所述胡萝卜浸汁l〇〇ml由300g红色胡萝卜制备所得。 -种本专利技术所述分离昆虫内生细菌的专用培养基的制备方法，按制备1000ml培 养基计，包括以下步骤：A.制备黄粉虫干粉：称取黄粉虫老熟幼虫适量，50°C烘干12h，用研钵研碎至无明 显颗粒，过200目筛，即得黄粉虫干粉；B.制备胡萝卜浸汁：称取红色胡萝卜300g，切成2cm3方块，用小型粉碎机粉碎后， 转移至三角瓶，加入蒸馏水200ml，180r/min，室温震荡混勾20min，最后用四层纱布过滤， 滤液再用砂芯过滤器二次过滤，即得所需胡萝卜浸汁，现用现做，置60°C烘箱保温；C.首先称取吉兰糖胶3g，用蒸馏水800ml缓慢溶解，再依次加入黄粉虫干粉2g，酵 母粉lg，海藻糖〇. 5g，NaCl9g，用蒸馏水定容至900ml，搅拌均匀后转入三角瓶，121°C条件 下高压蒸汽灭菌20min;当冷却至60°C左右时，在超净工作台中使用0. 22ym滤膜规格的针 头过滤器加入胡萝卜浸汁l〇〇ml，同方向轻柔转动混匀，即得昆虫内生细分离培养基。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果为： 本专利技术技术通过不断的探索、优化，摸索出了有效分离昆虫内生细菌的培养基配 方及其制备程序，丰富了昆虫内生菌分离筛选的方法和途径的多样性，在一定程度上提高 了稀有菌的出菌率，在实践中可行性强。 在本专利技术技术方案中，将黄粉虫老熟幼虫干粉引入培养基，是基于黄粉虫干品一 般含脂肪30%，蛋白质含量更是高达50%以上，还含有磷、钾、铁、钠、铝等常量元素和多种 微量元素，动物生长所必需的18种氨基酸，被誉为被誉为"蛋白质饲料宝库"。在培养基中 黄粉虫丰富的营养物质与配方中的酵母粉互为补充，旨在提高对昆虫内生菌生长需求的广 谱适应性；配方中添加的吉兰糖胶和海藻糖有刺激细胞生长、保护弱势菌株、降低菌体死亡 率和增强适应性的作用，对尽可能的分离出不同种类昆虫内生菌，提高菌株的多样性和生 长状况帮助很大。 胡萝卜被誉为"小人参"，其鲜品浸汁是一种天然的营养液，它的添加，是对培养基 因高温灭菌而丧失掉的部分营养元素如胡萝卜素、活性多糖、维生素C、维生素E等的有益 补充和平衡。对保存和提高昆虫内生菌代谢的生理活性和存活几率起着积极作用。 因生境渗透压的变化而导致一些菌群死亡、消失，是各类环境样品分离、筛选微生 物资源共同面临的问题之一，活体昆虫内生菌的生境更是一个复杂的体系，所以，昆虫内生 菌的分离和培养过程中，培养基渗透压的调控尤为重要。因此，培养基中添加了终浓度为 0. 9%氯化钠成分，旨在与生理盐水的浓度保持一致，缓冲因生境的变化对内生菌生长的影 响。 本专利技术培养基整体上选料精当，制备过程通俗易懂，便于操作，制得的培养基品相 好，既适合细菌的分离培养，也可用于划线纯化培养。另外，对其它类型动物内生细菌的分 离培养也有很好的借鉴意义。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。 实施例1昆虫内生细菌分离培养的培养基配方（1000ml): 黄粉虫干粉2g，酵母粉lg(G0961，生工生物工程（上海）有限公司），吉兰糖胶 3g(EZ0001，上海伊卡生物技术有限公司），海藻糖0. 5g(TB0966,生工生物工程（上海）有 限公司），胡萝卜浸汁l〇〇ml(由300g红色胡萝卜制备），NaCl9g(分析纯，西陇化工），琼 脂粉16g(01-023,北京奥博星生物技术有限公司），蒸馏水定容至1 000ml，自然pH。 实施例2培养基的配制过程：A.制备黄粉虫干粉：称取黄粉虫老熟幼虫适量，50°C烘干12h，用研钵研碎至无明 显颗粒，过200目筛，即得黄粉虫干粉。B.制备胡萝卜浸汁：称取红色胡萝卜300g，切成2cm3方块，用小型粉碎机粉碎后， 转移至三角瓶，加入蒸馏水200ml，180r/min，室温震荡混勾20min。最后用四层纱布过滤， 将滤液用砂芯过滤器二次过滤，即得所需胡萝卜浸汁，现用现做，置60°C烘箱保温。C.首先称取吉兰糖胶5g，用蒸馏水800ml缓慢溶解，再依次加入黄粉虫干粉2g，酵 母粉lg，海藻糖〇. 5g，NaCl9g，用蒸馏水定容至900ml，搅拌均匀后转入三角瓶，121°C条件 下高压蒸汽灭菌20min;当冷却至60°C左右时，在超净工作台中使用0. 22ym滤膜规格的针 头过滤器加入胡萝卜浸汁l〇〇ml。同方向轻柔转动混匀，即得昆虫内生菌细菌分离培本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离昆虫内生细菌的专用培养基，其特征在于，其配方具体为：黄粉虫干粉2g，酵母粉1g，吉兰糖胶3g，海藻糖0.5g，NaCl 9g，胡萝卜浸汁100ml，琼脂粉18g，蒸馏水定容至1000ml，自然pH。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙会忠，宋月芹，王小东，董钧锋，纠敏，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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