一种用于五种细菌的复合增菌培养基及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养基及其制备方法，该培养基组分包括：牛脑浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化钠2.5-7.5份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二钠1.5-3.5份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，七叶苷1-3份，蒸馏水1000份，pH值为7.2-7.5。制备方法包括：按照配方将各成分加入蒸馏水中，搅拌溶解，调节pH值，高压灭菌。五种细菌是我国食品卫生标准中需检测的主要致病菌。使用本发明专利技术所述复合增菌培养基，能够实现五种致病菌的快速增殖。增菌16小时，菌体浓度可由1CFU/mL增至106CFU/mL~109CFU/mL，可直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量检测，完成上述五种病原菌的筛查。

【技术实现步骤摘要】
一种用于五种细菌的复合增菌培养基及其制备方法
本专利技术属于致病菌的前增菌培养基，特别是涉及到一种同时对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基及其制备方法。
技术介绍
食源性致病菌是食物中毒和食源性疾病暴发的重要因素，是食品安全的重要风险隐患。据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)报道，全球每年发生腹泻病的病例数高达1.5亿，其中70%病例与各种致病性微生物污染的食品有关。我国研究资料显示，微生物病原引起的食源性疾病占46.4%，严重危及人们的健康，造成重大经济损失。沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌是食源性疾病的主要致病菌，是食品安全风险预测和危害评估中重要监测项目。目前我国食品安全标准检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌时，需要经过前增菌、选择性增菌、分离培养、生化鉴定、和血清学鉴定等步骤。培养基品种繁多，操作麻烦，工作量大，耗时长，无法满足现代检测快速、高通量的要求，给食品生产企业和质检单位造成较大压力。所以在食品安全问题日益被人们所重视的今天，研制出满足快速检测的多种致病菌复合增菌培养基迫在眉睫。关于多种致病菌复合增菌培养基的研究，近年来已受到国内外研究人员的广泛关注。Hyochin等研制的选择性营养肉汤(SEL)，可同时富集沙门氏菌、大肠埃希氏菌和单增李斯特菌，当接种量为102CFU/mL，经过12h复合培养后，菌体浓度可达到106～108CFU/mL，可直接应用于多重PCR扩增(HyochinKimandArunK.Bhunia.SEL,aSelectiveEnrichmentBrothforSimultaneousGrowthofSalmonellaenterica,EscherichiacoliO157H7,andListeriamonocytogenes[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2008,74(15):4853-4866.)；翁思聪等研制的选择性增菌肉汤(SSSV)，可同时富集沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌，当接种量为102CFU/mL，经过8h复合培养后，菌体浓度可达到105～106CFU/mL，可直接应用于多重PCR扩增（翁思聪,朱军莉,冯立芳,励建荣.1种选择性富集沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌共增菌培养基SSSV研究[J].中国食品学报2013,13(1):19-28.）；刘园园等研制的选择性增菌肉汤(SSL)，可同时培养沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌，当接种量为102CFU/mL，经过24h复合培养后，菌体浓度可达到107～108CFU/mL，可直接应用于荧光PCR扩增（刘园园,肖性龙,余以刚,陈谷,李晓凤,唐语谦,吴晖.一种能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的培养基[J].微生物学报,2009,49(10):1389–1396.）。此外，还有UPB（通用预增菌肉汤）、BPW(缓冲蛋白胨水)、NB（营养肉汤）等通用培养基，可同时增殖多种细菌，但还没有适用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌五种致病菌且组分简单、制备简便的复合增菌培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可同时培养沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基，适用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量检测，用于所述五种病原菌的筛查。本专利技术的目的通过如下技术方案实现：一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养基，以质量份数计，其原料配方组成为：牛脑浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化钠2.5-7.5份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二钠1.5-3.5份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，七叶苷1-3份，蒸馏水1000份，pH值为7.2-7.5。一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养基，以质量份数计，其优选配方为：牛脑浸出粉7.5份，牛心浸出粉10份，蛋白胨10份，氯化钠5份，葡萄糖2份，磷酸氢二钠2.5份，甘露醇2份，丙酮酸钠2份，甘氨酸2份，七叶苷2份，蒸馏水1000份，pH值为7.4。本专利技术的又一个目的是提供一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养基的制备方法，所述方法由以下步骤组成：（1）按照配方将牛脑浸出粉、牛心浸出粉、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、甘露醇、丙酮酸钠、甘氨酸和七叶苷加至蒸馏水中，搅拌溶解；（2）用10mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.2-7.5；（3）121℃高压灭菌15-20min，4℃保存。本专利技术提供一种沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌菌复合增菌培养基及其制备方法，所述五种细菌在该复合培养基中，能够实现同时快速增殖。增菌16小时，菌体浓度可由1CFU/mL增至106CFU/mL~109CFU/mL，即可直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量检测，用于上述五种病原菌的筛查。具体实施方式实施例1称取牛脑浸出粉5g，牛心浸出粉15g，蛋白胨5g，氯化钠2.5g，葡萄糖3g，磷酸氢二钠1.5g，甘露醇1g，丙酮酸钠1g，甘氨酸3g，七叶苷1g，蒸馏水1000ml，搅拌溶解后，用10mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.2，121℃高压灭菌15min，4℃保存。将菌体浓度均为109CFU/mL的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌培养液分别稀释107倍，然后分别取100µL，接入10mL制备好的用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌培养基，使培养基中各菌体浓度为1CFU/mL，37℃培养16h，取增菌培养后的增菌液100µL，适当稀释后分别涂布到沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌选择性培养基平板，进行分离培养。根据五种病原菌在平板上的特征菌落进行计数，结果见表1。表1复合增菌培养基增菌效果菌种名称接菌浓度（CFU/mL）16h培养物菌体浓（CFU/mL）大肠杆菌12.3×109沙门氏菌12.1×109副溶血性弧菌11.9×108单增李斯特菌11.7×106金黄色葡萄球菌11.3×106从表1中可知，经过16h的增菌，五种菌的菌体浓度由1CFU/mL增至106CFU/mL~109CFU/mL，满足后期检测需要。实施例2称取牛脑浸出粉10g，牛心浸出粉5g，蛋白胨15g，氯化钠7.5g，葡萄糖1g，磷酸氢二钠3.5g，甘露醇3g，丙酮酸钠3g，甘氨酸1g，七叶苷3g，蒸馏水1000ml，搅拌溶解后，用10mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.5，121℃高压灭菌17min，4℃保存。将菌体浓度均为109CFU/mL的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌培养液分别稀释107倍，然后分别取100µL，接入10mL制备好的本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基，其特征在于，以质量份数计，其原料配方组成为：牛脑浸出粉5‑10份，牛心浸出粉5‑15份，蛋白胨5‑15份，氯化钠2.5‑7.5份，葡萄糖1‑3份，磷酸氢二钠1.5‑3.5份，甘露醇1‑3份，丙酮酸钠1‑3份，甘氨酸1‑3份，七叶苷1‑3份， 蒸馏水1000份，pH值为7.2‑7.5。

【技术特征摘要】
1.用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基，其特征在于，以质量份数计，其原料配方组成为：牛脑浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋白胨5-15份，氯化钠2.5-7.5份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二钠1.5-3.5份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，七叶苷1-3份，蒸馏水1000份，pH值为7.2-7.5。2.根据权利要求1所述的用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌复合增菌的培养基，其特征在于：以质量份数计，其配方为牛脑浸出粉7.5份，牛心...

【专利技术属性】
技术研发人员：张岩，刘铭，李云，葛少林，邢婉丽，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，清华大学，广东粤检生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11